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QuantiFast Multiplex RT-PCR Kits

使用序列特异性探针进行快速的多重一步法RT-PCR,适用于基因表达分析

  • 灵敏检测单管中的多个目标RNA
  • 快速获得结果,可节省多达50%的时间
  • 无需优化,即可成功进行多重RT-PCR
  • 准确区分起始量相近的模板
  • 可检测同一反应管内的对照基因和至多3个靶基因

应用QuantiFast Multiplex RT-PCR Kits可在单管内通过多重一步法real-time RT-PCR对多至4个RNA进行快速、可靠的定量检测。特制的逆转录酶混合液可快速、高效合成cDNA。Q-Bond和优化的预混液促进快速多重real-time RT-PCR的进行,适用于快速或标准PCR仪。即用型预混液中的热启动酶和独特的PCR缓冲液可确保在所有real-time PCR仪上进行灵敏的qPCR,无需优化。有两种规格的试剂盒:QuantiFast Multiplex RT-PCR Kit适用于需要ROX染料进行荧光信号校准的PCR仪,QuantiFast Multiplex RT-PCR +R Kit适用于其他所有PCR仪。为便于使用,预混液可保存在2–8°C。

Cat No./ID: 204852
QuantiFast Multiplex RT-PCR Kit (80)
Trial kit for 80 x 25 µl reactions: 1 ml 2x QuantiFast Multiplex RT-PCR Master Mix (with ROX dye), 20 µl QuantiFast RT Mix, 2 ml RNase-Free Water
Cat No./ID: 204854
QuantiFast Multiplex RT-PCR Kit (400)
For 400 x 25 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiFast Multiplex RT-PCR Master Mix (with ROX dye), 100 µl QuantiFast RT Mix, 2 x 2 ml RNase-Free Water
Cat No./ID: 204952
QuantiFast Multiplex RT-PCR +R Kit (80)
Trial kit for 80 x 25 µl reactions: 1 ml 2x QuantiFast Multiplex RT-PCR Master Mix (without ROX dye), 20 µl QuantiFast RT Mix, 45 µl ROX Dye Solution, 2 ml RNase-Free Water
Cat No./ID: 204954
QuantiFast Multiplex RT-PCR +R Kit (400)
For 400 x 25 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiFast Multiplex RT-PCR Master Mix (without ROX dye), 100 µl QuantiFast RT Mix, 210 µl ROX Dye Solution, 2 x 2 ml RNase-Free Water
Cat No./ID: 204956
QuantiFast Multiplex RT-PCR +R Kit (2000)
For 2000 x 25 µl reactions: 25 ml 2x QuantiFast Multiplex RT-PCR Master Mix (without ROX dye), 500 µl QuantiFast RT Mix, 1.05 ml ROX Dye Solution, 1 x 20 ml RNase-Free Water

QuantiFast Multiplex RT-PCR Kits适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


0
RT-PCR时间极大缩短。
使用QuantiFast Multiplex Kit进行一步法real-time RT-PCR,可缩短PCR总运行时间达50%(40个循环运行;与QuantiTect Multiplex Kit相比较)。I:iCycler iQ;L1:LightCycler 480;L2:LightCycler 2.0;A1:ABI PRISM 7900;A2:Applied Biosystems 7500 Fast System;M:Mx3005P。
1
可靠的相对定量。
细胞系X采用两种化合物之一 (YZ) 处理或者不处理 (U)。纯化RNA,在Applied Biosystems 7500 Fast System上使用QuantiFast Multiplex RT-PCR +R Kit和针对肌细胞生成素和GAPDH的TaqMan Gene Expression Assay进行一步法双重real-time RT-PCR。针对每次处理,进行5次独立实验。[A] 检测肌细胞生成素表达的变化,检测的准确度和重复性较高 (绿色曲线)。在所有实验中,管家基因GAPDH的表达相当 (蓝色曲线),可利用ΔΔCT相对定量方法对肌细胞生成素的表达水平进行标准化。[B] 在不同实验之间,相对于未处理细胞,标准化的肌细胞生成素表达水平的倍数变化保持稳定,如图中较小的误差条所示。(数据由瑞士巴塞尔Novartis Pharma AG的Angelika Meyer提供)。
3
四重RT-PCR具有高灵敏性。
在Mx3005P上使用QuantiFast Multiplex RT-PCR +R Kit和采用Primer Express设计的TaqMan Assay进行4重一步法real-time RT-PCR。使用10 ng Ramos细胞RNA为模板,进行两次重复反应。以可重复的方法检测所有4个丰度差异极大的靶点。
Performance

QuantiFast Multiplex RT-PCR Kits可节省高达50%的RT-PCR运行时间,让您更快获得结果(参见"Significantly reduced RT-PCR times")。您可极大地提高样本通量或与其它使用者有效地共享PCR仪。在同一个反应中同时扩增对照基因和靶基因,而非分开反应,减少了操作误差,提高了基因定量检测的可靠性(参见"Reliable relative quantification")。QuantiFast Multiplex RT-PCR Kits提供的特制预混液可快速构建多重反应,通常初次使用即可得到成功的结果,且多重PCR反应结果可与单重PCR反应结果相媲美(参见"Comparable results in triplex and singleplex RT-PCR")。

QuantiFast Multiplex RT-PCR Kits可清楚区分模板量的细微差别。即使模板量仅有两倍的差别,该试剂盒也能精确定量丰度差别较大的2个靶基因。该试剂盒可对多达4个靶基因进行快速多重real-time RT-PCR检测,且不会影响PCR结果(参见"Uncompromised sensitivity in 4-plex RT-PCR")。

Principle

QuantiFast Multiplex RT-PCR Kits在标准和快速PCR仪上快速、灵敏的进行检测,无需优化(参见"QIAGEN multiplex kits")。特制的快速PCR缓冲液中含有新型成分Q-Bond,可大大缩短变性、退火和延伸所需时间(参见"Fast primer annealing")。

在同一个反应中同时扩增对照基因和靶基因,而非分开反应,减少了操作误差,提高了基因定量检测的可靠性。QuantiFast Multiplex RT-PCR Buffer含有平衡的K+和NH4+配比,促进了引物的特异性退火,同时独特的MP因子可稳定特异性结合的引物(参见"Unique PCR buffer")。此外,经优化的逆转录酶混合液确保cDNA合成在20分钟内完成。HotStarTaq Plus DNA Polymerase要求严谨的热启动,可阻止非特异性产物的形成。

2x QuantiFast Multiplex RT-PCR Kit的成分
成分特点 优势
HotStarTaq Plus DNA Polymerase 95ºC加热5分钟活化 在室温进行qPCR反应体系构建
QuantiFast Multiplex RT-PCR Buffer 平衡的NH4+和K+离子配比 引物探针的特异性结合确保获得可靠结果
合成的MP因子 在单管中对至多4个基因进行多重分析
独特的Q-Bond添加剂 PCR运行时间缩短,更快获得结果,一天内可完成更多PCR反应
ROX染料 对Applied Biosystems和Agilent PCR仪进行荧光信号的校准 在需要ROX染料的PCR仪上进行准确定量,不影响PCR反应结果
QuantiFast RT Mix 特制的逆转录酶混合液,对RNA具有高度亲和性 RNA的逆转录可在20分钟内完成,包括复杂的二级结构
* 也含有dNTP混合液(dATP、dCTP、dGTP和dTTP)。 †  ROX染料或者在预混液中,或者另外提供。
Procedure

QuantiFast Multiplex RT-PCR Kits提供即用型的预混液,无需优化反应及循环条件。只需在预混液中加入模板RNA和引物-探针对,即可按照操作手册中的实验方案,在任何real-time PCR仪上进行快速、可靠的检测。试剂盒提供两种形式:预混液中含有或不含荧光校正用的ROX染料,因此适用于任何real-time PCR仪(参见下表)。由于ROX浓度经优化,即使是低拷贝数也可通过数据自动分析进行检测。

选择合适的QuantiFast Multiplex RT-PCR Kit
ROX染料试剂盒 适用的PCR仪
混合在预混液中 QuantiFast Multiplex RT-PCR Kit 除Applied Biosystems 7500外的所有Applied Biosystems仪器
单独装在管中 QuantiFast Multiplex RT-PCR +R Kit Applied Biosystems 7500、
Bio-Rad、Cepheid、Eppendorf、QIAGEN、Roche、Agilent和其他供应商的PCR仪
Applications

QuantiFast Multiplex RT-PCR Kits可用于在各种real-time PCR仪上进行基因表达分析,包括Applied Biosystems、Bio-Rad、Cepheid、Eppendorf、Roche和Agilent的PCR仪。Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪或其他Rotor-Gene PCR仪上使用时,我们推荐使用专为快速PCR研发的Rotor-Gene Multiplex RT-PCR Kit。

Features
Specifications
应用 Real-time quantification of RNA targets in a multiplex format
反应类型 Real-time one-step RT-PCR
real-time或终点法PCR Real-time
样本/目标类型 RNA
单一或多重 Multiplex
SYBR Green I或序列特异性探针 Sequence-specific probes
热循环仪 Real-time cyclers dedicated for multiplex PCR (e.g., most Applied Biosystems real-time PCR cyclers, Roche LightCycler 480, and Bio-Rad iCycler iQ)
有/无ROX Available with ROX in master mix or with ROX as separate vial

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试剂盒操作手册 (1)
For quantitative, multiplex, real-time one-step RT-PCR with fast cycling using sequence-specific probes
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