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QIAGEN Multiplex PCR Plus Kit

用于成功的进行多重PCR反应

  • 成功的进行多重PCR反应,适用于高要求应用
  • 稳定、可靠的结果
  • 快速建立多重PCR反应体系,无需优化
  • 反应时间缩短,更加便利
QIAGEN Multiplex PCR Plus Kit专为便利、灵敏的多重PCR设计,无需优化。该试剂盒基于专有的多重PCR技术,能够在首次尝试即获得成功的结果,且比以往更快更便利。该试剂盒提供便利的预混液。预混液独特的成分确保了反应的高特异性和高灵敏度。该预混液包含新型的缓冲液,专为多重PCR研发。该试剂盒还提供新型的辅助剂Q-Solution,有助于扩增难以扩增的片段,如富含GC的区域或具复杂二级结构的模板。该试剂盒还提供CoralLoad Dye,确保DNA迁移的操作便利且可视。
Cat No./ID: 206151
QIAGEN Multiplex PCR Plus Kit (30)
For 30 x 50 μl multiplex PCR reactions: 2x Multiplex PCR Master Mix (1 x 0.85 ml), 5x Q-Solution (1 x 2 ml), RNase-Free Water (1 x 1.9 ml), 10x CoralLoad Dye (1 x 1.2 ml)
Cat No./ID: 206152
QIAGEN Multiplex PCR Plus Kit (100)
For 100 x 50 μl multiplex PCR reactions: 2x Multiplex PCR Master Mix (3 x 0.85 ml), 5x Q-Solution (1 x 2 ml), RNase-Free Water (2 x 1.9 ml), 10x CoralLoad Dye (1 x 1.2 ml)

QIAGEN Multiplex PCR Plus Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


1
高效的19重PCR。
在标准条件下使用QIAGEN Multiplex PCR Plus Kit,且未进一步优化 (QIAGEN),或者在多种浓度下使用Supplier AII的热启动DNA聚合酶,对19个靶点进行多重PCR (99–955 bp)。[A] 使用琼脂糖凝胶进行分析。[B] 使用QIAxcel Advanced System进行分析。使用QIAGEN Multiplex PCR Plus Kit可实现所有靶点的特异性扩增,且无需优化。使用Supper AII的试剂盒进行多重PCR,尽管采用了不同的酶浓度进行长时间优化,且使用较高的浓度,但仍无法获得预期的PCR产物。M:GelPilot 100 bp Plus Ladder。
2
对多种量的模板进行成功的16重PCR。
使用QIAGEN Multiplex PCR Plus Kit对不同量的人基因组DNA(1 ng至1 µg)的16个靶点(99–955 bp)进行扩增。在各种情况下均可获得极佳的多重PCR结果。M:GelPilot 100 bp Plus Ladder。
5
预扩增的cDNA与非预扩增的cDNA。
依据补充实验方案(每次qPCR使用0.08 ng起始cDNA)使用QIAGEN Multiplex Plus Master Mix预扩增HeLa cDNA,或不扩增(每次PCR使用1 ng cDNA)。使用QuantiFast SYBR® Green Kit分析细胞凋零通路中涉及的80个不同基因的表达水平。未扩增的样本与预扩增的样本的CT值相关性很高(R2=0.982),表明预扩增对所有80个基因的扩增是平均、无偏差的。
Performance

QIAGEN Multiplex PCR Plus Kit基于QIAGEN专有的PCR技术确保了在首次尝试即可得到成功的PCR。预优化的混合液包括HotStarTaq Plus DNA Polymerase和新型的PCR缓冲液体系,专为多重PCR研发。由HotStarTaq Plus DNA Polymerase提供的严格热启动机制和该缓冲液独特的成分,通过防止非特异性退火引物和引物二聚体,提高多重反应的特异性。

高特异性和灵敏度,无需优化

QIAGEN Multiplex PCR Plus Kit由于其他经测试的供应商的试剂盒,并在多重PCR应用中确保高特异性和灵敏度,无需优化PCR参数(参见"Efficient 19-plex PCR"和"Successful 16-plex PCR over a wide range of template amounts")。该试剂盒还包含新型的辅助剂Q-Solution,用于扩增高GC含量的模板,优化欠佳的PCR。

可靠的结果可节省时间和成本,用于高级应用

QIAGEN Multiplex PCR Plus Kit可成功应用于广泛的高级应用(参见下表)。该试剂盒提供的简单的反应设置、快速的操作流程和简易的操作提供快速可靠的结果,无需PCR参数优化。多重检测研发简单易行,能够在常规研究中有效节省时间和成本。

成功用于各种应用的多重分析
DNA或cDNA源 应用
植物、动物/人类 卫星DNA分析(比如,STR或VNTR分析)
转基因植物/动物的分型
谱系分析(比如,农场动物)
GMO分析 
病原体的检测 
食物分析
性别检测 
突变检测
SNP位点扩增
定性和半定量 
基因分析
剪接异构体鉴定
细菌/病毒 卫生分析
病原体检测
微生物基因分型
环境样本 宏基因组研究
其他 汇集单一检测(节省时间和成本)
靶位富集用于高通量测序古代DNA
基因表达研究
HotStarTaq Plus DNA Polymerase规格

浓度:5单位/µl
重组酶:
底物类似物:dNTP、ddNTP、dUTP、biotin-11-dUTP、DIG-11-dUTP、荧光-dNTP/ddNTP
延伸率:72°C下2–4 kb/分钟
半衰期:97°C下10分钟;94°C下60分钟
扩增效率:≥105
5'–>3'外切酶活性:有
Extra A辅助剂: 有
3'–>5'外切酶活性:
污染核酸:
污染RNA酶:
污染蛋白酶:
自吸泵活性:

Principle

QIAGEN Multiplex PCR Plus Kit基于QIAGEN专有的多重PCR技术,含有即用型混合液。该试剂盒所有的成分专为提供最易操作和最大速度研发,提供一致可靠的结果(参见下表)。Multiplex PCR Master Mix包含优化的HotStarTaq Plus DNA Polymerase和MgCl2浓度,以及dNTP和新型的PCR缓冲液。

多重PCR成功的关键因素,用于各种应用的一致可靠的结果

Multiplex PCR为研究者节省时间和成本用于进行大量的PCR反应,广泛应用于基因分型以及在研究、法医和分子检测实验室的DNA或cDNA检测应用。应用范围包括分型和转基因生物和病原体的分析、微卫星的扩增分析、检测SNP突变区域,以及宏基因组学研究。然而,多重PCR技术要求严格。PCR优化是多重PCR成功与否的关键因素。多重PCR中不同引物对不同杂交动力学可能导致如下问题,如扩增偏向性。能高效率结合的引物,更多地利用扩增反应元件,从而降低了其他PCR产物的产量。由于更大的引物量,因此存在更大的形成引物二聚体和非特异性启动的风险。不解决这些风险导致低灵敏度、非特异性扩增和选择靶位的偏向性扩增,因此得到不一致的不令人满意的结果。共格这些瓶颈需要繁琐耗时的优化步骤,导致成本的增加。QIAGEN Multiplex PCR Plus Kit消除了这些风险,在首次尝试时就运行顺利。Multiplex PCR Master Mix独特的组成确保了高特异性和灵敏度的扩增反应,甚至是难扩增的靶位。该试剂盒能快速成功地建立所有多重PCR检测,有效的节省时间和成本(参见"Successful multiplex PCR without the need for optimization")。

HotStarTaq Plus DNA Polymerase

HotStarTaq Plus DNA PolymeraseTaq DNA聚合酶的优化形式,在室温下无聚合酶活性。这能防止在PCR设置和PCR初始循环过程中,低温下非特异性退货引物的延伸和引物二聚体的形成。无需优化反应条件。在室温下可方便设置多重检测。HotStarTaq DNA Polymerase在95°C下孵育5分钟激活,可整合入现有的各种热循环程序中。

多重PCR缓冲液

这特殊的缓冲液包含优化的混合物由K+和NH4+以及独特的PCR辅助剂、MP因子组成可增加模板引物的局部浓度(参见"Stable and efficient annealing")。将非特异性退火最小化并成功地平行扩增所有靶位,甚至只有非常少量的模板。配合K+和其他阳离子、MP因子稳定特异性结合的引物,并能够用HotStarTaq Plus DNA Polymerase进行高效的引物延伸。通过在每个PCR循环中高比率的特异性-非特异性引物结合,该新型的缓冲液维持每个PCR循环的特异性扩增。由于KCl和(NH4)2SO4独特的平衡结合,相比传统的PCR缓冲液,该缓冲液能在更广泛的退火温度和Mg2+浓度下,提供严格的引物退火条件。通过改变退火温度或Mg2+浓度可优化PCR,因此通常将优化过程最小化或无需要优化。

该试剂盒包含独特的辅助剂Q-Solution,促进难扩增的靶位扩增如富含GC的区域或具有复杂二级结构的模板。该试剂盒还含有高度灵活的CoralLoad Dye,通过提高移液器的可视性和后续的凝胶上样以及DNA迁移的可视性,来进一步提高操作的方便性(参见"Easy PCR setup and convenient DNA visualization")。

QIAGEN Multiplex PCR Plus Kit的优点
试剂盒组分 优点
HotStarTaq Plus DNA Polymerase 高特异性和灵敏度扩增
室温设置
5分钟激活时间
Multiplex PCR Plus Buffer with Factor MP 平行扩增所有靶位
无需优化PCR参数
单一的用于所有多重检测的实验方案
快速的操作流程
CoralLoad Dye
移液过程中简单的可视化
可即可凝胶上样
DNA迁移的可视化
Q-Solution
扩增困难靶位
Procedure

QIAGEN Multiplex PCR Plus Kit能够在首次尝试就可成功进行多重PCR。

简单快速的下游分析

QIAGEN Multiplex PCR Plus Kit使用多种方法得到的多重PCR产物的下游分析简单快速。无论分析是否使用琼脂糖凝胶电泳,毛细管电泳或是否使用QIAxcel Advanced System,所有阳离子可方便的可视化,单独的片段也可有效区别。

便利的试剂盒规格

QIAGEN Multiplex PCR Plus Kit提供更方便的即用型预优化混合液。使用混合物节省时间、简化反应设置操作,并通过消除众多移液失误和污染的可能性来增加可靠性,将移液步骤最小化并去除繁琐的计算。只需将引物和模板加入来制备最终扩增混合物。混合液可在2–8°C下储存,可更快速的设置多重PCR检测。可在室温下设置反应,操作简便,易于使用。HotStarTaq Plus DNA Polymerase在95°C经5分钟孵育激活,可整合入现有的热循环程序中。试剂盒中包含的CoralLoad Dye便于使用,提高PCR设置中移液的可视化和凝胶上DNA迁移的可视化。

Applications
QIAGEN Multiplex PCR Plus Kit能成功应用于多种应用,从转基因生物分型、病原体检测到癌症研究、宏基因组学和基因表达分析。
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