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Type-it Mutation Detect PCR Kit

用于对突变进行准确、可靠的多重PCR分析

  • 有效、可重复的多重突变分析
  • 无需优化即可建立多重PCR反应
  • 高特异性、灵敏的同时扩增所有片段
  • 优化的操作流程,得到快速、可靠的结果
  • 简单的操作指南,用于多种下游分析平台

Type-it Mutation Detect PCR Kit适用于快速、可靠的检测缺失、插入和异位等突变。该试剂盒基于高度特异的HotStarTaq Plus DNA Polymerase和获得专利的缓冲液系统,从而确保对突变位点进行可靠多重PCR扩增,无需优化。后续分析简单方便,可在琼脂糖凝胶、自动化电泳仪以及高分辨率毛细管测序仪上进行。

Cat No./ID: 206343
Type-it Mutation Detect PCR Kit (200)
For 200 x 25 μl reactions: Type-it Multiplex PCR Master Mix, 5x Q-Solution, RNAse-Free Water, and 10x CoralLoad Dye

Type-it Mutation Detect PCR Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


1
灵敏的检测可能诱发癌症的基因突变。
如图所示,将淋巴瘤细胞(Ramos)中抽提的DNA加入到人类白细胞DNA中,突变的Ramos和两个内参被检测到。使用Type-it Mutation Detect Kit,即使仅有25 pg DNA(4个细胞),也能够检测到突变的357 bp的基因。使用I供应商提供的热启动聚合酶进行检测时,即使优化了镁离子和聚合酶的浓度,使用25 ng DNA(4000个细胞),仍无法检测到淋巴瘤细胞突变。电泳在1.3%的琼脂糖凝胶上进行。M:100 bp分子量标准。
2
出色的SNP预扩增。
使用Type-it Mutation Detect PCR Kit(Q),按照标准实验方案进行SNP扩增;另一反应使用A厂商的热启动DNA聚合酶,在预优化的条件下进行扩增。使用Type-it Mutation Detect PCR Kit的反应中,所有片段都成功扩增,无需优化PCR反应条件,产物可用于SNaPshot PCR系统。而另一个使用A供应商的试剂盒的反应,即使优化镁离子浓度至4 mM,并改变聚合酶浓度,仍有部分片段未成功扩增。在QIAxcel上进行电泳分析。每个泳道上的第一条和最后一条条带分别为Upper Alignment Marker和Lower Alignment Marker。M:Alignment marker(对齐标记物)。
Performance
Type-it Mutation Detect PCR Kit优于其他供应商的试剂盒,确保可靠的突变分析。该试剂盒专门研发并经功能验证,可用于对缺失或插入等突变进行多重PCR分析,也可检测遗传修饰的有机体或微生物(参见"Sensitive detection of a mutated cancer-related gene)。该试剂盒也适合用作商业化SNP检测PCR体系的预扩增方法,如Applied Biosystems提供的SNaPshot体系(参见"Superior preamplification of SNPs")。
Principle

Type-it Mutation Detect PCR Kit基于专有的QIAGEN Multiplex Technology,以即用型预混液形式提供。预混液含有浓度经优化的HotStarTaq Plus DNA Polymerase、MgCl2、dNTPs和一种创新的PCR缓冲液,专用于对突变进行多重PCR检测,或是对基因组SNP位点进行预扩增。该试剂盒还包含创新的添加剂Factor MP,以及平衡比例的盐和添加剂。这些组分使反应中的所有引物都具有相当的退火和延伸效率(参见"Stable and efficient annealing"),可平行地对所有片段进行可靠的高产量多重扩增。该试剂盒包括专门用于检测突变的操作流程,以及对模板量、循环数、PCR条件和不同下游分析平台仪器细节的建议,分析平台包括琼脂糖凝胶、毛细管测序仪、Agilent Bioanalyze和QIAxcel Advanced System。

预混液中所有组分配合专有的操作流程,可平行地对所有片段进行高特异性扩增。后续分析简单、直接,可在琼脂糖凝胶、自动化电泳仪上进行,也可进行高分辨率毛细管测序。

Type-it Mutation Detect PCR Buffer

Type-it Mutation Detect PCR Buffer确保高级别多重实验中的所有扩增子具有相当的扩增效率,可整合多个突变靶点,不会丢失任何突变靶点的扩增效率。与常规PCR试剂不同,Type-it Mutation Detect PCR Buffer含有特别研发的、比例平衡的盐和添加剂,确保反应中所有引物的退火和延伸具有同等的效率。KCl和(NH4)2SO4独特的结合比例,使PCR缓冲液与常规PCR缓冲液相比,可在更宽范围的退火温度和Mg2+浓度下提供严格的引物退火条件。极大的减少通过改变退火温度或Mg2+浓度的PCR优化过程,有时甚至不需要。通常使用的多重PCR优化步骤几乎不需要。缓冲液中还含有合成的Factor MP(参见"Stable and efficient annealing"),不论引物序列如何都可进行有效的引物退火和延伸。Factor MP可提高DNA模板处的引物浓度,稳定特定结合的引物。

Q-Solution

Type-it Mutation Detect PCR Kit提供Q-Solution。这种创新的PCR添加剂通过修饰DNA的熔解行为,便于扩增难扩增的模板。使用这种独特的试剂常常能完成或改进不理想的PCR。与DMSO和其他PCR添加剂不同,Q-Solution可在多种引物-模板体系中使用特定工作浓度,而不会产生毒性作用。

CoralLoad Dye

Type-it Mutation Detect PCR Kit提供CoralLoad Dye(参见"CoralLoad Dye"),这种染料含有一种胶上样试剂和两种胶示踪染料,提高移液的可见性,便于估计DNA迁移距离及优化琼脂糖凝胶电泳时间。在多重PCR反应中使用CoralLoad Dye,扩增产物可直接上样到琼脂糖凝胶或QIAxcel Advanced System中,无需提前加入上样缓冲液。CoralLoad染料不会干扰大部分下游酶应用。但是,为获得可重复性的结果,建议在进行酶处理前纯化PCR产物。                                                    如果使用毛细管测序仪进行检测,不能使用CoralLoad Dyes。

Procedure

Type-it Mutation Detect PCR Kit包括专有的、特异性的操作流程,可同时扩增和后续检测含突变的位点或SNPs,保证在常规分析中获得可靠结果,也可用于新检测的建立。可在室温下建立反应,确保更大的便利性和易用性。

快速、简单的方法,获得可靠的基因分型结果

Type-it Mutation Detect PCR Kit确保快速、简单的多重分析构建,以获得准确、可重复的基因分型结果。无论检测易位、缺失、插入或预扩增基因组位点用于SNP分析,如SNaPshot(Applied Biosystems),只需加入模板和引物后,根据优化方案开始热循环程序即可。反应混合物含有突变特异性多重PCR所需的所有试剂,与目前的其他方法相比,无需冗长的优化步骤即可获得准确的结果(参见"Successful multiplex PCR-based genotypic analysis")。

简单的操作流程,节约时间和成本

有些研究需要分析疾病相关的某个基因的很多不同突变(如缺失、易位或插入),如果进行单重或低级别PCR分析,需要众多的PCR反应,增加时间和成本。Type-it Mutation Detect PCR Buffer确保高级别多重实验中的所有扩增子具有相当的扩增效率,可整合多个突变靶点,大大节约时间和成本(参见"Sensitive detection of a mutated cancer-related gene")。此试剂盒含有专门的、应用特异性的操作流程,可同时扩增和后续检测含突变的位点或SNPs,保证在常规分析中获得可靠结果,也可用于新检测的建立。

可靠的SNP预扩增 

Type-it Mutation Detect PCR Kit非常适合对SNPs进行多重PCR预扩增(如来自Applied Biosystems的SNaPshot系统)。此试剂盒优于来自其他供应商的试剂盒,可持续获得可靠的结果,无需繁琐的优化步骤(参见"Superior preamplification of SNPs")。

Applications

Type-it Mutation Detect PCR Kit可用于分析缺失、插入、重复和易位的突变,以及进行SNP预扩增(如SNaPshot Multiplex Kit)。该试剂盒可用于多种研究领域:

  • 疾病基因位点的分型
  • 转基因生物分析
  • 转基因植物或动物的分型
Features
Specifications
应用 Multiplex PCR, detection of mutations, preamplification of SNPs
预混液 Yes
产品使用 Functionally validated and developed for reliable mutation analyis
反应类型 PCR amplification
real-time或终点法PCR Endpoint
样本/目标类型 Genomic DNA
单一或多重 Multiplex
有/无热启动酶 With
fragment fix placeholder