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QuantiFast Pathogen +IC Kits

灵敏、可靠的检测病毒RNA/DNA和细菌DNA,含有内参

  • 同时检测目标病原体和内参
  • 5x预混液具有更高的灵敏度,且起始样本量更大
  • 正确解读阴性信号,检测灵敏度更高
  • 清晰检测微弱的阳性信号
  • 快速的通用型实验方案适用于标准和快速PCR仪

QuantiFast Pathogen +IC Kits使用序列特异性探针,可灵敏、快速的对病原体核酸进行real-time PCR或一步法RT-PCR检测。该试剂盒含有检测4个用户定义的病原体核酸(如:病毒、细菌、真菌等)所需的试剂和内参,可对阴性结果进行正确解读,提高了检测灵敏度。该试剂盒有两种规格。QuantiFast Pathogen RT-PCR +IC Kit含有RNA内参模板和内参引物/探针对,用于检测病毒RNA。QuantiFast Pathogen PCR +IC Kit含有DNA内参模板和内参引物/探针对,用于检测病毒、细菌或真菌DNA。这两种试剂盒均提供分装在两个管中的不同浓度的ROX染料,因此适用于多种real-time PCR仪。为便于使用,预混液可存放在2–8°C。

Cat No./ID: 211352
QuantiFast Pathogen PCR +IC Kit (100)
For 100 x 25 µl reactions: Master Mix, lyophilized Internal Control Assay, lyophilized Internal Control DNA, ROX Dye Solution, High-ROX Dye Solution, RNase-Free Water, Nucleic Acid Dilution Buffer, Buffer TE
Cat No./ID: 211354
QuantiFast Pathogen PCR +IC Kit (400)
For 400 x 25 µl reactions: Master Mix, lyophilized Internal Control Assay, lyophilized Internal Control DNA, ROX Dye Solution, High-ROX Dye Solution, RNase-Free Water, Nucleic Acid Dilution Buffer, Buffer TE
Cat No./ID: 211392
Internal Control DNA (High conc.)
For approximately 200 preps (depending on the elution volume): Lyophilized Internal Control DNA, Nucleic Acid Dilution Buffer
Cat No./ID: 211452
QuantiFast Pathogen RT-PCR +IC Kit (100)
For 100 x 25 µl reactions: Master Mix, RT Mix, lyophilized Internal Control Assay, lyophilized Internal Control RNA, ROX Dye Solution, High-ROX Dye Solution, RNase-Free Water, Nucleic Acid Dilution Buffer, Buffer TE
Cat No./ID: 211454
QuantiFast Pathogen RT-PCR +IC Kit (400)
For 400 x 25 µl reactions: Master Mix, RT Mix, lyophilized Internal Control Assay, lyophilized Internal Control RNA, ROX Dye Solution, High-ROX Dye Solution, RNase-Free Water, Nucleic Acid Dilution Buffer, Buffer TE
Cat No./ID: 211492
Internal Control RNA (High conc.)
For approximately 200 preps (depending on elution volume): Lyophilized Internal Control RNA, Nucleic Acid Dilution Buffer

QuantiFast Pathogen +IC Kits适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


0
正确解读阴性结果。
在Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪上采用内对照,在不同量的PCR抑制物(腐植酸) 存在的条件下,对两种浓度的病毒RNA靶点进行共扩增,重复两次。[A] 无模板对照 (NTC) 作为内对照信号对照。[B] 病毒RNA靶点和内对照的扩增证明了扩增的成功。[C] 内对照显示有少量的抑制物存在。[D] 内对照检测失败说明在抑制物存在时扩增反应失败。
1
在Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪上灵敏检测BHV-1。
利用单重real-time PCR或双重real-time PCR检测梯度稀释的牛疱疹病毒1型 (100至10-4) 及内对照。在Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪上使用QuantiFast Pathogen PCR +IC Kit,参照试剂盒提供的实验方案进行real-time PCR,无需PCR优化。双重反应中包含固定量的内对照模板。重复分析各稀释度三次;如图显示了每种稀释度样本各一个。
2
灵敏检测Norovirus。
利用单重real-time RT-PCR或双重real-time PCR检测梯度稀释的诺如病毒RNA转录本 (100至10-5) 及内对照。在Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪上使用QuantiFast Pathogen RT-PCR +IC Kit进行real-time PCR,无需PCR优化。双重反应中包含固定量的内对照模板。重复分析各稀释度三次;如图显示了每种稀释度样本各一个。
3
在ABI 7500上灵敏检测BHV-1。
利用单重real-time PCR或双重real-time PCR检测梯度稀释的牛疱疹病毒1型 (100至10-4) 及内对照。在ABI 7500上使用QuantiFast Pathogen PCR +IC Kit,参照试剂盒提供的实验方案进行real-time PCR,无需PCR优化。双重反应中包含固定量的内对照模板。重复分析各稀释度三次;如图显示了每种稀释度样本各一个。
7
QIAGEN Internal Control。
同时抽提和/或扩增病原体靶点和内部阳性对照可以消除PCR抑制或其他可导致假阳性结果的问题,提高过程的安全性。在PCR扩增前加入QIAGEN Internal Control可提供扩增对照,或者在核酸抽提过程中加入高浓度的QIAGEN Internal Control,提供抽提和扩增对照。
8
单重和多重检测都具有高度线性契合度和准确性。
诺如病毒RNA单重检测和诺如病毒/IC双重检测的6-log范围显示了高精度和线性度。3次real-time RT-PCR重复结果误差为±1 SD。
9
对RNA标准品进行可靠的稀释和储存。
使用QuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer或不含RNA酶的纯水按说明制备连续10倍梯度稀释的RNA标准品(体外转录的RNA)。直接使用这些稀释样本作为模板或将其置于-20°C保存2或4周后进行一步法RT-PCR。使用QuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer稀释标准品可获得更低的CT值和更佳的稳定性。
Performance

QuantiFast Pathogen +IC Kits可通过多重扩增,同时检测病毒RNA或DNA、以及自带的内参(参见"Sensitive detection of Norovirus on the Rotor-Gene Q"和"High linearity and precision of singleplex and duplex detection")。实验方案专为快速PCR设计,适用于多数PCR仪,具有极高的可靠性(参见"Sensitive detection of BHV-1 on the Rotor-Gene Q"和"Sensitive detection of BHV-1 on the ABI 7500")。使用QuantiFast Pathogen +IC Kits同时扩增目标病原体和内参,提高了检测的可靠性,能够确保正确解读阴性结果(参见"Correct interpretation of negative results")。 

该试剂盒提供QuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer,可在稀释和反应体系构建时稳定RNA和DNA标准品,避免核酸损失。能够可靠的稀释标准品,进而用于核酸的定量检测,检测范围广,覆盖从低至高的CT值。该缓冲液能够确保标准品长期保存不降解(参见"Reliable dilution and storage of RNA standards")。

Principle

为避免假阴性结果,所有QuantiFast Pathogen +IC Kit都含有必须的试剂,可real-time检测病原体和内参。在同一反应中扩增内参和靶基因,提高了定量检测的可靠性,减少了手动操作可能产生的错误。

QuantiFast Pathogen +IC Kits可通过多重PCR灵敏、快速的进行real-time检测,或通过一步法RT-PCR检测病原体(参见"QIAGEN multiplex kits")。优化的预混液可确保PCR产物在多重扩增反应中以相同的效率和灵敏度扩增。特别研制的快速PCR缓冲液含有新型的添加剂Q-Bond,能够大幅度缩短变性、退火和延伸的时间(参见"Fast primer annealing")。浓度平衡的K+和NH4+离子、以及独特的Factor MP能够促进引物和探针与核酸模板特异性结合,确保PCR效率高(参见"Unique PCR buffer")。此外,配方独特的Sensiscript Reverse Transcriptase能确保病毒RNA的高度灵敏的逆转录,HotStarTaq Plus DNA Polymerase则提供严格的热启动,防止非特异性产物的形成。

QuantiFast Pathogen +IC Kit的组分
试剂盒组分特点 优势
5x QuantiFast Pathogen PCR Master Mix 浓缩的预混液 浓度高,专为灵敏的检测病原体而设计 可加入的模板体积更多,增加了灵敏度
HotStarTaq Plus DNA Polymerase 95ºC孵育5分钟激活 在室温进行qPCR反应体系构建
QuantiFast Pathogen Buffer 浓度平衡的NH4+和K+离子 引物探针的特异性结合确保获得可靠结果
合成的Factor MP 在单管中对至多4个基因进行多重分析
独特的Q-Bond添加物 PCR运行时间缩短,更快获得结果,一天内可完成更多PCR反应
Internal Control Assay Internal Control 模板 QuantiFast Pathogen PCR +IC Kit含有内参DNA模板 通用的DNA扩增对照能用于分析不同的病原体
QuantiFast Pathogen RT-PCR +IC Kit含有内参RNA 通用的RNA扩增对照能用于分析不同的病原体
Internal Control Assay 引物探针预混液(TaqMan探针)标记有MAX(相当于HEX、VIC等) 不会干扰引物
Additional kit components QuantiFast Pathogen RT Mix* 含有配方独特的Sensiscript Reverse Transcriptase 专为灵敏检测病原体RNA而设计
ROX Dye Solution 参照染料可用于Applied Biosystems 7500 real-time PCR仪的荧光信号校准。可选:可用于Stratagene仪器 准确定量检测需要使用ROX染料。不会干扰PCR反应
High-ROX Dye Solution 参照染料可用于Applied Biosystems 7900 PCR仪和StepOne real-time PCR仪的荧光信号校准
QuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer 缓冲液为专有配方,用于稀释和储存核酸标准品 在稀释和反应体系构建时稳定RNA和DNA标准品,避免核酸损失
* 仅QuantiFast Pathogen RT-PCR +IC Kits提供
Procedure

QuantiFast Pathogen +IC Kits通过简单的流程,即可检测病原体和内参。试剂盒含有即用型预混液,可real-time检测病毒RNA(一步法RT-PCR)或病毒、细菌和真菌DNA(PCR)。无需优化反应条件。只需将预混液与检测试剂(引物与探针)、Internal Control Assay和Internal Control DNA或RNA 混合。也可在样本纯化步骤中加入内参,然后加入不含RNase的纯水至反应混合液。将样本DNA或RNA加入后即可开始反应,适用于各种PCR仪。试剂盒使用手册含有优化的实验方案,适用于TaqMan探针和多种PCR仪。使用手册中还推荐了可用的染料。

所有QuantiFast Pathogen +IC Kit都含有Internal Control Assay和Internal Control DNA或RNA,可直接加入反应混合液,用作扩增对照。此外,也可在纯化过程中加入内参,作为纯化和扩增的对照。如需在纯化过程中加入内参,可另外订购高浓度的Internal Control DNA或RNA (High conc.) (参见"QIAGEN Internal Control")。

Applications

QuantiFast Pathogen +IC Kits利用序列特异性探针进行灵敏的real-time PCR或一步法RT-PCR,检测病原体DNA和/或RNA,以及内参。该试剂盒适用于多种real-time PCR仪,包括QIAGEN、Applied Biosystems、Bio-Rad、Roche和Agilent的仪器。

Features
Specifications
应用 Pathogen Detection: Real-time PCR of viral, bacterial or fungal DNA (QuantiFast Pathogen PCR +IC Kit) or one-step RT-PCR for detection of viral RNA (QuantiFast Pathogen RT-PCR +IC Kit)
反应类型 Real-time PCR or one-step RT-PCR including of an internal control (IC)
real-time或终点法PCR Real-time
样本/目标类型 QuantiFast Pathogen PCR +IC Kit: viral, bacterial or fungal DNA; QuantiFast Pathogen RT-PCR +IC Kit: viral RNA
单一或多重 Duplex
SYBR Green I或序列特异性探针 Sequence-specific probes
热循环仪 For most standard and fast real-time cylcers compatible with duplex PCR/RT-PCR, e.g. Rotor-Gene Q or cyclers from Agilent, Applied Biosystems, BioRad, Roche
有/无ROX Master Mix is provided without ROX dye, but 2 separate ROX solutions are included: High-ROX Dye Solution for use with ABI cyclers except ABI 7500, ROX Dye Solution (low ROX conc.) for use with ABI 7500 and other suppliers

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产品介绍与指南 (1)
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