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miScript miRNA Inhibitors

使用miRNA抑制进行miRNA功能和基因调控的研究

  • 可直接用于转染的抑制剂,结合和抑制miRNAs
  • 基于miRBase中人类、小鼠和大鼠的miRNAs设计
  • 可灵活选择规格、包装和纯度
  • 为miRBase中未列出的miRNAs提供订制设计
miScript miRNA Inhibitors是化学合成的、经修饰的单链RNAs,转染到细胞后,可特异性抑制内源性miRNA的功能。提供细胞培养级纯度(>90%纯度)或动物级纯度(经HPLC纯化;用于体内实验)的miRNA抑制剂。另有经硫代磷酸酯修饰的miScript miRNA Inhibitors,可进行体内应用,提高分子的稳定性,规格为20 nmol。如需进行灵活的筛选实验,可选择miScript miRNA Inhibitor Plates,以96孔板或384孔板形式提供预制和用户定制miScript miRNA Inhibitors。在类似实验中,也可使用miScript miRNA Mimics。
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miScript miRNA Inhibitor
1 nmol (cell-culture grade), 5 nmol (cell-culture grade), or 20 nmol (animal grade, option of phosphorothioate modification) miScript miRNA Inhibitor, provided in tubes
219300 Varies Enter your targets in search box above.

miScript miRNA Inhibitors适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


0
miRNA Inhibitor在96个小时后的效能。
使用HiPerFect Transfection Reagent将miR-15a Inhibitor、miR-16 Inhibitor、miR-21 Inhibitor、miR-25 Inhibitor或含有错义序列的Inhibitor(阴性对照)转染至HeLa S3细胞(6 x 104个细胞/孔)。在指定的时间点,转染带有适当的miRNA结合位点的荧光素酶报告基因重组体。使用不受任何miRNA调控的报告基因重组体作为阳性对照。24小时后,检测荧光素酶活性。
1
miScript miRNA Inhibitor可抵消miRNA诱导的基因沉默。
HeLa S3细胞高水平表达miR-16,但不表达miR-1(参见参考文献1)。在使用HiPerFect Transfection Reagent进行的共转染实验中,采用3' UTR带有miR-16结合位点的荧光素酶报告基因重组体及miR-16 Inhibitor共转染HeLa S3细胞(6 x 104个细胞/孔)。实验使用不同浓度的miR-16 Inhibitor,以评估观察抑制效应所需的最佳抑制剂浓度。另外单独转染miR-1 Inhibitor至细胞,作为对照。转染不带miRNA结合位点的荧光素酶重组体(WT),作为阳性对照。转染Inhibitor后,荧光素酶表达增加,说明miR-16 Inhibitor可阻止内源性miR-16下调报告基因的表达。
1. Lagos-Quintana, M. et al.(2001)Identification of novel genes coding for small expressed RNAs. Science 294, 853.
2
转染miRNA抑制剂会降低内源性miRNA的水平。
使用HiPerFect Transfection Reagent将miScript miR-16 Inhibitor或阴性对照转染至HeLa S3细胞(6 x 104个细胞/孔)。使用miScript System,利用real-time PCR对内源性miR-16的水平进行定量。使用U6B作为对照RNA,用于数据标准化,miR-16的表达水平以相对于未转染细胞中的miR-16水平的2-ΔΔCT值表示。[A] 转染miScript miR-16 Inhibitor可显著降低检测到的内源性miR-16的水平。[B] 扩增曲线说明,转染miR-16 Inhibitor后,检测到的miR-16水平显著降低。解离曲线分析(插图)反映了使用miScript System进行real-time PCR检测的特异性。
Performance
miScript miRNA Inhibitors经修饰后,用于有效抑制内源性miRNA的功能(参见"miScript miRNA Inhibitor counteracts miRNA-induced silencing")。转染miScript miRNA Inhibitor后,Real-time PCR分析可检测到miRNA水平的显著下降(参见Transfection of miRNA inhibitor decreases endogenous miRNA level)。Time-course实验表明,miScript miRNA Inhibitors在转染后,能有效抑制至少96个小时(参见"miRNA inhibitor effective after 96 hours")。
Principle

抑制剂转染及下游基因表达分析或表型分析,用于确定特定miRNAs的靶向和作用。这些实验能够研究个体miRNAs失调的生物效应及确定作为个体miRNAs靶向的特异性基因。

抑制剂转染后基因表达增强表明研究中的miRNA由该基因调控。类似的研究也可使用miScript miRNA Mimics。一般而言,这样的实验都要涉及到模拟物或抑制剂的转染或与携带miRNA结合位点融合报告基因的载体结构共转染。下游分析包括报告分析、real-time PCR、微阵列分析或蛋白质分析。

Procedure

miScript miRNA Inhibitors提供高度灵活的溶液,适合当前版本microRNA数据库(miRBase)中的人类、小鼠、大鼠和病毒miRNA。QIAGEN's GeneGlobe数据库持续更新数据,确保模拟物和抑制剂与最新的miRBase中数据尽量匹配。确保得到高度准确、当前的miRNA序列信息。若miRBase中没有您所需的miRNA的数据,可访问QIAGEN的用户定制miScript产品设计页面,获取适合所需的人类、小鼠、大鼠或病毒miRNA订制合成信息。

可灵活选择规格,用少量抑制剂进行低通量分析或大量抑制剂进行高通量筛查实验。miScript miRNA Inhibitors提供细胞培养级纯度(>90%,由专门的合成和纯化流程提供)的抑制剂。用于体内实验,经HPLC纯化、动物级纯度的miScript miRNA Inhibitors也可订购得到,规格为20 nmol(以试管形式提供)。另有经硫代磷酸酯修饰的miScript miRNA Inhibitors用于体内实验,规格为20 nmol。硫代磷酸酯修饰避免抑制剂失去外切酶活性,提高分子的稳定性。miScript miRNA Inhibitors可在GeneGlobe上订购。对于中到高通量应用,提供96孔板或384孔板形式,满足您的要求。

Applications
  • miRNA研究
  • 基因调控研究
Features
Specifications
设计 Predesigned and custom design avaliable
规格 Single tubes, 96-well & 384 well plates
修饰 Yes, optional with 20 nmol: phosphorothiate modified for in vivo studies
规模或产量 1 nmol, 5 nmol, 20 nmol
提供的序列 No
物种 Human, mouse, rat
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