text.skipToContent text.skipToNavigation

HotStarTaq DNA Polymerase

高特异性扩增,所需优化次数少

  • 所需优化次数少
  • PCR特异性高
  • 操作方便,可在室温下构建反应体系
不同于抗体介导的方法,HotStarTaq DNA Polymerase应用化学介导的热启动,可确保聚合酶在PCR初始加热阶段完全没有活性。HotStarTaq DNA Polymerase提供独特的QIAGEN PCR Buffer,将非特异性扩增产物、引物二聚体和其他污染降至最低。一种新型的添加剂Q-Solution,可实现难扩增的模板(如GC含量高的模板)高效扩增。
Cat No./ID: 203203
HotStarTaq DNA Polymerase (250 U)
250 units HotStarTaq DNA Polymerase, 10x PCR Buffer, 5x Q-Solution, 25 mM MgCl2
Cat No./ID: 203205
HotStarTaq DNA Polymerase (1000 U)
4 x 250 units HotStarTaq DNA Polymerase, 10x PCR Buffer, 5x Q-Solution, 25 mM MgCl2
Cat No./ID: 203207
HotStarTaq DNA Polymerase (5000 U)
1 x 5000 units HotStarTaq DNA Polymerase, 1 x HotStarTaq Buffer Set (1 x 22 ml PCR Buffer, 1 x 40 ml Q-Solution, 1 x 22 ml MgCl2)
Cat No./ID: 203209
HotStarTaq DNA Polymerase (25000)
100 x 250 units HotStarTaq DNA Polymerase, 100 x 1.2 ml HotStarTaq Buffer Set, 100 x 2.0 ml Q-Solution, 100 x 1.2 ml MgCl2

HotStarTaq DNA Polymerase适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


0
HotStarTaq实验流程。
HotStarTaq实验流程快速、简单,十分便利。
1
出色的表现。
将50拷贝的HIV-pol基因重组体加入1 µg人基因组DNA中,扩增497 bp的片段。采用不同的热启动酶:QIAGEN的HotStarTaq DNA Polymerase(HotStarTaq);Supplier AII的热启动酶(Hot-start enzyme);Supplier L的Taq抗体混合物(Antibody-mediated);Supplier R的非热启动酶(No hot start)。特异性的PCR产物如箭头所示。取等体积的反应产物在2%的琼脂糖凝胶上分析。M:分子量标准。
3
对不同引物-模板体系均有较高的特异性。
在相同的条件下,使用Supplier R的Taq DNA聚合酶 (R) 或HotStarTaq DNA Polymerase (H),对三种不同的引物-模板系统进行扩增。System 1:从人基因组DNA中扩增1.1 kb的D-IgI同系物片段。System 2:从人基因组DNA中扩增与X染色体链锁型青年型视网膜裂损症相关的296 bp的染色体区域片段。System 3:利用总RNA合成的cDNA,扩增214 bp的β-actin基因片段。M:分子量标准。
4
RT-PCR中高效的热启动。
利用cDNA扩增1.1 kb的人白介素1受体 (II型) 片段。使用Supplier L的Taq DNA聚合酶和缓冲液(No hot start);使用Supplier L的抗体介导的热启动酶和缓冲液(Antibody-mediated);使用QIAGEN的HotStarTaq DNA Polymerase和PCR Buffer (HotStarTaq)制备扩增反应,重复三次。M:分子量标准。
5
高度灵敏的单细胞PCR。
利用流式细胞术分离单细胞,并直接分选至单个PCR管内,扩增500 bp的鼠p53基因片段。使用QIAGEN的HotStarTaq DNA Polymerase和PCR Buffer(HotStarTaq)、Supplier AII的热启动酶和缓冲液(Hot-start enzyme)或Supplier L的抗体介导的热启动酶和缓冲液(Antibody-mediated)制备并行反应。M:分子量标准。
6
对不同镁离子浓度的耐受性。
[A] 使用QIAGEN PCR Buffer和Taq DNA Polymerase (QIAGEN)在图示退火温度下进行PCR扩增。同时使用另一供应商(Supplier AII)的PCR缓冲液和Taq DNA聚合酶进行平行反应。扩增单拷贝人类囊性纤维化基因。M:分子量标准。[B] 对不同镁离子浓度的耐受性。使用标示浓度的Mg2+Taq DNA Polymerase及QIAGEN PCR Buffer (QIAGEN) 构建PCR反应。使用另一家供应商 (Supplier AII) 提供的PCR缓冲液和Taq DNA聚合酶,同时进行相同的PCR反应。扩增单拷贝的人朊病毒蛋白基因。M:分子量标准。
Performance

每一批HotStarTaq DNA Polymerase都经过全方位的质量控制测试,包括:严格的PCR特异性和具有可重复性的试剂,即使低拷贝的靶分子也可扩增。通过检测,HotStarTaq DNA Polymerase可确保高度特异性和在热启动PCR中的卓越表现(参见"Higher specificity with different primer–template systems"、"Superior performance"和表格)。该试剂盒提供的新型PCR缓冲液使得在多种PCR条件下都维持高特异性,无需优化(参见"Tolerance to variable magnesium concentration")。试剂盒中的Q-Solution可进一步优化PCR(参见"Amplification of difficult templates")。总之,这些组合确保了在多种应用中的特异性扩增(参见"Effect of hot start on RT-PCR performance"和"Highly sensitive single-cell PCR")。

热启动模式比较
HotStarTaq DNA Polymerase Supplier AII提供的热启动酶 抗体介导 手动 蜡屏障
特异性扩增 ++ + + +/– +/–
PCR优化需求 ++ +/– +/–
易用性 ++ ++ +
HotStarTaq DNA Polymerase特性

浓度:5 units/µl
重组酶:
底物类似物:dNTP、ddNTP、dUTP、biotin-11-dUTP、DIG-11-dUTP、fluorescent-dNTP/ddNTP
延伸速度:72°C条件下2–4 kb/min
酶半衰期:97°C条件下10 min,94°C条件下60 min
扩增效率:≥105
5'–>3'外切酶活性:
额外添加A:
3'–>5' 外切酶活性:
核酸酶污染:
蛋白酶污染:
RNases污染:
自启活性:否  

Principle

HotStarTaq DNA Polymerase,一种经修饰的Taq DNA Polymerase,确保热启动PCR的高度特异性。该试剂盒包括新型的双阳离子PCR缓冲液、Q-Solution和MgCl2

HotStarTaq DNA Polymerase

HotStarTaq DNA Polymerase以非活性形式提供,常温下没有聚合酶活性。避免PCR构建和循环初始阶段低温条件下非特异性引物的延伸和引物二聚体的形成(参见"Superior performance in hot-start PCR"和"Higher specificity with different primer–template systems")。95°C条件下孵育15分钟即可激活HotStarTaq DNA Polymerase,这个步骤可整合入已有的热循环程序中。

QIAGEN PCR Buffer

QIAGEN PCR Buffer通过提高每个PCR扩增退火过程特异性引物的结合比例,确保PCR每个循环特异性扩增(参见"Increased specificity of primer annealing")。独特的KCl和(NH4)2SO4平衡组合,使得该缓冲液与传统的PCR缓冲液相比在很宽的温度和Mg2+浓度范围内都有严格的引物退火条件和高度的特异性,无需进行耗时的优化(参见"Tolerance to variable magnesium concentration")。

Q-Solution

该产品同时提供Q-Solution,一种新型的PCR添加剂,通过更改DNA熔解行为促进难扩增模板的扩增。这种独特的试剂可进一步优化由模板引起的表现不理想的PCR,如过多的二级结构和富含GC的模板(参见"Amplification of difficult templates")。不同于DMSO和其他PCR添加剂,Q-Solution的浓度是确定的,没有毒性,并且保证PCR的纯度。而且PCR中加入Q-Solution不会影响PCR的准确性。

Procedure
HotStarTaq DNA Polymerase提供高效、经优化的实验方案,用于快速、方便的构建PCR反应体系。95°C条件下孵育15分钟激活HotStarTaq DNA Polymerase,可以整合入已有的热循环程序。反应可在室温下建立,更加方便和易于使用(参见"HotStarTaq procedure")。
Applications

HotStarTaq DNA Polymerase适合多种应用,包括各种富有挑战性的研究,如各种扩增应用:

  • 复杂的基因模板
  • 复杂的cDNA模板(如RT-PCR)
  • 低拷贝的靶序列(如单细胞PCR)
  • 多重引物对反应
Features
Specifications
应用 PCR, RT-PCR, Complex genomic templates, very low-copy targets
酶活 5' -> 3' exonuclease activity
预混液 No
反应类型 PCR amplification
real-time或终点法PCR Endpoint
样本/目标类型 Genomic DNA and cDNA
单一或多重 Single
有/无热启动酶 With hotstart

您无权限查看此资源

常见问题 (19)
FAQ ID -74
浏览
FAQ ID -75
浏览
FAQ ID -87
浏览
FAQ ID -165
浏览
FAQ ID -1745
浏览
FAQ ID -204
浏览
FAQ ID -288
浏览
FAQ ID -327
浏览
FAQ ID -380
浏览
FAQ ID -523
浏览
FAQ ID -544
浏览
FAQ ID -552
浏览
FAQ ID -565
浏览
FAQ ID -566
浏览
FAQ ID -606
浏览
FAQ ID -741
浏览
FAQ ID -750
浏览
FAQ ID -818
浏览
FAQ ID -961
浏览
试剂盒操作手册 (1)
HotStarTaq DNA Polymerase; HotStarTaq Master Mix Kit - For highly specific hot-start PCR without optimization  
显示更多
参考文献
0
fragment fix placeholder