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Ultrapure 100 Buffer Set

用于配合Ultrapure 500 Resin使用的缓冲液组合

  • 内毒素含量低于0.1 EU/µg

Ultrapure 100 Buffer Set是配合Ultrapure 500 Resin使用的缓冲液组合,可轻松高效纯化至多100 mg不含内毒素(<0.1 EU/µg DNA)的质粒DNA。其使用QIAGEN阴离子交换技术,并具有内毒素去除技术,产物DNA纯度很高。

Cat No./ID: 11910
Ultrapure 100 Buffer Set
Buffers P1, P2, P3, QBT, QC, QN, ER, TE, endotoxin-free water, RNase A; for preparation of up to 100 mg plasmid DNA

Ultrapure 100 Buffer Set适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


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Ultrapure 100实验流程。
Performance
使用Ultrapure 100 Buffer Set可纯化多至100 mg的不含内毒素的质粒DNA,该系统结合了QIAGEN阴离子交换技术与内毒素去除技术,可用于制备超纯DNA。其卓越的分离性能可确保制备的DNA纯度高,不低于通过连续两轮CsCl梯度离心制备的DNA纯度。

Ultrapure 100 Buffer Set提供的用于交换树脂的缓冲液,经验证其所含内毒素含量均低于10 EU/ml(BioWhittaker Kinetic-QCLTest验证)。

Principle

纯化的质粒DNA中的内毒素污染水平取决于纯化方式。硅胶纯化的DNA表现出极高的内毒素污染水平。使用QIAGEN、QIAfilter和HiSpeed的质粒DNA纯化试剂盒,以及通过两次CsCl超速离心所制备的DNA纯度很高,内毒素污染水平相对较低。QIAGEN Ultrapure 100 system含有内置的内毒素去除步骤,纯化得到的质粒DNA的内毒素含量低于0.1 EU/µg。

内毒素,也被称为脂多糖或LPS,是大肠杆菌等革兰氏阴性菌细胞膜的组成成分之一(参见"Bacterial cell wall")。在质粒纯化的裂解过程中,内毒素释放出来,对于内毒素敏感的细胞系,可严重降低其转染效率。另外内毒素会与DNA竞争转染试剂,影响质粒DNA的摄取量。内毒素还会诱导巨噬细胞和B细胞等免疫细胞发生非特异性免疫活化反应,导致对转染结果的错误解读,包括诱导合成蛋白质和脂质,如IL-1和前列腺素。总的来说,内毒素在转染反应中是不可控变量,影响反应结果及结果的重复性,使结果难以比较和分析。在基因治疗研究中,内毒素会导致内毒素休克综合症和补体级联反应,影响研究结果。

Procedure
细菌菌体在碱性环境下裂解,并通过离心澄清裂解液(参见"Ultrapure 100 procedure")。使用专用的Endotoxin Removal Buffer除去内毒素,并将裂解液上载到Ultrapure 500 Resin。
Applications

Ultrapure 100 Buffer Set配合Ultrapure 500 Resin纯化的质粒DNA,其纯度相当于两次CsCl梯度离心所纯化的DNA的纯度。简单的内毒素去除步骤可确保纯化的DNA所含内毒素不超过0.1 EU/µg DNA。纯化的DNA适用于多种敏感的应用,包括:

质粒介导的基因沉默
转染
基因治疗研究
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