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Omniscript RT Kit

在终点法PCR中,用于RNA模板量为50 ng到2 μg的逆转录反应

  • 高亲和力酶获得高产量cDNA
  • 灵敏的检测低至10拷贝的模板
  • 无需额外的RNase H消化
  • 快速简单的操作流程,无需繁琐的移液步骤

Omniscript Reverse Transcription (RT) Kit专为单次逆转录反应中使用50 ng至2 μg RNA模板而设计。与RNA的高亲和力使得Omniscript Reverse Transcriptase比其它逆转录酶表现更出色,即使是低拷贝模板,在RT-PCR中也能实现更高的灵敏度。Omniscript RT Kit包括Omniscript Reverse Transcriptase、dNTPs和优化的反应缓冲液。只需加入引物,即可简单快速合成cDNA。

Cat No./ID: 205111
Omniscript RT Kit (50)
For 50 reverse-transcription reactions: 200 units Omniscript Reverse Transcriptase, 150 µl 10x Buffer RT, 100 µl dNTP Mix (contains 5 mM each dNTP), 1.1 ml RNase-free water
Cat No./ID: 205113
Omniscript RT Kit (200)
For 200 reverse-transcription reactions: 800 units Omniscript Reverse Transcriptase, 4 x 150 µl 10x Buffer RT, 4 x 100 µl dNTP Mix (contains 5 mM each dNTP), 4 x 1.1 ml RNase-free water

Omniscript RT Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


0
全长的RT-PCR产物— A。
采用图示的RT反应温度,对从玉米叶中提取的总RNA进行RT-PCR。扩增1.2 kb的富含GC的玉米gl2转录本片段。采用标准的Omniscript RT实验方案,按说明在标准(37°C)和较高的反应温度下进行RT。
1
全长的RT-PCR产物— B。
采用图示的RT反应温度,对从玉米叶中提取的总RNA进行RT-PCR。扩增1.2 kb的富含GC的玉米gl2转录本片段。采用标准的MMLV RNase H- RT实验方案(Supplier L),按说明在标准(42°C)及其他反应温度下进行RT。该标准实验方案包括必需的初步变性步骤以及在RT结束后推荐进行的RNase H酶酶切步骤。
2
Omniscript Reverse Transcriptase实验流程。
Omniscript RT Kit包括dNTPs和优化的反应溶液以及对RNA高亲和性的Omniscript Reverse Transcriptase,能够通读高GC含量和二级结构复杂的序列。由于这种预优化,无需繁琐的移液和预孵育步骤,也无需额外的RNase H消化步骤。
3
多种逆转录酶的对比。
使用从HeLa细胞中提取的图示量的总RNA,依照供应商提供的说明书使用不同的逆转录酶进行逆转录。1/20的逆转录反应使用QIAGEN Taq DNA Polymerase进行25个循环的PCR扩增反应。扩增1.7 kb的β-actin片段。Omniscrip:Omniscript Reverse Transcriptase(QIAGEN);MMLV RNase H–:来自Moloney小鼠白血病病毒的RNase H–逆转录酶(供应商L);MMLV:野生型MMLV逆转录酶(供应商L);AMV RNase H–:来自禽成髓细胞瘤病毒的RNase H–逆转录酶(供应商L);AMV:野生型AMV逆转录酶(供应商P)。
4
对10个以上拷贝进行灵敏的RT-PCR。
从10到104拷贝的起始模板中(在200 ng总RNA中)逆转录一个700 nt的体外转录子,随后进行PCR。每个逆转录反应的1/4(相当于2.5到2500拷贝的 cDNA)用于PCR扩增一个330 bp的片段。
Performance

高亲和力Omniscript Reverse Transcriptase (RT)在RT-PCR中具有高特异性和高灵敏度,即使是低拷贝转录(参见"Sensitive RT-PCR of ≥10 copies"),无需调整温度或反应条件即可通读复杂的RNA二级结构(参见"Comparison of various reverse transcriptases")。

GC含量高的RNA区域可能导致逆转录反应停止、从RNA模板脱离或跳过RNA环外区域(参见"Full-length RT-PCR products — B")。经证明,这些难扩增模板对QIAGEN逆转录酶没有影响(参见"Full-length RT-PCR products — A")。无需优化,Omniscript RT Kit就可使逆转录反应顺利进行。

Principle

Omniscript Reverse Transcriptase (RT)与RNA的高亲和力确保多种模板逆转录反应的高效性和灵敏性,获得高产量cDNA。提供即用型dNTPs,经优化的反应缓冲液和与RNA高亲和力的Omniscript RT,可通读GC含量高或复杂二级结构的模板。请注意,不提供引物混合物。

Omniscript RT专为逆转录反应设计,单次反应使用50 ng到2 µg的RNA模板。另可作为病毒RNA的酶选择,因为在多数病毒RNA制备中存在载体RNA。在对比实验中,Omniscript RT的表现在一系列不同RNA起始量中都优于其它逆转录酶。

QIAGEN提供严格的质量控制,确保Omniscript Kits批与批之间的高重复性。所有Omniscript RT Kits都包括经优化的Buffer RT、dNTPs和纯水,保证不含RNase、每批Omniscript RT都进行全面得RT-PCR重复性测试。

Procedure
使用经优化的Omniscript Reverse Transcriptase反应缓冲液,无需繁琐的移液和预培养步骤,无需另外使用RNase H消化步骤(参见"Omniscript Reverse Transcriptase Procedure")。
Applications

Omniscript Reverse Transcriptase适合以下应用:

  • 合成cDNA ,用于终点式PCR
  • 合成双链cDNA,用于克隆
  • RACE(cDNA终点的快速扩增)
  • 线性RNA扩增
  • 指数型RNA扩增
  • SAGE(基因表达序列分析)
  • 微阵列标记
  • 引物延伸转录起始位点分析
Features
Specifications
应用 RT-PCR, qRT-PCR, primer-extension, RACE analysis
酶活 Reverse transcription
预混液 No
反应类型 Reverse transcription
real-time或终点法PCR Endpoint
样本/目标类型 RNA template
单一或多重 Single
有/无热启动酶 Without hotstart

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试剂盒操作手册 (1)
Omniscript Reverse Transcriptase - For First-strand cDNA synthesis Two-tube RT-PCR
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