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QIAGEN PCR Cloning Kit

直接克隆Taq DNA聚合酶产生的PCR产物
  • 从PCR产物到涂板只需40分钟
  • 易用的连接酶预混液
  • 高特异性UA连接和高效克隆
  • 转化细胞可立刻涂板

QIAGEN PCR Cloning Kit提供即用型连接反应,包括3'端含有U突出末端的线性克隆载体,可直接进行高效、快速的连接和克隆。

Cat No./ID: 231122
QIAGEN PCR Cloning Kit (10)
For 10 reactions: 2x Ligation Master Mix (50 µl), pDrive Cloning Vector (0.5 µg), Distilled water (1.7 ml)
Cat No./ID: 231124
QIAGEN PCR Cloning Kit (40)
For 40 reactions: 2x Ligation Master Mix (200 µl), pDrive Cloning Vector (2.0 µg), Distilled water (1.7 ml)

QIAGEN PCR Cloning Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


0
仅需30分钟的连接时间,获得更高特异性克隆结果。
使用不同长度(0.5 kb、1 kb和3 kb) 的PCR产物,比较QIAGEN PCR Cloningplus Kit和TA-based cloning kit (Supplier I) 的连接时间对克隆效率的影响。遵循各试剂盒的推荐实验方案。将菌落数转换为相对百分比,比较时设置QIAGEN PCR Cloningplus Kit实验的结果为100%。连接时间为30分钟 (QIAGEN PCR Cloningplus Kit建议)。
1
4小时连接时间实现高度特异性克隆。
使用不同长度(0.5 kb、1 kb和3 kb) 的PCR产物,比较QIAGEN PCR Cloningplus Kit和TA-based cloning kit (Supplier I) 的连接时间对克隆效率的影响。遵循各试剂盒的推荐实验方案。将菌落数转换为相对百分比,比较时设置QIAGEN PCR Cloningplus Kit实验的结果为100%。连接时间为4小时 (TA-based的克隆试剂盒建议)。
2
QIAGEN PCR Cloning Kit实验流程。
只需将PCR产物与pDrive Cloning Vector和Ligation Master Mix直接混匀、孵育,然后将连接反应物加入感受态细胞中进行转化即可。
3
pDrive Cloning Vector。
pDrive Cloning Vector具有诸多有用的特性,可简化克隆PCR产物的分析。这些特性包括大量独特的限制酶识别位点、通用测序引物位点和可用于体外转录的启动子。此外,采用该载体还可实现氨苄青霉素和卡那霉素选择性,及重组菌落的蓝/白斑筛选。
Performance

QIAGEN PCR Cloning Kit整合最新的具有省时特性的连接技术,可对使用Taq和其他非高保真DNA聚合酶的PCR产物进行快速、简单、高效的克隆。QIAGEN PCR Cloning Kit优于其他供应商的试剂盒,确保结果成功。与基于TA的克隆载体相比,使用pDrive Cloning Vector克隆更加快速(参见"Highly specific cloning with a shorter ligation time of 30 min"和"Highly specific cloning with a ligation time of 4 h"和表格).

从PCR产物到涂板不同的克隆方法所需的时间
QIAGEN PCR Cloning Kit Topoisomerase介导的克隆试剂盒 基于TA的克隆试剂盒 常规连接酶克隆
40 min ≥70 min ≥5.5 h ≥7.5 h
Principle

pDrive Cloning Vector(参见"pDrive Cloning Vector")通过UA杂交可对PCR产物进行高效克隆。载体是3'端带有U突出末端的线性形式,能与Taq和其他非高保真DNA聚合酶产生的带有A突出末端的PCR产物进行高特异性杂交。pDrive Cloning Vector具有很多有用的特征,便于对克隆的PCR产物进行分析。这些特征包括多种独特的限制性酶切识别位点、通用测序引物位点和用于体外转录的启动子。此外,载体还可进行氨苄青霉素和卡那霉素筛选,以及对重组克隆的蓝/白斑筛选。

PCR产物可高效克隆到pDrive Cloning Vector,与基于TA的克隆载体相比,所需时间更少。而且,T是最可能与非互补碱基(如G、C和T)杂交的碱基,带有T突出末端的载体更可能发生自连或连接克隆引物或退火引物,导致假阳性克隆数目增加。相比而言,pDrive Cloning Vector具有更高的克隆效率,表明U对非特异性碱基配对有更低的容忍度。

Ligation Master Mix采用预混形式,专用于为高效克隆提供最佳的杂交环境。

QIAGEN PCR Cloning Kit的组成
成分 包含 浓度
pDrive Cloning Vector 50 ng/µl
Ligation Master Mix 2x solution
Distilled water
QIAGEN EZ Competent Cells
SOC medium
Procedure

直接将PCR产物和pDrive Cloning Vector及Ligation Master Mix简单混合,再将连接反应液加入到感受态细胞中进行转化。

与拓扑异构酶法、TA法、常规粘性末端和平末端克隆方法相比,QIAGEN PCR Cloning Kit操作流程更加快速。连接需要30分钟,使用QIAGEN EZ Competent Cells进行转化和涂板只需10分钟,从PCR产物到涂板的整个操作流程只需40分钟。

Applications
QIAGEN PCR Cloning Kit适用于克隆任何3'端带有单独A突出末端的PCR产物。使用Taq和其他非高保真DNA聚合酶产生的PCR产物无需任何制备,可直接进行克隆。提供高保真DNA聚合酶的试剂盒,如HotStar HiFidelity Polymerase Kit和QIAGEN LongRange PCR Kit,可产生带有A突出末端的PCR产物,非常适合直接与QIAGEN PCR Cloning Kit配合使用。
Features
Specifications
应用 Cloning of A overhang PCR products
感受态细胞 Not included
末端突起 U overhang
反应类型 UA hybridization
包括的载体 pDrive Cloning Vector

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试剂盒操作手册 (1)
For QIAGEN PCR Cloning Kit QIAGEN PCR Cloningplus Kit
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产品介绍与指南 (1)
参考文献
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