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QuantiFast Probe RT-PCR Plus Kit

使用序列特异性探针进行一步法快速RT-PCR,并去除基因组DNA

  • 含独有的基因组DNA去除缓冲液,确保准确的基因表达分析
  • 十分适合分析FFPE样本中降解的短RNA
  • 同步检测两个目标RNA,灵敏度高
  • 含有即用型一步法real-time RT-PCR预混液
  • 适用于多种PCR仪的快速通用型实验方案

QuantiFast Probe RT-PCR Plus Kit非常适合用于对多种来源的RNA,包括短的RNA片段进行基因表达分析(如福尔马林固定、石蜡包埋样本中的RNA)。使用探针检测,该试剂盒能对单管中的1到2个RNA靶标进行快速、一步法real-time RT-PCR定量检测(例如,使用与QuantiFast Probe Assays相同类型的水解作用[TaqMan]探针)。在real-time RT-PCR开始前的孵育步骤可有效去除基因组DNA污染,避免出现假阳性信号。该试剂盒还含有两管不同浓度的ROX染料,使其适用于各种real-time PCR分析仪。为便于使用,预混液可保存在2–8°C。

Cat No./ID: 204482
QuantiFast Probe RT-PCR Plus Kit (80)
For 80 x 25 µl reactions: 0.5 ml 2x QuantiFast Mix 1, 0.5 ml 2x QuantiFast Mix 2, 20 µl RT Mix, 210 µl ROX Dye Solution, 210 µl High-ROX Dye Solution, 1.9 ml RNase-Free Water
Cat No./ID: 204484
QuantiFast Probe RT-PCR Plus Kit (400)
For 400 x 25 µl reactions: 1.3 ml 2x QuantiFast Mix 1 (x 2), 1.3 ml 2x QuantiFast Mix 2 (x 2), 100 µl RT Mix, 210 µl ROX Dye Solution, 210 µl High-ROX Dye Solution, 1.9 ml RNase-Free Water

QuantiFast Probe RT-PCR Plus Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


0
QuantiFast Probe RT-PCR Plus Kit实验流程。
采用QuantiFast Probe RT-PCR Plus Kit步骤,可通过优化的孵育步骤有效避免基因组DNA污染。加入real-time RT-PCR预混液,逆转录,然后进行real-time PCR,所有步骤均在同一试管内进行。
5
高效去除基因组DNA,获得准确的基因表达分析结果。
使用RNeasy FFPE Kit从人的乳腺、肝脏或肾脏FFPE样本中纯化总RNA。使用QuantiFast Probe Assay (FAM标记) 和 [A] QuantiFast Probe RT-PCR Plus Kit或 [B] 另一种未整合gDNA去除步骤的多重PCR试剂盒,对不同表达水平的各种不同靶点进行双重real-time RT-PCR,包括 (+RT) 或不包括 (–RT) 逆转录步骤。在ABI StepOnePlus cycler上完成所有反应。[A] –RT样本的高CT值表明未扩增,且无基因组DNA污染。因此,+RT样本的CT值反映了可靠且准确的RNA检测。靶点12 (TUSC2) 和13 (EZH2) 未表达。结果显示QuantiFast Probe RT-PCR Plus Kit可有效去除基因组DNA。[B] –RT和+RT样本的CT值相当,说明检测到污染的基因组DNA,因此结果不可靠。
Performance
QuantiFast Probe RT-PCR Plus Kit能进行快速、灵敏的定量,甚至包括含有高度降解RNA的样本(参见"Highly efficient real-time RT-PCR detection of degraded RNA"),其基因组DNA残留量较高(参见"Efficient genomic DNA removal for accurate gene expression analysis")。
Principle

QuantiFast Probe RT-PCR Plus Kit含有特异性探针(如QuantiFast Probe Assays中的水解作用[TaqMan]探针),可对目标RNA进行快速、灵敏的扩增。在real-time RT-PCR开始前的孵育步骤可有效去除基因组DNA污染,确保RNA测量数据的准确性。基因组DNA的存在会导致CT值比真阳性值低,而出现假阳性信号。

参照和目标基因同时扩增,而不是在不同反应中分别扩增,这减少了人工操作误差,增加了基因扩增的可靠性。QuantiFast Probe RT-PCR Plus Kit在标准及快速循环仪上宽动态范围内均可获得快速、高灵敏度结果(参见"QIAGEN multiplex kits")。专门研发的快速PCR缓冲液包含创新的添加剂Q-Bond,显著减少了变形、退火、延伸时间(参见"Fast primer annealing")。通过使用专门的RT-PCR缓冲液,可确保一步法RT-PCR的高特异性和灵敏度,且省去了进行优化的时间。该缓冲液包含了K+和NH4+平衡组合,可加快特定引物的退火过程,且独特的Factor MP成分可稳定已结合的引物(参见"Unique PCR buffer")。此外,HotStarTaq Plus DNA Polymerase在一定温度下才会活化,防止了非特异性产物的生成。该试剂盒含有优化的RT预混液,可在20分钟内完成cDNA合成。该试剂盒含有两管不同浓度的ROX校准染料。ROX的浓度为优化浓度,因此可通过自动数据分析,实现对低拷贝RNA的检测。

QuantiFast Probe RT-PCR Plus Kit的组份
组份 特点 优势
QuantiFast RT-Mix 特殊的逆转录酶混合物对RNA有高亲和力,即使有复杂的次级结构 RNA可以在20分钟内转录,即使有复杂的次级结构
2x QuantiFast Mix 1
gDNA Wipeout Buffer 有效去除基因组DNA 只在qRT-PCR反应中检测RNA
2x QuantiFast Mix 2*
HotStarTaq Plus DNA Polymerase 95ºC孵育5分钟即可快速活化 在室温下启动qPCR反应
QuantiFast Probe RT-PCR Plus Reagents NH4+和K+的平衡组合 特异性引物退火确保可靠的PCR结果
合成的Factor MP 在同一管中对4个基因进行可靠的多通路分析
独特的Q-Bond添加剂 快速的PCR运行时间,获得较快的结果,每天进行较多的反应
* 还包含dNTP混合液(dATP、dCTP、dGTP和dTTP)。
Procedure

QuantiFast Probe RT-PCR Plus Kit含有即用型预混液,可减少优化试剂和反应条件的时间。按照操作手册中的实验方案进行操作,即可快速获得可靠结果(参见"QuantiFast Probe RT-PCR Plus Kit procedure")。

QuantiFast Probe Assays是初步设计的使用水解作用探针检测的全基因分析。QuantiFast Probe Assays与QuantiFast Probe RT-PCR Plus Kit联合应用于单重或多重一步法qRT-PCR,以获得可靠结果。

Applications

QuantiFast Probe RT-PCR Plus Kit非常适合用于对多种来源的样本包括FFPE组织样本和降解的RNA样本进行基因表达分析。该试剂盒可用于快速实时定量PCR分析仪和标准实时定量PCR分析仪,包括QIAGEN、Applied Biosystems、Bio-Rad、Cepheid、Eppendorf、Roche和Agilent的仪器。

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产品介绍与指南 (1)
Critical factors for molecular analysis of FFPE samples
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试剂盒操作手册 (2)
For quantitative, probe-based, real-time one-step RT-PCR with integrated genomic DNA removal
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For fast, real-time RT-PCR using sequence-specific, hydrolysis probes in combination with QuantiFast Kits
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