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miScript Target Protectors

通过干扰miRNA与靶基因间的相互作用,进行miRNA功能研究

  • 为miRNA的发现提供创新工具
  • 在miRNA调控实验中可直接转染
  • 对单个靶基因特异性保护,可准确进行功能研究
  • 提供用户订制服务,保护人类、小鼠或大鼠靶基因

miScript Target Protectors是经修饰的单链RNAs,可通过阻止某个miRNA与它的靶基因结合而实现特异性干扰,同时不会影响这个miRNA对其它靶基因的调控。miScript Target Protectors转染后,可分析表型或基因表达的变化,由此可研究单个靶基因以及特定miRNA的功能。

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miScript Target Protector
5 nmol cell-culture–grade target protector
219000 Varies Create and order

miScript Target Protectors适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


0
可靠的miRNA抑制。
miR-16在HeLa S3和MCF-7细胞中呈内源性表达。共转染带有miR-16结合位点的荧光素酶报告基因重组体及针对同一结合位点的不同量的miScript Target Protector。不同量的miScript Target Protector均可通过抑制miRNA的下调,使荧光素酶的表达水平显著增加。Neg. control:共转染Negative Control miScript Target Protector的荧光素酶重组体。Unregulated:无miR-16结合位点的荧光素酶重组体。使用Attractene Transfection Reagent进行共转染。
1
靶基因验证。
使用miR-29a miScript miRNA Mimic(10 nM)及Negative Control miScript Target Protector(Mimic)或者使用miR-29a miScript miRNA Mimic及针对DNMT3A的预测miR-29a结合位点的miScript Target Protector(1 µM)(Mimic + target protector),共转染MCF-7细胞。使用HiPerFect Transfection Reagent进行转染。转染48小时后,利用real-time RT-PCR进行DNMT3A表达分析。同时分析未转染细胞。Negative control:转染AllStars Negative Control siRNA和Negative Control miScript Target Protector。
2
miScript Target Protectors具有特异性。
miR-1可下调ADAR和HDAC4基因的表达。使用针对ADAR的miR-1结合位点的miScript Target Protector(1 µM、0.5 µM、0.1 µM或0.05 µM)及miR-1 miScript miRNA Mimic(10 nM)共转染HeLa细胞。使用HiPerFect Transfection Reagent进行转染。72小时后,利用western印迹检测ADAR表达(左)和HDAC4表达(右)。检测微管蛋白作为内部对照。同时分析未转染细胞(UT)。阴性对照(Neg.):共转染Negative Control miScript Target Protector和miR-1 miScript miRNA Mimic。针对ADAR的miR-1结合位点的miScript Target Protector可特异性地保护ADAR不受miR-1介导的表达下调影响,且不影响miR-1介导的HDAC4下调。
3
对调节BCL-2的miRNA的抑制。
使用针对BCL-2的miR-15a/miR-16结合位点的miScript Target Protector(500 nM或1 µM)及miR-16 miScript miRNA Mimic(10 nM)共转染MCF-7细胞。72小时后,利用western印迹检测BCL-2表达。使用模拟物和靶标保护剂转染的细胞的表达量较阴性对照有所增加。阴性对照(Neg.):共转染miR-16 miScript miRNA Mimic和Negative Control miScript Target Protector。同时检测微管蛋白作为内部对照。使用HiPerFect Transfection Reagent进行转染。
4
转染入miScript Target Protector后,基因型发生变化。
使用10 nM miR-9 miScript miRNA Mimic转染MCF-7细胞,或使用10 nM miR-9 miScript miRNA Mimic及1 µM针对细胞活性基因的miR-9结合位点的miScript Target Protector共转染MCF-7细胞。72小时后,利用光学显微镜检测细胞活性。使用HiPerFect Transfection Reagent进行转染。
Performance
特异性抑制miRNA对单个靶基因的调控

经修饰的miScript Target Protectors确保特异性、有效结合到目的miRNA结合位点。转染miScript Target Protector后,荧光素酶报告结构实验确保miRNA抑制的可靠性和可重复性(参见"Reliable miRNA inhibition")。miScript Target Protectors保护靶基因的miRNA结合位点,同时不会影响这个miRNA对其它靶基因的调控(参见"miScript Target Protectors are specific for the gene of interest")。

可靠验证miRNA-targeted基因

miScript Target Protectors用于验证基因是否被某个特定的miRNA调控。DNMT3A基因编码DNA甲基转移酶3,在发育和分化中起作用。TargetScan预测到DNMT3A的3' UTR上有miR-29a的单个结合位点。转染miR-29a miScript miRNA Mimic使DNMT3A基因表达下调,如real-time RT-PCR中所示,这表明miR-29a使DNMT3A在转染水平上表达下调。转染经TargetScan预测的miR-29a结合位点的miScript Target Protector,DNMT3A表达上升。这些实验表明DNMT3A被经TargetScan预测miR-29a结合位点负调控(参见"Target verification")。

蛋白质水平的miRNA调控

miRNA可使基因表达在转染水平或蛋白质水平下调。miScript Target Protectors可从两个水平抑制miRNA调控。人类的BCL-2可被2种内源性表达的miRNAs调控:miR-15a和miR-16。miR-15a和miR-16使用BCL-2 3' UTR上相同的结合位点。转染miScript Target Protector,使BCL-2表达在蛋白质水平上升(参见"Inhibition of miRNA regulation of BCL-2")。

miRNA调控对表型的影响

生命进程或信号通路受到影响,引起表型变化,如细胞形态变化或细胞活性变化。观察转染miScript Target Protector后细胞表型的变化,表明miRNA和靶基因在信号通路/生命进程中有关键作用。miR-9使对细胞活性有重要作用的基因表达下调。在MCF-7中,转染miR-9 miScript miRNA Mimic,引起细胞大量死亡。然而,miR-9 miScript miRNA Mimic和为基因mir-9结合位点设计的miScript Target Protector共转染,却没有细胞死亡。这表明miScript Target Protecto可抑制miR-9下调,细胞活性基因可以顺利表达(参见"Phenotype changes after miScript Target Protector transfection")。

Principle

miScript Target Protector是一种新型的工具,可有效识别不同基因调控的miRNAs的作用。还可保护特定靶基因的miRNA结合位点。转染后,miScript Target Protector可结合到miRNA结合位点上,阻止miRNA结合到该位点上,避免其使基因表达下调。

Procedure
转染miScript Target Protector后,可进行表型和基因表达分析。靶基因表达增强、信号模式变化或表型改变都表明miRNA和靶基因在目标信号通路或表型中。转染不同的miScript Target Protectors后,通过特定的表型分析确定各种信号通路中miRNAs的作用。

QIAGEN提供的miRNA功能分析产品还包括miScript miRNA Mimics,一种合成的miRNAs,和miScript miRNA Inhibitors,抑制特定miRNA的所有靶基因的功能。miScript miRNA Mimics和Inhibitors配合miScript Target Protectors使用,可有效识别并发现miRNA的功能。

阳性和阴性对照

使用Positive和Negative Control miScript Target Protectors便于实验设置以及结果分析。Negative Control miScript Target Protector与任何已知的哺乳动物基因都不具有同源性。Positive Control miScript Target Protector保护miR-15a和miR-16调控下内源表达的BCL-2。转染Positive Control miScript Target Protector作为阳性对照,以确定实验设置是否正确。

Applications

miScript Target Protectors配合miScript miRNA Mimics和Inhibitors可用于多种miRNA功能研究,包括:

  • 验证miRNA结合位点
  • 通路或生命进程中的miRNA功能研究
  • 研究靶基因调控
  • 微阵列等分析结果的验证
Features
Specifications
设计 Customer design
规格 Single tubes
规模或产量 5 nmol
提供的序列 No
物种 Human, mouse, rat

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