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QIAGEN PCR Cloningplus Kit

直接克隆PCR产物

  • 从PCR产物到涂板只需40分钟
  • 即用型Ligation Master Mix
  • 高特异性UA杂交,用于高效克隆
  • 试剂盒提供感受态细胞
  • 转化细胞可立刻涂板
QIAGEN PCR Cloningplus Kit提供即用型连接反应,包括3'端含有U突出末端的线性克隆载体,3'端带有A突出末端的PCR产物可直接进行高效、快速的连接和克隆。QIAGEN PCR Cloningplus Kit还提供E. coli感受态细胞和SOC培养基,用于高效转化。
Cat No./ID: 231222
QIAGEN PCR Cloningplus Kit (10)
For 10 reactions: 2x Ligation Master Mix (50 µl), pDrive Cloning Vector (0.5 µg), Distilled water (1.7 ml), QIAGEN EZ Competent Cells (10 tubes, 50 µl each), SOC medium (2 x 1.9 ml)
Cat No./ID: 231224
QIAGEN PCR Cloningplus Kit (40)
For 40 reactions: 2x Ligation Master Mix (200 µl), pDrive Cloning Vector (2.0 µg), Distilled water (1.7 ml), QIAGEN EZ Competent Cells (40 tubes, 50 µl each), SOC medium (6 x 1.9 ml)

QIAGEN PCR Cloningplus Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


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无需复原孵育直接转化。
QIAGEN EZ Competent Cells无需复原孵育将pUC18质粒DNA转化至QIAGEN EZ Competent Cells (>108 cfu/µg DNA)、TOP 10F (Supplier I;>109 cfu/µg DNA) 和JM109 (Supplier P;>108 cfu/µg DNA) 感受态细胞内。遵循各供应商推荐的实验方案,并将所有细胞立即接种至琼脂/氨苄青霉素平板上,无需在SOC培养基中进行复原孵育。将菌落数转换为相对百分比,比较时设置QIAGEN EZ Competent Cells为100%。菌落数不进行转化效率标准化。标准化会导致QIAGEN EZ Competent Cells的转化效率更高。
Performance

QIAGEN PCR Cloningplus Kit整合了最新的具有省时特点的连接技术,可对Taq和其他非高保真DNA聚合酶产生的PCR产物进行快速、简单、高效的克隆。QIAGEN PCR Cloningplus Kit优于其他供应商的试剂盒,确保结果成功。与基于TA的克隆载体相比,使用pDrive Cloning Vector克隆更加快速(参见"Highly specific cloning with a shorter ligation time of 30 min"、"Highly specific cloning with a ligation time of 4 h"和表格)。QIAGEN PCR Cloningplus Kit提供QIAGEN EZ Competent Cells,无需费时的复苏过程即可高效转化(每微克DNA >108个菌落形成单位(CFU);参见"Transformation without recovery incubation")。

从PCR产物到涂板不同的克隆方法所需的时间
QIAGEN PCR Cloningplus Kit Topoisomerase介导的克隆试剂盒 基于TA的克隆试剂盒 常规连接酶克隆
40 min ≥70 min ≥5.5 h ≥7.5 h
Principle

pDrive Cloning Vector(参见"pDrive Cloning Vector")通过UA杂交可对PCR产物进行高效克隆。载体是3'端带有U突出末端的线性形式,能与Taq和其他非高保真DNA聚合酶产生的带有A突出末端的PCR产物进行高特异性杂交。pDrive Cloning Vector具有很多有用的特征,便于对克隆的PCR产物进行分析。这些特征包括多种独特的限制性酶切识别位点、通用测序引物位点和用于体外转录的启动子。此外,载体还可进行氨苄青霉素和卡那霉素筛选,以及对重组克隆的蓝/白斑筛选。

PCR产物可高效克隆到pDrive Cloning Vector,与基于TA的克隆载体相比,所需时间更少。而且,T是最可能与非互补碱基(如G、C和T)杂交的碱基,带有T突出末端的载体更可能发生自连或连接克隆引物或退火引物,导致假阳性克隆数目增加。相比起来,pDrive Cloning Vector具有更高克隆效率,表明U对非特异性碱基配对有更低容忍度。

Ligation Master Mix采用预混形式,专用于为高效克隆提供最佳的杂交环境。

使用QIAGEN EZ Competent Cells能让克隆步骤更加快速和方便。转化的细胞通常都需要在SOC培养基中孵育复苏,需要时间来表达抗性。与此不同,QIAGEN EZ Competent Cells不需要这个耗时的复苏孵育步骤即可高效转化(每微克DNA >108个菌落形成单位(CFU)。

QIAGEN PCR Cloningplus Kit的组成
成分 包括 浓度
pDrive Cloning Vector
50 ng/µl
Ligation Master Mix
2x solution
Distilled Water
QIAGEN EZ Component Cells
SOC medium
1x solution
Procedure
直接将PCR产物和pDrive Cloning Vector及Ligation Master Mix简单混合,再将连接反应液加入到感受态细胞中进行转化。QIAGEN EZ Competent Cells在转化后无需在SOC培养基复苏孵育,可直接在琼脂/氨苄青霉素培养基上涂板。

与拓扑异构酶法、TA法、常规粘性末端和平末端克隆方法相比,QIAGEN PCR Cloningplus Kit(参见"PCR Cloning Kit procedure")操作流程更加快速。连接需要30分钟,使用QIAGEN EZ Competent Cells进行转化和涂板只需10分钟,从PCR产物到涂板的整个操作流程只需40分钟。

Applications
QIAGEN PCR Cloningplus Kit适用于克隆任何3'端带有单独A突出末端的PCR产物。使用Taq和其他非高保真DNA聚合酶产生的PCR产物无需任何制备,可直接进行克隆。提供高保真DNA聚合酶的试剂盒,如HotStar HiFidelity Polymerase Kit和QIAGEN LongRange PCR Kit,可产生带有A突出末端的PCR产物,非常适合与QIAGEN PCR Cloningplus Kit配合使用。
Features
Specifications
应用 Cloning of A overhang PCR products
感受态细胞 QIAGEN EZ Competent Cells
末端突起 U overhang
反应类型 UA hybridization
包括的载体 pDrive Cloning Vector

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试剂盒操作手册 (1)
For QIAGEN PCR Cloning Kit QIAGEN PCR Cloningplus Kit
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产品介绍与指南 (1)
参考文献
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