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Sensiscript RT Kit

每次反应可逆转录少于50 ng的RNA,用于终点法PCR

  • 灵敏检测低至10个拷贝的模板
  • 通过高亲和力酶获得高产量cDNA
  • 无需RNase H消化步骤
  • 快速、简单的操作流程,无需繁琐的移液步骤

Sensiscript Reverse Transcriptase (RT) Kit非常适合使用极少量的RNA(少于50 ng)进行高灵敏度的应用,如单细胞RT-PCR和活组织及LMD样本分析。Sensiscript Reverse Transcriptase对RNA具有高亲和力,可在宽动态范围内进行高效RT-PCR,对少量RNA进行极灵敏的RT-PCR。Sensiscript RT Kit包含Sensiscript Reverse Transcriptase、dNTPs和优化的反应缓冲液。只需加入引物就可进行快速、简单的cDNA合成。

Cat No./ID: 205211
Sensiscript RT Kit (50)
For 50 reverse-transcription reactions: Sensiscript Reverse Transcriptase, 150 µl 10x Buffer RT, 100 µl dNTP Mix (contains 5 mM each dNTP), 1.1 ml RNase-free water
Cat No./ID: 205213
Sensiscript RT Kit (200)
For 200 reverse-transcription reactions: Sensiscript Reverse Transcriptase, 4 x 150 µl 10x Buffer RT, 4 x 100 µl dNTP Mix (contains 5 mM each dNTP), 4 x 1.1 ml RNase-free water

Sensiscript RT Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


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Sensiscript Reverse Transcriptase实验流程。
Sensiscript RT Kit包括dNTP和优化的反应缓冲液,结合对RNA具有高亲和力的Sensiscript Reverse Transcriptase,可实现高GC含量或具有复杂二级结构的模板的通读。这种预先优化措施避免了繁琐的移液和预孵化步骤,且无需额外的RNase H酶酶切步骤。
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对相当于1个细胞中的RNA进行RT-PCR。
利用RNeasy技术从10至5000个HeLa细胞中分离总RNA。使用十分之一的各洗脱液(相当于从1至500个细胞中分离的RNA),加入Sensiscript Reverse Transcriptase进行逆转录。然后使用一半的各RT反应物,加入QIAGEN Taq DNA Polymerase和β-actin、NF-κB、肌醇-1,4,5-三磷酸受体或抗肌萎缩蛋白的编码基因特异性的引物进行40个循环PCR。扩增片段的大小如图所示。
Performance

Sensiscript Reverse Transcriptase (RT)在宽动态范围内具有很高的效率,对少量RNA也具有高灵敏度(参见"RT-PCR with RNA corresponding to 1 cell)。GC含量高的RNA区域可能导致其他逆转录酶停止,从RNA模板上脱落或跳过RNA的环状区(参见"Full-length RT-PCR products — B")。然而,QIAGEN逆转录酶对这些难扩增的模板均可扩增(参见see figure "Full-length RT-PCR products — A")。Sensiscript RT Kit无需优化,逆转录过程几乎没有困难。

QIAGEN具有严格的质量控制,保证Sensiscript RT Kit批间的重复性。Sensiscript RT Kits包含的经优化的Buffer RT、dNTPs和水,都保证不含RNase,每个批次的Sensiscript RT都对RT-PCR的重复性进行了全面的检测。

Principle

Sensiscript Reverse Transcriptase (RT)是第一个用于高灵敏度应用的商业化酶,可处理极少量的RNA(<50 ng),如单细胞RT-PCR或少量活组织分析。即用型Sensiscript RT对RNA具有高亲和力,配合dNTPs和经优化的反应缓冲液,可对低拷贝转录本进行高特异性和灵敏度的RT-PCR,还能读通复杂的RNA二级结构,无需调整温度或反应条件。请注意,不提供引物混合物。

处理病毒RNA,可选用Omniscript RT,因为大部分病毒RNA样本都含有载体RNA。

Procedure
使用经优化的Sensiscript Reverse Transcriptase反应缓冲液,无需繁琐的移液和预孵育步骤,也无需RNase H消化步骤(参见"Sensiscript Reverse Transcriptase Procedure")。
Applications

Sensiscript Reverse Transcriptase适用于以下应用:

  • 标准RT和RT-PCR
  • 定量real-time RT-PCR
  • 差异显示RT-PCR
  • 引物延伸和RACE分析
  • 合成用于克隆的双链cDNA
Features
Specifications
应用 cDNA synthesis, RT-PCR, qRT-PCR
酶活 Reverse transcription
预混液 No
反应类型 Reverse transcription
real-time或终点法PCR Endpoint
样本/目标类型 RNA template
单一或多重 Single
有/无热启动酶 Without hotstart

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试剂盒操作手册 (1)
Sensiscript Reverse Transcriptase for First-strand cDNA synthesis using <50 ng RNA; Two-tube RT-PCR; One-tube RT-PCR
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用户开发的实验方案 (1)
The protocol has been used successfully for Cy3-, Cy5-, and biotin-labeling of cDNA from <50 ng of total RNA or poly A+ mRNA.
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