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QuantiTect Probe RT-PCR Kit

使用序列特异性探针进行一步法real-time RT-PCR,用于基因表达分析

  • 灵敏检测低拷贝数模板
  • 准确检测各种起始量的模板
  • 可用各种序列特异性探针,用于各种PCR仪
  • 无需优化反应和循环条件

QuantiTect Probe RT-PCR Kit使用序列特异性探针通过一步法real-time PCR对RNA目标序列进行灵敏的定量分析。即用型预混液使用热启动和独特的PCR缓冲液,无需优化即可在各种real-time PCR仪上进行高度灵敏的定量RT-PCR。dNTP混合液含有dUTP,可选择性进行UNG处理。为便于使用,预混液可储存在2–8°C。

Cat No./ID: 204443
QuantiTect Probe RT-PCR Kit (200)
For 200 x 50 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiTect Probe RT-PCR Master Mix, 100 µl QuantiTect RT Mix, 2 x 2 ml RNase-Free Water
Cat No./ID: 204445
QuantiTect Probe RT-PCR Kit (1000)
For 1000 x 50 µl reactions: 25 ml 2x QuantiTect Probe RT-PCR Master Mix, 0.5 ml QuantiTect RT Mix, 20 ml RNase-Free Water

QuantiTect Probe RT-PCR Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


2
高度灵敏且高效的反应。
在ABI PRISM 7900上使用QuantiTect Probe PCR Kit及人28S rRNA特异性的引物和HEX标记的探针分析10倍梯度稀释的HeLa细胞RNA(100 ng至1 pg)。在6 log模板稀释度范围内具有高PCR效率。
3
一步法RT-PCR的表现可与两步法RT-PCR相媲美— A。
在Mx3005上使用IL1R2(白介素1受体II型)特异性的引物和FAM标记的探针分析10倍梯度稀释的白细胞cDNA(100 ng至1 pg),反应重复两次。使用QuantiTect Probe PCR Kit进行两步法RT-PCR(PCR效率:101%)。
4
一步法RT-PCR的表现可与两步法RT-PCR相媲美— B。
在Mx3005上使用ILR2(白介素1受体II型)特异性的引物和FAM标记的探针分析10倍梯度稀释的白细胞RNA(100 ng至1 pg),反应重复两次。使用QuantiTect Probe RT-PCR Kit进行一步法RT-PCR(PCR效率:104%)。
Performance

QuantiTect Probe RT-PCR Kit含有独特的RT-PCR缓冲液,可促使引物高度特异性的退火并与PCR模板结合。含有的HotStarTaq DNA Polymerase与其他聚合酶相比,具有严格的热启动(参见"Highly specific amplification")。

QuantiTect Probe RT-PCR Kit包括HotStarTaq DNA聚合酶和独特的RT-PCR缓冲液,能够高灵敏度的定量检测低拷贝的RNA靶序列,在宽泛的范围内符合线性规律,实现准确定量检测(参见"High sensitivity and efficiency, and wide dynamic range")。在同一个管中连续进行逆转录和PCR不会影响灵敏度,通过与两步法real-time RT-PCR的CT值对比可证明(参见"One-step RT-PCR with comparable performance to two-step RT-PCR — A"和"One-step RT-PCR with comparable performance to two-step RT-PCR — B"及下表)。

一步法RT-PCR和两步法RT-PCR有相当的表现
cDNA/RNA的量 平均CT 平均CT
(两步法RT-PCR) (一步法RT-PCR)
100 ng 24.66 24.66
10 ng 28.15 27.84
1 ng 31.42 31.49
0.1 ng 34.80 34.56
0.01 ng 37.78 37.66
CT值来自图"One-step RT-PCR with comparable performance to two-step RT-PCR — A" 和"One-step RT-PCR with comparable performance to two-step RT-PCR — B"的两个扩增曲线。
Principle

QuantiTect Probe RT-PCR Kit含有优化的即用型预混液,可使用序列特异性探针对RNA靶序列进行高特异性和灵敏度的real-time定量分析。此试剂盒适用于各种类型的序列特异性探针,包括水解探针检测(如TaqMan和其他双标记探针)、FRET探针和Molecular Beacons。QuantiTect Probe RT-PCR Kit独特的PCR缓冲液含有浓度平衡的K+和NH4+,能促使特异性引物退火,获得高PCR特异性和灵敏度(参见"Specific primer annealing")。此外,优化的逆转录酶混合液可从不同量的RNA模板合成cDNA,而HotStarTaq DNA Polymerase具有严格的热启动,可防止非特异性产物的形成。

QuantiTect Probe RT-PCR Master Mix含有dUTP,可在PCR前使用尿嘧啶DNA糖基化酶 (UNG)预处理,保证污染的PCR产物不会影响后续的PCR反应。

2x QuantiTect Probe RT-PCR Kit的组份
组份 特点 优势
HotStarTaq DNA Polymerase 95ºC孵育15分钟即可活化 室温下即可构建qPCR反应体系
QuantiTect Probe RT-PCR Buffer NH4+和K+的平衡组合 特异性引物退火确保PCR结果可靠
dNTP mix 含有dUTP,会部分替代dTTP,可进行UNG处理 可选择进行UNG处理,以消除PCR产物中的残余污染物
ROX dye 在Applied Biosystems或Agilent的PCR仪上进行荧光信号校准 可在需要ROX染料的PCR仪上进行准确的定量检测。不会干扰其他real-time PCR仪
Omniscript and Sensiscript Reverse Transcriptases 多种酶,对RNA亲和性高 RNA、甚至是具有复杂二级结构的RNA均可实现转录
Procedure

QuantiTect Probe RT-PCR Kit无需优化反应条件。只需将引物、探针和RNA模板加入到即用型RT-PCR预混液中,即可开始反应(参见"One-step RT-PCR")。按照使用手册中的实验方案操作,即可快速获得可靠的结果,适用于各种real-time PCR仪。如果需要,可使用UNG进行预处理,去除上一反应残留的PCR产物。

Applications

QuantiTect Probe RT-PCR Kit可用在各种real-time PCR仪上对RNA目标序列进行基因表达分析,包括Applied Biosystems、Bio-Rad、Cepheid、Eppendorf、Roche和Agilent的仪器。在Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪上使用时,我们推荐专门为快速PCR研发的Rotor-Gene Probe RT-PCR Kit。

Features
Specifications
应用 Real-time quantification of RNA targets
反应类型 One-step RT-PCR
real-time或终点法PCR Real-time
样本/目标类型 RNA targets
单一或多重 Single
SYBR Green I或序列特异性探针 Sequence-specific probes
热循环仪 All real-time cyclers (e.g. LC, RG, ABI)
有/无ROX With ROX

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试剂盒操作手册 (1)
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