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QIAGEN Fast Cycling PCR Kit

用于超快速和特异性PCR,适合各种PCR仪

  • 热启动PCR扩增,少于15分钟(35个循环)
  • 适合各种PCR仪器
  • 即用型预混液含有HotStarTaq Plus DNA Polymerase
  • 可直接用于电泳上样的PCR缓冲液,操作简单快速
  • 无需为快速PCR重新设计引物
快速循环PCR预混液包含HotStarTaq Plus DNA Polymerase适合高特异性高灵敏度的PCR反应,以及独特的缓冲液体系用于极短时间的变性、退火和延伸步骤。专有的PCR缓冲体系明显缩短了聚合酶、引物和模板复合体形成所需的时间,因此将总的PCR循环时间从1.5小时左右缩短到20分钟。Optional CoraLoad Dye(同样包含在该试剂盒中)包括胶示踪染料,使分析更加简单。此外,该试剂盒还包含新型的辅助剂Q-Solution,有助于实现“困难”模板(比如,GC含量高的模板)的高效扩增。
Cat No./ID: 203741
QIAGEN Fast Cycling PCR Kit (50)
For 50 x 20 μl reactions: 0.5 ml QIAGEN Fast Cycling PCR Master Mix, 10x CoralLoad Dye, 5x Q-Solution, RNase-Free Water
Cat No./ID: 203743
QIAGEN Fast Cycling PCR Kit (200)
For 200 x 20 μl reactions: 2 x 1 ml QIAGEN Fast Cycling PCR Master Mix, 10x CoralLoad Dye, 5x Q-Solution, RNase-Free Water
Cat No./ID: 203745
QIAGEN Fast Cycling PCR Kit (1000)
For 1000 x 20 μl reactions: 10 x 1 ml QIAGEN Fast Cycling PCR Master Mix, 10 x CoralLoad Dye, 5x Q-Solution, RNase-Free Water

QIAGEN Fast Cycling PCR Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


1
节约多达75%的时间。
在标准循环仪上,使用HotStarTaq Plus DNA Polymerase,以标准升温时间 (S) 或者在快速循环仪上,使用QIAGEN Fast Cycling PCR Kit,以快速升温时间 (F) 扩增523 bp的产物。[A] PCR产物的琼脂糖凝胶分析显示,利用两种技术可实现同样高度特异的扩增。[B] 计算PCR总时间,包括循环时间和升温时间。在快速循环仪上,PCR时间较短主要是由于QIAGEN Fast Cycling PCR Kit可大幅减少循环时间。M:分子量标准。
2
便利、简单的实验流程。
预混液形式和HotStarTaq Plus DNA Polymerase (包含在预混液内) 确保了在室温条件下可快速轻松地实现PCR体系构建。
3
可靠的特异性结果。
使用QIAGEN Fast Cycling Kit (QIAGEN) 和另一家供应商提供的快速循环PCR解决方案 (Supplier AII),参照生产商的说明进行三种不同的PCR分析 (IL9、PKC和AGRT2),重复两次。使用QIAGEN Fast Cycling PCR Kit,每种分析均可获得高度特异性的结果,而使用Supplier AII获得的结果则无法预知,脱扣率较高且结果无特异性 (如引物二聚体)。M:分子量标准。
4
极大程度节约时间。
QIAGEN Fast Cycling PCR Kit大幅缩短了高特异性热启动PCR所需的时间。长度<3.5 kb的片段均可节省大量的时间——计算的是500 bp片段。
5
退火过程中快速循环的机制。
[A]专门的PCR缓冲液含有Q-Bond,可以加速退火步骤,将时间减少到5秒。Q-Bond提高Taq DNA聚合酶对短的单链DNA片段的亲和力,减少了引物退火所需时间。[B]没有Q-Bond时,引物和聚合酶依次结合到模板上,增加了退火步骤的持续时间。
Performance
QIAGEN Fast Cycling PCR Kit拥有高性能的HotStarTaq Plus DNA Polymerase以及在各种热循环仪上显著缩短的PCR循环时间。不同于其他常会致扩增失败的快速循环试剂,HotStarTaq Plus DNA Polymerase与QIAGEN Fast Cycling PCR Buffer结合使用,促进了特异性引物-模板退火并显著降低非特异性退火(参见"Specific and reliable results")。可在每一个PCR循环中减少非特异性产物的扩增、以及引物二聚体的形成。使用创新的专有PCR缓冲液制定方案节约时间高达75%。PCR循环时间可以从超过1小时(35个循环)减少到少于20分钟。快速升温的PCR仪可以在30分钟内实现总PCR(参见"Time savings of up to 75%")。可用Q-Solution,包含在该试剂盒中的新型辅助剂,优化PCR。
Principle

QIAGEN Fast Cycling PCR Kit以混合液规格提供,包含在每个循环仪上进行快速特异性扩增需要的所有组分(参见下表)。可有效扩增长达3.5 kb的基因组DNA和cDNA的PCR产物,包含复杂的模板。HotStarTaq Plus DNA Polymerase确保了高度特异性。使用新型的专利PCR缓冲液制定方案可显著节省时间高达75%,有效降低了形成聚合酶、引物和复杂模板。这能够让聚合酶在PCR退火阶段延伸引物,因此能有效缩短每个PCR循环中的退火过程。PCR循环时间可从超过1小时(35个循环)降低到少于20分钟(参见"Significant time savings")。快速升降温的PCR仪可将整个PCR时间控制在30分钟内(参见"Time savings of up to 75%"))。

可靠的快速循环PCR所需组分
试剂盒组分 特征
HotStarTaq Plus DNA Polymerase 高特异性产物(多达3.5 kb)
高特异性 
室温设置
Fast Cycling PCR Buffer(包含Q-Bond Molecule) 高速 
需要最少的优化
CoralLoad Dye 可立即用凝胶加载PCR产物 
优化的可视移液器
Q-Solution 方便扩增的高GC模板
QIAGEN Fast Cycling PCR Master Mix 方便快速的反应设置

高特异性和灵敏度

HotStarTaq Plus DNA Polymerase以混合液规格提供,确保了良好的热启动PCR性能。所提供的HotStarTaq Plus DNA Polymerase不具活性,在室温下没有聚合酶活性。因此可以防止较低温度时形成错配产物和引物二聚体(参见"Specific and reliable results"),同时使常温下PCR体系的构建更加方便。 HotStarTaq Plus DNA Polymerase在95°C下,由短时的5分钟诱导激活,可以较易地纳入到各种现有的PCR仪程序中。

独特的快速循环PCR缓冲液

新型的Fast Cycling PCR Buffer优化了特异性PCR产物的扩增,并显著地减少了循环时间。基于原始的QIAGEN PCR Buffer,这种新的制备方案在每个PCR循环的短时退火步骤中,确保了特异性-非特异性引物结合的高比率。由于KCl和(NH4)2SO4独特的平衡结合,相对于传统的PCR缓冲液,该PCR缓冲液提供严格的引物退火条件,具有更广泛的退火温度和Mg2+浓度。使用这种缓冲体系可在宽泛的温度范围和Mg2+浓度下获得特异性扩增,因此可有效减少PCR的优化。

创新的快速循环缓冲液包含新型的Q-Bond Molecule。这种分子可以极大地提高DNA聚合酶和单链DNA的结合能力,因此有助于将退火时间减少到仅需5秒(参见"Mechanism of fast cycling during annealing")。独特的缓冲体系配方和经优化的DNA聚合酶浓度都极大地降低了变性和延伸时间。Fast Cycling PCR Buffer被开发,从而无需对每个引物-模板体系进行优化,节省了时间和经费。使用这种缓冲体系可在宽泛的温度范围和Mg2+浓度下获得特异性扩增,而省去了耗时的优化过程。

CoralLoad染料

QIAGEN Fast Cycling PCR Kit包含新型的CoralLoad Fast Cycling Dye。这种染料可以将PCR产物直接上样到琼脂糖凝胶中而无需加入凝胶上样缓冲液(参见"Ready-to-load PCR reactions")。CoralLoad Fast Cycling Dye包含2种染料:一种橙黄色染料和一种红色的染料,有助于估计DNA迁移距离并优化凝胶电泳时间。该染料提供了优化的移液器可视性并能直接方便地将PCR产物上样到凝胶上。

Q-Solution

QIAGEN Fast Cycling PCR Kit还包含一种新型的PCR辅助剂Q-Solution,可通过改变DNA的熔解过程,来辅助困难模板的扩增。这种独特的试剂可以改善由于大量的二级结构或高GC含量的模版所导致的不理想扩增。与常用的其他PCR辅助剂,如DMSO不同,Q-Solution只有一个工作浓度,并且保证无毒和高纯度。

Procedure

QIAGEN Fast Cycling PCR Kit为方便用户使用提供方便的混合液规格。HotStarTaq Plus DNA Polymerase在95°C下经5分钟诱导激活,此步骤可方便的纳入现有的热循环方案中。使用混合液的室温反应设置快速简易。将移液步骤最小化,减少了失误和污染的可能性,确保增加了通量和可重复性。该试剂盒包含用于快速简单PCR设置的精简优化实验方案。同样有该试剂盒提供的CoralLoad Dye增加了移液器的可视性,并确保可直接方便地将PCR产物上样到凝胶样上。

PCR循环时间可从超过1小时(35个循环)减少至少于20分钟(参见"Significant time savings"和下表"用于不同片段长度的PCR循环时间")。快速升温PCR仪可仅在30分钟内得到总PCR(参见Time savings of up to 75%")。The time savings afforded by the 由于QIAGEN Fast Cycling PCR Kit可节省时间,使其高度是用于通量增加的PCR反应,并且无需购买额外的昂贵实验设备。

节省大量时间

QIAGEN Fast Cycling PCR Kit通过使用现有的实验设备增加PCR通量。该试剂盒可用于各种PCR仪,包括无特异性缺失的快速升温PCR仪(参见"Time savings of up to 75% ")。此外,不同于其他PCR试剂,使用该试剂无需调整或改变引物或退火温度。每个试剂盒组分经精心设计以提供方便可靠的快速OCR(参见"Easy and convenient procedure"和下表)。

不同片段长度的PCR循环时间
片段长度(bp) QIAGEN Fast Cycling操作流程(min) 标准循环操作流程(min) 节省时间(%)
200 15 68 78
500 20 68 71
1000 29 85 66
3000 63 155 59
Applications

QIAGEN Fast Cycling PCR Kit可用于各种PCR仪,能够增加PCR通量,并适用于高灵敏度和高特异性的PCR和常规PCR,以及以复杂基因组DNA和cDNA作为模板的PCR。该试剂盒高度适用于标准和快速PCR仪。

Features
Specifications
应用 PCR, RT-PCR, Complex genomic templates, very low copy targets
酶活 5' -> 3' exonuclease activity
预混液 Yes
反应类型 PCR amplification
real-time或终点法PCR Endpoint
样本/目标类型 Genomic DNA and cDNA
单一或多重 Single
有/无热启动酶 With hotstart