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miScript Precursor Assays

配合miScript PCR System定量检测miRNA前体

  • 灵敏和特异性的定量检测miRNA前体
  • 同时检测前体和成熟miRNA
  • 可在GeneGlobe便利的订购

miScript Precursor Assays是miRNA前体的特异性正向和反向引物,配合miScript SYBR Green PCR Kit进行miRNA前体的real-time PCR。适合最新版本miRBase中的所有人类、小鼠和大鼠miRNAs,miRBase中的数据会不断更新。miScript II RT Kit可配合miScript HiFlex Buffer制备cDNA。cDNA作为模板,配合miScript Precursor Assay和miScript SYBR Green PCR Kit中的QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix用于real-time PCR。

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miScript Precursor Assay (100)
10x miScript Precursor Assay (contains one miRNA-precursor–specific forward primer and one miRNA-precursor–specific reverse primer)
218600 Varies Enter your targets in search box above.

miScript Precursor Assays适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


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平行检测成熟miRNA和miRNA前体。
使用miRNeasy Mini Kit从HeLa S3细胞中纯化总RNA。使用miScript II RT Kit及附带的miScript HiFlex Buffer制备cDNA。在real-time PCR中,使用miScript Primer Assay对成熟miRNA进行定量,使用miScript Precursor Assay对前体miRNA进行定量。使用针对RNU6-2的miScript PCR Control进行标准化。在Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪上进行real-time PCR。使用miScript PCR System,在real-time PCR平行反应中高效定量成熟miRNA及其前体miRNA。
Performance

miScript Precursor Assays可准确检测miRNAs前体,可用于需同时检测miRNAs前体和成熟miRNAs的实验(参见"Parallel detection of mature and precursor miRNA")。

Principle

miScript PCR System配合SYBR® Green-based real-time PCR,灵敏和特异性地检测并定量miRNA。miScript PCR System可以完成从RNA中合成cDNA和后续的real-time PCR检测miRNAs涉及的所有步骤。

使用miScript PCR System进行miRNA前体检测和定量,需要以下组件:

miScript II RT Kit,可简单、单步合成cDNA。单个cDNA合成反应可用于检测数以百计的miRNAs。双缓冲体系满足使用real-time PCR进行miRNA定量的独特要求。
miScript SYBR® Green PCR Kit,包含QuantiTect SYBR® Green PCR Master Mix和反向引物miScript Universal Primer,配合miScript Primer Assay或miScript miRNA PCR Array进行miRNAs检测。如需检测miRNA前体,无需使用miScript Universal Primer。
miScript Precursor Assay,包含miRNA前体特异性正向和反向引物,配合miRBase中的最新信息,检测miRNA前体。miRNA前体检测可与成熟miRNA(使用miScript Primer Assay检测)和mRNA(使用QuantiTect Primer Assay检测)检测同时进行,使用相同的cDNA样本。miScript Universal Primer不用于检测miRNA前体。
miRNA前体研究

miScript Precursor Assays包含miRNA前体特异性正向和反向引物,靶向作用于研究中的miRNA前体的茎环序列。miScript Precursor Assay靶向于初级miRNA(pri-miRNA)和miRNA前体的茎环序列,因此miScript Precursor Assays可同时定量初级miRNA和miRNA前体。miRNA前体检测可用于miRNA生物研究、调控和功能研究。不同miRNAs的成熟和miRNA前体水平各有不同。另外,在不同条件和组织中,成熟miRNAs可从不同的miRNAs前体中表达。

Procedure

miRNA前体检测实验中,使用miScript II RT Kit中的miScript HiFlex Buffer,通过逆转录反应制备cDNA,作为real-time PCR的模板。Real-time PCR配合miScript Precursor Assay和miScript SYBR Green PCR Kit中的QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix进行。

Applications

miScript Precursor Assays作为miScript PCR System的一部分,用于miRNA前体的检测。

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