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QIAGEN LongRange PCR Kit

用于高灵敏度、准确的长片段PCR扩增

  • 扩增得到长片段PCR产物(最长至40 kb DNA)
  • 高保真酶确保低错配率
  • 独特的缓冲液体系最大程度的减少PCR条件优化
  • 扩增低拷贝和高GC含量模板

QIAGEN LongRange PCR Kit提供专用的、高度可靠的解决方案,用于对基因组DNA和cDNA,甚至是低拷贝数模板,进行长片段扩增。新型的高保真酶可确保低错配率。该试剂盒包含核苷酸,高度适用于复杂的基因分型实验。

Cat No./ID: 206401
QIAGEN LongRange PCR Kit (20)
For 20 x 50 µl reactions: LongRange PCR Enzyme Mix (40 U), LongRange PCR Buffer, 5x Q-Solution, RNase-Free Water, 10 mM dNTPs
Cat No./ID: 206402
QIAGEN LongRange PCR Kit (100)
For 100 x 50 µl reactions: LongRange PCR Enzyme Mix (200 U), LongRange PCR Buffer, 5x Q-Solution, RNase-Free Water, 10 mM dNTPs
Cat No./ID: 206403
QIAGEN LongRange PCR Kit (250)
For 250 x 50 µl reactions: LongRange PCR Enzyme Mix (500 U), LongRange PCR Buffer, 5x Q-Solution, RNase-Free Water, 10 mM dNTPs

QIAGEN LongRange PCR Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


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长片段PCR产物的产量高。
使用QIAGEN LongRange PCR Kit及指定供应商的其他2种长片段PCR试剂盒,参照生产商的说明,从人基因组DNA中扩增长片段PCR产物 (27 kb和24 kb)。使用QIAGEN LongRange PCR Kit获得的特异性产物的产量大大高于其他测试试剂盒。
1
保护DNA不受损伤。
将白细胞基因组DNA分别溶解于水(Water)、Supplier A的长片段PCR缓冲液(Standard buffer) 或QIAGEN LongRange PCR Buffer (LongRange Buffer) 中,直接用于PCR () 或者置于95°C孵育 (+) 后进行PCR。使用QIAGEN LongRange PCR Kit进行扩增反应 (50 μl)。M:分子量标准。将DNA置于QIAGEN LongRange PCR Buffer中预处理可防止损伤,从而提高产量。当DNA置于水或标准的长片段PCR缓冲液中预处理时,DNA损伤增多,导致产物产量下降。
Performance

QIAGEN LongRange PCR Kit包含所有需要用于长片段PCR扩增(长达40 kb)的组分。独特的耐热DNA聚合酶具有增强的处理能力,甚至能够从极小量的模板中扩增长片段的PCR产物。酶混合物具有高延伸率和校对提高保真度的能力(比Taq DNA聚合酶至多高5倍的保真度)。新型的缓冲体系甚至能够从复杂的基因组DNA中,进行高度特异性长片段PCR扩增(参见"High yields of very long PCR products")。此外,该缓冲液能提供保护防止脱嘌呤、确保全长度扩增(参见"Protection of DNA from excessive damage")。在LongRange PCR Buffer中预孵育的DNA的PCR产物产量,与未受损的对照DNA相似,表明缓冲体系的保护功能为长片段PCR产物扩增提供了理想的反应环境。独特LongRange PCR Buffer优化了高温下(72–94°C)pH值缓冲,降低了pH导致的模板降解。与Q-Solution(也包含在该试剂盒中)结合使用,能更进一步方便的扩增富含GC和其他“困难”的模板。

QIAGEN LongRange Kit规格
规格  长片段PCR LongRange 2Step RT-PCR
应用 克隆、测序、标准PCR可达40 kb 克隆、基因表达分析、标准两步法RT-PCR可达12.5 kb
酶组分 DNA聚合酶、高保真酶 逆转录酶、DNA聚合酶、高保真酶
所需最小优化 独特的缓冲液体系和优化的实验方案 独特的缓冲液体系和优化的实验方案
总RNA量 50 ng–4 µg总RNA
总DNA量 50–500 ng
扩增富含GC片段的模板 提供Q-Solution 提供Q-Solution
Principle

QIAGEN LongRange PCR Kit将强大的聚合酶混合物与新型的专用于有效扩增长达40 kb靶的缓冲体系结合。该试剂盒也包含Q-Solution,一种PCR添加剂有助于扩增富含GC片段的模板和dNTP。

LongRange PCR Enzyme Mix

LongRange PCR Enzyme Mix是高纯度重组耐热DNA聚合酶和持续合成能力增强因子的混合物,克隆在E. coli内。这种独特的酶混合物确保了高延伸率和高保真率,能够成功扩增极长的片段。

优化的缓冲液体系,用于极长的PCR产物

扩增大于4 kb长的PCR产物通常失败,并通常需要优化长度的操作流程。失败的原因包括非特异性引物退火或欠佳的循环条件。避免DNA损伤,如DNA脱嘌呤,在扩增长片段PCR产物尤为重要,因为模板中一个DNA损伤就足以影响聚合酶效率。PCR循环过程中的DNA损伤可使用特殊的缓冲液将其降到最低,用来稳定反应中的pH值。QIAGEN LongRange PCR Buffer经优化用于扩增长达40 kb的PCR产物,并提供有效保护防止其脱嘌呤(参见"Protection of DNA from excessive damage")。

扩增稀少和困难模板

独特的LongRange PCR Buffer优化了高温下(72–94°C)pH缓冲的性能、降低了pH导致的模板降解。与Q-Solution(已提供)相结合,能进一步优化富含GC片段和其他“困难”模板的扩增。

Procedure

QIAGEN LongRange PCR Kit包含预优化的实验方案,用于可靠的精确长片段PCR,片段长达40 kb。该试剂盒能成功运用于扩增长片段靶(所有靶都在0.1–10 kb范围内)、极长片段靶(基因组DNA >10 kb;游离态DNA 10–40 kb)、从逆转录反应获得的长cDNA模板和富含GC片段和其他“困难”模板。

Applications

QIAGEN LongRange PCR确保对标准或复杂模板(甚至低丰度或富含GC 片段的模板)进行准确的长片段扩增,并高度适用于所有PCR应用,包括测序或定点重测序、拷贝数变异的验证(CNV)、染色体易位断点图谱和其他结构变异以及克隆。

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