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Custom RT2 PreAMP Pathway Primer Mixes

用于Custom RT² Profiler PCR Arrays分析之前扩增cDNA模板

  • 适用于人类、小鼠及大鼠的定制引物混合液
  • 最少的手动操作时间
  • 可靠检测少量样本

RT2 PreAMP cDNA Synthesis Kit和RT2 PreAMP Pathway Primer Mixes是创新的技术,能够用1 ng的总RNA进行基因表达分析。专有的扩增过程增加了用于PCR芯片分析的cDNA的量。起始样本包括穿刺活检样本、激光捕获显微切割样本、干细胞团或胚胎体及流式细胞分选仪(FACS)分选的细胞。专门设计的引物混合物适用于人类、小鼠或大鼠的Custom RT2 Profiler PCR Arrays。

Cat No./ID: 330141
Custom RT2 PreAMP Pathway Primer Mix
Primer mix for a specific RT2 Profiler PCR Array

Custom RT2 PreAMP Pathway Primer Mixes适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


0
阳性率高。
从40 ng小鼠总RNA中,使用(浅蓝)或不使用(深蓝)RT² PreAMP PCR Mastermix和RT² PreAMP Pathway Primer Mix预扩增,合成cDNA的一条链。随后,扩增的和未扩增的样本在Mouse Inflammatory Cytokines & Receptors RT² Profiler PCR Array进行分析并获得CT值。CT ≥35的基因被视为“缺失”该基因。在未扩增样本中,分析的基因中75%存在。在扩增样本中阳性率升到100%。其中22个基因在未扩增样本中被视为“缺失”,但在扩增样本中都能够检测到。
1
简便的模板扩增和基因表达分析。
2
无偏差的扩增流程。
从5 ng人肝癌RNA中合成cDNA的一条链。其中四分之一的合成产物使用RT² PreAMP PCR Master Mix和Human Cancer PathwayFinder RT² PreAMP Pathway Primer Mix进行预扩增。从500 ng相同样本中合成的未扩增cDNA作为对照。预扩增和未扩增的cDNA样本在Human Cancer PathwayFinder RT² Profiler PCR Array上进行分析并获得CT值。预扩增样本和未扩增样本的一致性通过回归分析进行评估。CT≥35的基因被视为“缺失”该基因并从该分析中去除。这些线表示与R2相对应的线性回归,斜率如图所示。
3
可靠的扩增。
从1 ng人肝癌RNA或通用RNA中合成cDNA的一条链。其中四分之一的合成产物使用RT² PreAMP PCR Master Mix和Human Cancer PathwayFinder RT² PreAMP Pathway Primer Mix进行预扩增。从500 ng每个相应的RNA样本中合成的未扩增cDNA作为对照。预扩增和未扩增的cDNA样本在Human Cancer PathwayFinder RT² Profiler PCR Array上进行分析并用ΔΔCT法获得每个基因在肝癌和通用RNA中表达的差异。
Performance
阳性信号率更高,无偏差扩增获得无偏向性的结果

更多基因可使用RT2 PreAMP Pathway Primer Mix进行预扩增之后被检测(参见"Increased positive call rate")。扩增过程无偏向性,回归分析评估发现,预扩增的与未扩增的cDNA之间能产生高度可比的ΔCT值(参见"Unbiased amplification process")。

在预扩增与未扩增样本之间,基因表达倍数变化有高度相关性(参见"Faithfully amplified biology")。

Principle
RT2 PreAMP技术利用多重串联PCR以最小的偏差预扩增基因特异性cDNA。逆转录后,RT2 PreAMP Pathway Primer Mix用于扩增模板,能够在4个不同Custom RT2 Profiler PCR Arrays上进行基因表达分析(参见"Simple template amplification and gene expression analysis")。

Procedure

首先使用RT2 PreAMP cDNA Synthesis Kit,同时反转录最多12 种不同的RNA样本成为cDNA。然后将cDNA进行预扩增用于特定的基因列表。每个合成的cDNA第一条链用4种不同的Custom RT2 PreAMP Pathway Primer Mixes进行扩增,能够在4个不同的特定PCR芯片上进行基因表达分析。RT2 PreAMP cDNA Synthesis Kit中含有Side Reaction Reducer,可去除预扩增所产生的引物残留,在RT2 Profiler PCR Arrays进行准确检测。把预扩增的模板与仪器特异性、即用型RT2 SYBR® Green Mastermix混合,完成PCR分析过程。

Applications
使用Custom RT2 PreAMP cDNA Synthesis Kit及RT2 PreAMP Pathway Primer Mixes生成的cDNA模板可即用于Custom RT2 Profiler PCR Arrays进行基因表达谱分析。

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