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HotStar HiFidelity Polymerase Kit

用于高灵敏度,高保真热启动PCR
  • 高灵敏度、高特异性
  • 独特的UA/TA克隆
  • 保真性比Taq DNA Polymerase高10倍
  • 可在室温下构建反应体系,酶活化速度快
经优化的即用型试剂盒包括高保真PCR所需的所有试剂、酶、缓冲液和dNTPs。HotStar HiFidelity DNA Polymerase是一种经特异修饰的产生A突出末端的热启动校对酶,能够直接、高效的进行UA/TA克隆。缓冲液中包含Factor SB,可在PCR体系建立时防止引物和模板的降解,提供高特异性和高保真PCR。此外,Q-Solution能够有效扩增难扩增的模板(如富含GC的模板)。
Cat No./ID: 202602
HotStar HiFidelity Polymerase Kit (100)
100 units HotStar HiFidelity DNA Polymerase, 5x HotStar HiFidelity PCR Buffer (incl. dNTPs), 5x Q-Solution, 25 mM MgSO4, RNase-Free Water
Cat No./ID: 202605
HotStar HiFidelity Polymerase Kit (1000)
1000 units HotStar HiFidelity DNA Polymerase, 5x HotStar HiFidelity PCR Buffer (incl. dNTPs), 5x Q-Solution, 25 mM MgSO4, RNase-Free Water

HotStar HiFidelity Polymerase Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


0
高效的TA/UA克隆。
使用HotStar HiFidelity Polymerase Kit和标准的Taq DNA Polymerase,从100 ng的人基因组DNA中扩增955 bp的片段。使用市售的TA或UA克隆试剂盒克隆PCR产物(各4 µl)。利用蓝白斑筛选确定克隆效率。
1
高度灵敏、可靠的PCR。
使用HotStar HiFidelity DNA Polymerase (QIAGEN) 和指定供应商的4种高保真PCR酶进行PCR反应。使用10 ng和1 ng人基因组DNA,遵循供应商的建议进行并行反应。对Supplier I的两种不同的高保真酶进行检测。采用40个PCR循环扩增2.3 kb的人IL9R基因片段。M:分子量标准。
2
扩增困难模板。
使用QIAGEN PCR Buffer和Taq DNA Polymerase,不加入 (–) 或者加入 (+) 1x Q-Solution,对两种不同的引物-模板系统进行扩增,重复两次。Q-Solution可实现难以处理的模板的特异性扩增。[A] 人血管紧张素受体II基因;[B] 小鼠蛋白激酶C基因;M:分子量标准。
3
退火时引物结合的特异性增强。
QIAGEN PCR缓冲液中的铵态氮和钾离子能够在退火时促进引物的特异性结合。K+结合到DNA主链上的磷酸基团(P)上,稳定结合到模板上的引物。在热循环中,NH4+以铵离子和氨的形式存在,可以与碱基(B)之间的氢键发生相互作用,使错配碱基间的不稳定的氢键容易断开。两种阳离子的共同作用,在广泛的温度范围内保持特异性结合比例高。
Performance

HotStar HiFidelity Polymerase Kit包含一种经特异修饰的热启动校对酶,可在PCR体系建立时防止引物和模板的降解,提供高保真PCR,无需优化。通过检测,HotStar HiFidelity DNA Polymerase Kit可确保高特异性和高灵敏度扩增(参见"Highly sensitive and reliable PCR")。HotStar HiFidelity DNA Polymerase的保真性比Taq DNA polymerase高10倍。新型的HotStar HiFidelity PCR Buffer包含专有的Factor SB,提高PCR的灵敏度和可靠性,尤其在起始模板量较少的条件下。该试剂盒同时提供Q-Solution,可进一步优化PCR(参见"Amplification of difficult templates")。

HotStar HiFidelity DNA Polymerase特性

浓度:2.5 units/μl 
5'–>3'外切酶活性:否 
3'–>5'外切酶活性:
额外添加A(末端转移酶活性):
半衰期:95°C条件下>4小时
核酸酶污染:
蛋白酶污染:
RNase污染:

Principle

通常利用高保真酶3'→5'核酸外切酶的活性去除错配的整合碱基。但是,该活性会在PCR体系建立和起始时降解引物,而导致非特异性启动、扩增,甚至扩增产物失败,尤其在模板量较少的条件下。

HotStar HiFidelity DNA Polymerase

HotStar HighFidelity DNA Polymerase是从新型Pyrococcus spp.中特异分离的,经过化学修饰使聚合酶和核酸外切酶失活。5分钟热启动激活酶组分,使PCR起始阶段就有高校对能力。独特的修饰确保体系建立过程中引物和酶的完整性,防止错误启动。HotStar HiFidelity DNA Polymerase的可靠性能确保高特异性和高灵敏度的扩增。

HotStar HiFidelity PCR Buffer

新型的HotStar HiFidelity PCR Buffer包含独特的PCR添加剂,以及浓度已经优化的dNTPs和MgSO4。Factor SB是一种特有的PCR添加剂,提高PCR的灵敏度和可靠性(参见"Highly sensitive and reliable PCR")。新型的Factor SB可确保模板DNA的完整性,该DNA常常会被具有3'→5'核酸外切酶活性的高保真酶降解。

预优化试剂能够可靠的扩增特异性PCR产物,且出错率低。该缓冲液通过提高每个PCR扩增退火过程特异性引物的结合比例,确保PCR每个循环特异性扩增(参见"Increased specificity of primer annealing")。独特的KCl和(NH4)2SO4平衡组合,使得HotStar HiFidelity PCR Buffer与传统的PCR缓冲液相比在很宽的温度和Mg2+浓度范围内都有严格的引物退火条件和高度的特异性,无需进行耗时的优化。

HotStar HiFidelity PCR Buffer也含有浓度经特定优化的dNTPs,用于方便的建立PCR反应体系和获得可靠的结果。该缓冲液最大程度上增加了HotStar HiFidelity DNA Polymerase的保真性,确保低出错率。HotStar HiFidelity Polymerase Kit灵敏度高、特异性强以及使用HotStar HiFidelity PCR Buffer而无需优化的特性使其适合多种高保真PCR应用。

Q-Solution

HotStar HiFidelity Polymerase Kit同时提供Q-Solution,一种新型的PCR添加剂,通过更改DNA熔解行为促进难扩增模板的扩增。这种独特的试剂可进一步优化由模板引起的表现不理想的PCR,如过多的二级结构和富含GC的模板(参见"Amplification of difficult templates")。不同于DMSO和其他PCR添加剂,Q-Solution的浓度是确定的,没有毒性,并且保证PCR的纯度。而且PCR中加入Q-Solution不会影响PCR的准确性。

完整的试剂盒规格

HotStar HiFidelity Polymerase Kit包含PCR所需的所有组分。无需额外购买其他试剂或缓冲液。

Procedure

HotStar HiFidelity操作流程高效,只需按照试剂盒中已优化的试验方案操作即可。HotStar HiFidelity DNA Polymerase经过化学修饰,可以暂时性的使聚合酶和3'–>5'核酸外切酶失活。这种抑制作用可使引物和模板在PCR体系建立和循环起始阶段过度降解。95°C条件下孵育5分钟即可激活聚合酶和校对活性,可以整合入已有的热循环程序。这种修饰确保可在室温下方便的建立反应体系,而不会影响PCR的特异性和产量。

TA/UA克隆

与其他高保真DNA聚合酶相比,使用HotStar HiFidelity DNA Polymerase获得的PCR产物可直接用于TA-或UA-克隆(参见"Efficient TA/UA cloning")。

产物的长度和灵敏度

鉴于HotStar HiFidelity Polymerase Kit的高灵敏度,即使使用极微量的起始原料也可扩增片段(如1 ng的人基因组DNA)。使用基因组DNA获得的产物长度可达5 kb,而λDNA获得的产物长度可达10 kb,表明HotStar HiFidelity Polymerase Kit适合多种应用,包括用于克隆的长片段DNA的扩增。

Applications

HotStar HiFidelity Polymerase Kit适合多种要求高灵敏度和低出错率的热启动PCR应用,如克隆和定点突变。

Features
Specifications
应用 Cloning, mutation analysis, TA- or UA-cloning procedures
酶活 3' -> 5' exonuclease activity, A-addition
预混液 No
反应类型 PCR amplification, proofreading
real-time或终点法PCR Endpoint
样本/目标类型 Genomic DNA and cDNA
单一或多重 Single
有/无热启动酶 With hotstart

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产品介绍与指南 (2)
试剂盒操作手册 (1)
For highly sensitive and reliable high-fidelity hot-start PCR
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