HotStarTaq DNA Polymerase

高特异性扩增，所需优化次数少

所需优化次数少
PCR特异性高
操作方便，可在室温下构建反应体系

不同于抗体介导的方法，HotStarTaq DNA Polymerase应用化学介导的热启动，可确保聚合酶在PCR初始加热阶段完全没有活性。HotStarTaq DNA Polymerase提供独特的QIAGEN PCR Buffer，将非特异性扩增产物、引物二聚体和其他污染降至最低。一种新型的添加剂Q-Solution，可实现难扩增的模板（如GC含量高的模板）高效扩增。

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产品	货号	目录价：
HotStarTaq DNA Polymerase (250 U) 250 units HotStarTaq DNA Polymerase, 10x PCR Buffer, 5x Q-Solution, 25 mM MgCl₂	203203	询价
HotStarTaq DNA Polymerase (1000 U) 4 x 250 units HotStarTaq DNA Polymerase, 10x PCR Buffer, 5x Q-Solution, 25 mM MgCl₂	203205	询价
HotStarTaq DNA Polymerase (5000 U) 1 x 5000 units HotStarTaq DNA Polymerase, 1 x HotStarTaq Buffer Set (1 x 22 ml PCR Buffer, 1 x 40 ml Q-Solution, 1 x 22 ml MgCl₂)	203207	询价
HotStarTaq DNA Polymerase (25000) 100 x 250 units HotStarTaq DNA Polymerase, 100 x 1.2 ml HotStarTaq Buffer Set, 100 x 2.0 ml Q-Solution, 100 x 1.2 ml MgCl₂	203209	询价

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HotStarTaq DNA Polymerase适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。

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HotStarTaq实验流程快速、简单，十分便利。|将50拷贝的HIV-pol基因重组体加入1 µg人基因组DNA中，扩增497 bp的片段。采用不同的热启动酶：QIAGEN的HotStarTaq DNA Polymerase（HotStarTaq）；Supplier A_II的热启动酶（Hot-start enzyme）；Supplier L的Taq抗体混合物（Antibody-mediated）；Supplier R的非热启动酶（No hot start）。特异性的PCR产物如箭头所示。取等体积的反应产物在2%的琼脂糖凝胶上分析。M：分子量标准。|使用QIAGEN PCR Buffer和Taq DNA Polymerase，不加入 (–) 或者加入 (+) 1x Q-Solution，对两种不同的引物-模板系统进行扩增，重复两次。Q-Solution可实现难以处理的模板的特异性扩增。[A] 人血管紧张素受体II基因；[B] 小鼠蛋白激酶C基因；M：分子量标准。|在相同的条件下，使用Supplier R的Taq DNA聚合酶 (R) 或HotStarTaq DNA Polymerase (H)，对三种不同的引物-模板系统进行扩增。System 1：从人基因组DNA中扩增1.1 kb的D-IgI同系物片段。System 2：从人基因组DNA中扩增与X染色体链锁型青年型视网膜裂损症相关的296 bp的染色体区域片段。System 3：利用总RNA合成的cDNA，扩增214 bp的β-actin基因片段。M：分子量标准。|利用cDNA扩增1.1 kb的人白介素1受体 (II型) 片段。使用Supplier L的Taq DNA聚合酶和缓冲液（No hot start）；使用Supplier L的抗体介导的热启动酶和缓冲液（Antibody-mediated）；使用QIAGEN的HotStarTaq DNA Polymerase和PCR Buffer （HotStarTaq）制备扩增反应，重复三次。M：分子量标准。|利用流式细胞术分离单细胞，并直接分选至单个PCR管内，扩增500 bp的鼠p53基因片段。使用QIAGEN的HotStarTaq DNA Polymerase和PCR Buffer（HotStarTaq）、Supplier A_II的热启动酶和缓冲液（Hot-start enzyme）或Supplier L的抗体介导的热启动酶和缓冲液（Antibody-mediated）制备并行反应。M：分子量标准。|[A] 使用QIAGEN PCR Buffer和Taq DNA Polymerase (QIAGEN)在图示退火温度下进行PCR扩增。同时使用另一供应商（Supplier A_II）的PCR缓冲液和Taq DNA聚合酶进行平行反应。扩增单拷贝人类囊性纤维化基因。M：分子量标准。[B] 对不同镁离子浓度的耐受性。使用标示浓度的Mg²⁺和Taq DNA Polymerase及QIAGEN PCR Buffer (QIAGEN) 构建PCR反应。使用另一家供应商 (Supplier A_II) 提供的PCR缓冲液和Taq DNA聚合酶，同时进行相同的PCR反应。扩增单拷贝的人朊病毒蛋白基因。M：分子量标准。|QIAGEN PCR缓冲液中的铵态氮和钾离子能够在退火时促进引物的特异性结合。K⁺结合到DNA主链上的磷酸基团（P^–）上，稳定结合到模板上的引物。在热循环中，NH₄⁺以铵离子和氨的形式存在，可以与碱基（B）之间的氢键发生相互作用，使错配碱基间的不稳定的氢键容易断开。两种阳离子的共同作用，在广泛的温度范围内保持特异性结合比例高。|

性能

每一批HotStarTaq DNA Polymerase都经过全方位的质量控制测试，包括：严格的PCR特异性和具有可重复性的试剂，即使低拷贝的靶分子也可扩增。通过检测，HotStarTaq DNA Polymerase可确保高度特异性和在热启动PCR中的卓越表现（参见"Higher specificity with different primer–template systems"、"Superior performance"和表格）。该试剂盒提供的新型PCR缓冲液使得在多种PCR条件下都维持高特异性，无需优化（参见"Tolerance to variable magnesium concentration"）。试剂盒中的Q-Solution可进一步优化PCR（参见"Amplification of difficult templates"）。总之，这些组合确保了在多种应用中的特异性扩增（参见"Effect of hot start on RT-PCR performance"和"Highly sensitive single-cell PCR"）。

热启动模式比较
	HotStarTaq DNA Polymerase	Supplier A_II提供的热启动酶	抗体介导	手动	蜡屏障
特异性扩增	++	+	+	+/–	+/–
PCR优化需求	++	+/–	+/–	–	–
易用性	++	++	+	–	–

HotStarTaq DNA Polymerase特性

浓度：5 units/µl
重组酶：是
底物类似物：dNTP、ddNTP、dUTP、biotin-11-dUTP、DIG-11-dUTP、fluorescent-dNTP/ddNTP
延伸速度：72°C条件下2–4 kb/min
酶半衰期：97°C条件下10 min，94°C条件下60 min
扩增效率：≥10⁵倍
5'–>3'外切酶活性：是
额外添加A：是
3'–>5' 外切酶活性：否
核酸酶污染：否
蛋白酶污染：否
RNases污染：否
自启活性：否

原理

HotStarTaq DNA Polymerase，一种经修饰的Taq DNA Polymerase，确保热启动PCR的高度特异性。该试剂盒包括新型的双阳离子PCR缓冲液、Q-Solution和MgCl₂。

HotStarTaq DNA Polymerase

HotStarTaq DNA Polymerase以非活性形式提供，常温下没有聚合酶活性。避免PCR构建和循环初始阶段低温条件下非特异性引物的延伸和引物二聚体的形成（参见"Superior performance in hot-start PCR"和"Higher specificity with different primer–template systems"）。95°C条件下孵育15分钟即可激活HotStarTaq DNA Polymerase，这个步骤可整合入已有的热循环程序中。

QIAGEN PCR Buffer

QIAGEN PCR Buffer通过提高每个PCR扩增退火过程特异性引物的结合比例，确保PCR每个循环特异性扩增（参见"Increased specificity of primer annealing"）。独特的KCl和(NH₄)₂SO₄平衡组合，使得该缓冲液与传统的PCR缓冲液相比在很宽的温度和Mg²⁺浓度范围内都有严格的引物退火条件和高度的特异性，无需进行耗时的优化（参见"Tolerance to variable magnesium concentration"）。

Q-Solution

该产品同时提供Q-Solution，一种新型的PCR添加剂，通过更改DNA熔解行为促进难扩增模板的扩增。这种独特的试剂可进一步优化由模板引起的表现不理想的PCR，如过多的二级结构和富含GC的模板（参见"Amplification of difficult templates"）。不同于DMSO和其他PCR添加剂，Q-Solution的浓度是确定的，没有毒性，并且保证PCR的纯度。而且PCR中加入Q-Solution不会影响PCR的准确性。

操作流程

HotStarTaq DNA Polymerase提供高效、经优化的实验方案，用于快速、方便的构建PCR反应体系。95°C条件下孵育15分钟激活HotStarTaq DNA Polymerase，可以整合入已有的热循环程序。反应可在室温下建立，更加方便和易于使用（参见"HotStarTaq procedure"）。

应用

HotStarTaq DNA Polymerase适合多种应用，包括各种富有挑战性的研究，如各种扩增应用：

复杂的基因模板
复杂的cDNA模板（如RT-PCR）
低拷贝的靶序列（如单细胞PCR）
多重引物对反应

特点	参数
应用	PCR, RT-PCR, Complex genomic templates, very low-copy targets
酶活	5' -> 3' exonuclease activity
预混液	No
反应类型	PCR amplification
real-time或终点法PCR	Endpoint
样本/目标类型	Genomic DNA and cDNA
单一或多重	Single
有/无热启动酶	With hotstart

产品介绍与指南

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	(EN) - Maximizing PCR and RT-PCR success — Third Edition Addressing critical factors and new solutions	显示更多
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常见问题

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	What should the starting template DNA quality and quantity be for PCR? FAQ ID -74	浏览
	How is "Touchdown PCR" used to increase PCR specificity? FAQ ID -75	浏览
	Why do I get smeared PCR products? FAQ ID -87	浏览
	What kind of PCR products can be cloned with the QIAGEN PCR Cloning Kit? FAQ ID -165	浏览
	Do CoralLoad dyes supplied in various QIAGEN PCR Kits interfere with downstream applications? FAQ ID -1745	浏览
	Does QIAGEN sell Q-Solution separately? FAQ ID -204	浏览
	How can one determine the optimal annealing temperature for a specific PCR assay? FAQ ID -288	浏览
	Do any of the buffers in the HotStarTaq DNA Polymerase Kit contain Triton? FAQ ID -327	浏览
	Is Q-Solution required for PCR with QIAGEN's PCR kits? FAQ ID -380	浏览
	Can Taq DNA Polymerase use RNA as a template, and generate false positives in "no-RT" controls? FAQ ID -523	浏览
	How can I avoid primer-dimer formation during PCR amplification? FAQ ID -544	浏览
	How can I tell if I have primer-dimers in my PCR reaction? FAQ ID -552	浏览
	Can I shorten the activation time for the HotStarTaq DNA Polymerase? FAQ ID -565	浏览
	What makes QIAGEN's 10x Taq and HotStarTaq DNA Polymerase PCR buffer superior? FAQ ID -566	浏览
	What is the composition of the QIAGEN 10x PCR Buffer in Taq- and HotStarTaq DNA Polymerase Kits? FAQ ID -606	浏览
	Can QIAGEN's Taq- and HotstarTaq DNA Polymerases be used for cycle sequencing? FAQ ID -741	浏览
	How much DNA is obtained in the average PCR reaction? FAQ ID -750	浏览
	Have you tested the effect of inhibitors on PCR performance? FAQ ID -818	浏览
	Do you have a protocol for polyacrylamide gel analysis of oligonucleotides? FAQ ID -961	浏览

试剂盒操作手册

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	HotStarTaq PCR Handbook - (EN) HotStarTaq DNA Polymerase; HotStarTaq Master Mix Kit - For highly specific hot-start PCR without optimization	显示更多

技术资讯

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	(EN) - Maximizing end-point PCR success with QIAGEN's automatable PCR solutions	显示更多

补充实验方案

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	Polyacrylamide gel analysis of oligonucleotides	显示更多

快速启动实验方案

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安全数据表

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	Safety Data Sheets Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.	浏览
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安全数据表

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	MSDS HotStarTaq DNA Polymerase (250 U)
	MSDS HotStarTaq DNA Polymerase (1000 U)
	MSDS HotStarTaq DNA Polymerase (5000 U)
	MSDS HotStarTaq DNA Polymerase (25000)
	CofA

图片

Highly specific PCR results with both manual and automated PCR setup

HotStarTaq实验流程。

HotStarTaq实验流程快速、简单，十分便利。

出色的表现。

将50拷贝的HIV-pol基因重组体加入1 µg人基因组DNA中，扩增497 bp的片段。采用不同的热启动酶：QIAGEN的HotStarTaq DNA Polymerase（HotStarTaq）；Supplier A_II的热启动酶（Hot-start enzyme）；Supplier L的Taq抗体混合物（Antibody-mediated）；Supplier R的非热启动酶（No hot start）。特异性的PCR产物如箭头所示。取等体积的反应产物在2%的琼脂糖凝胶上分析。M：分子量标准。

Amplification of Difficult Templates with Q-Solution

扩增困难模板。

使用QIAGEN PCR Buffer和Taq DNA Polymerase，不加入 (–) 或者加入 (+) 1x Q-Solution，对两种不同的引物-模板系统进行扩增，重复两次。Q-Solution可实现难以处理的模板的特异性扩增。[A] 人血管紧张素受体II基因；[B] 小鼠蛋白激酶C基因；M：分子量标准。

Higher Specificity with Different Primer–Template Systems

对不同引物-模板体系均有较高的特异性。

在相同的条件下，使用Supplier R的Taq DNA聚合酶 (R) 或HotStarTaq DNA Polymerase (H)，对三种不同的引物-模板系统进行扩增。System 1：从人基因组DNA中扩增1.1 kb的D-IgI同系物片段。System 2：从人基因组DNA中扩增与X染色体链锁型青年型视网膜裂损症相关的296 bp的染色体区域片段。System 3：利用总RNA合成的cDNA，扩增214 bp的β-actin基因片段。M：分子量标准。

Effect of Hot Start on RT-PCR Performance

RT-PCR中高效的热启动。

利用cDNA扩增1.1 kb的人白介素1受体 (II型) 片段。使用Supplier L的Taq DNA聚合酶和缓冲液（No hot start）；使用Supplier L的抗体介导的热启动酶和缓冲液（Antibody-mediated）；使用QIAGEN的HotStarTaq DNA Polymerase和PCR Buffer （HotStarTaq）制备扩增反应，重复三次。M：分子量标准。

高度灵敏的单细胞PCR。

利用流式细胞术分离单细胞，并直接分选至单个PCR管内，扩增500 bp的鼠p53基因片段。使用QIAGEN的HotStarTaq DNA Polymerase和PCR Buffer（HotStarTaq）、Supplier A_II的热启动酶和缓冲液（Hot-start enzyme）或Supplier L的抗体介导的热启动酶和缓冲液（Antibody-mediated）制备并行反应。M：分子量标准。

对不同镁离子浓度的耐受性。

[A] 使用QIAGEN PCR Buffer和Taq DNA Polymerase (QIAGEN)在图示退火温度下进行PCR扩增。同时使用另一供应商（Supplier A_II）的PCR缓冲液和Taq DNA聚合酶进行平行反应。扩增单拷贝人类囊性纤维化基因。M：分子量标准。[B] 对不同镁离子浓度的耐受性。使用标示浓度的Mg²⁺和Taq DNA Polymerase及QIAGEN PCR Buffer (QIAGEN) 构建PCR反应。使用另一家供应商 (Supplier A_II) 提供的PCR缓冲液和Taq DNA聚合酶，同时进行相同的PCR反应。扩增单拷贝的人朊病毒蛋白基因。M：分子量标准。

NH4+ and K+ cations in QIAGEN PCR buffers increase specific primer annealing

退火时引物结合的特异性增强。

QIAGEN PCR缓冲液中的铵态氮和钾离子能够在退火时促进引物的特异性结合。K⁺结合到DNA主链上的磷酸基团（P^–）上，稳定结合到模板上的引物。在热循环中，NH₄⁺以铵离子和氨的形式存在，可以与碱基（B）之间的氢键发生相互作用，使错配碱基间的不稳定的氢键容易断开。两种阳离子的共同作用，在广泛的温度范围内保持特异性结合比例高。