用于DNA和RNA制备过程中蛋白酶的消化

    QIAGEN Protease和QIAGEN Proteinase K在宽范围反应条件下有广泛的底物特异性和高活性。两种蛋白酶在大部分DNA和RNA纯化流程使用的缓冲液中都有高活性,经QIAGEN品质保证。

    Product Product no. Cat. no. List price:
     
     
    Show details
        varies
    Can't order online?
    To place an order via phone, email or for requesting a quote, please provide the product’s name, number and catalog number.
    Product Cat. no. List price:
    QIAGEN Proteinase K (2 ml)
    2 ml (>600 mAU/ml, solution)
    19131
    Inquire
    QIAGEN Proteinase K (10 ml)
    10 ml (>600 mAU/ml, solution)
    19133
    Inquire

    • Main Image Navi
    Performance

    QIAGEN Protease和QIAGEN Proteinase K在大部分DNA和RNA纯化流程使用的缓冲液以及宽范围的盐、变性剂、洗涤剂、pH和温度条件下都有高活性(见表“常用缓冲液中的蛋白酶活性”)。两种酶都经QIAGEN品质保证。

    常用缓冲液中的蛋白酶活性*
    缓冲液 活性(%)
    QIAGEN
    Protease
    QIAGEN
    Proteinase K
    30 mM Tris·Cl 100 100
    30 mM Tris·Cl; 30 mM EDTA; 5% Tween 20; 0.5% Triton X-100; 800 mM GuHCl 210 313
    36 mM Tris·Cl; 36 mM EDTA; 5% Tween 20; 0.36% Triton X-100; 735 mM GuHCl 205 301
    10 mM Tris·Cl; 25 mM EDTA; 100 mM NaCl; 0.5% SDS 78 128
    10 mM Tris·Cl; 100 mM EDTA; 20 mM NaCl; 1% Sarkosyl 101 74
    10 mM Tris·Cl; 50 mM KCl; 1.5 mM MgCl2; 0.45% Tween 20; 0.5% Triton X-100 159 106
    10 mM Tris·Cl; 100 mM EDTA; 0.5% SDS 98 120
    30 mM Tris·Cl; 10 mM EDTA; 1% SDS 38 203
    * pH 8.0, 50°C, 1.25 µg/ml蛋白酶,孵育15 min。
      QIAGEN Genomic-tip操作流程中使用的Buffer G2,用于从血液、细胞培养基和组织中纯化DNA。
    用于细菌DNA纯化的QIAGEN Genomic-tip实验方案中推荐的蛋白酶消化缓冲液条件(Buffers B1+ B2)。
    Principle
    技术规格
    QIAGEN ProteaseQIAGEN Proteinase K
    规格 冻干粉 即用型溶液
    7.5 AU或4 x 7.5 AU 2 ml或10 ml (20 mg/ml)
    活性 45 mAU/mg蛋白 >600 mAU/ml
    单位定义 一个mAU是指每分钟1 mol酪氨酸释放的斐林阳性的氨基酸和肽的活性

    QIAGEN Proteinase K是从腐生菌Tritirachium album中提取的一种枯草杆菌蛋白酶,非常适合短时间消化。其特异性活性高,在很大的温度和pH 值范围内可保持稳定,并在高温时具有更高活性。可溶性钙在酶反应中不是必须的。所以用于抑制核酸酶等Mg2+依赖性酶的EDTA将不会抑制Proteinase K的活性。以下QIAGEN试剂盒中包含有Proteinase K:

    QIAamp DNA Mini Kit
    QIAamp DNA Stool Mini Kit
    QIAamp 96 DNA Swab BioRobot Kit
    DNeasy Tissue Kit
    DNeasy 96 Tissue Kit
    QIAamp DNA Micro Kit
    QIAamp MinElute Media Kit
    QIAamp UltraSens Virus Kit
    QIAamp Media MDx Kit

    QIAGEN Protease是从重组Bacillus菌株中提取的一种丝氨酸蛋白酶,可替代Proteinase K从多种样本中提取DNA和RNA,且价格较低。QIAGEN Protease没有DNase 和RNase活性。以下QIAGEN试剂盒中包含有QIAGEN Protease:

    QIAamp DNA Blood Mini, Midi, and Maxi Kits
    QIAamp 96 DNA Blood Kit
    Blood & Cell Culture DNA Kits
    QIAamp DNA Blood BioRobot 9604 Kit
    QIAamp Virus BioRobot 9604 Kit
    QIAamp DNA Blood BioRobot MDx Kit
    QIAamp DSP 96 Virus MDx Kit
    QIAamp DSP Virus Kit
    QIAamp DSP DNA Blood Mini Kit

    注意:使用手动QIAamp DNA Blood Kit和QIAGEN Blood & Cell Culture DNA Kit的用户应该用7 ml蒸馏水重悬每个瓶中的QIAGEN Protease。

    注意:使用QIAamp DNA Blood BioRobot 9604 Kit的用户应该用10 ml蒸馏水重悬每个瓶中的QIAGEN Protease。

    注意:QIAGEN蛋白酶不可与DNeasy Tissue、DNeasy 96 Tissue及QIAamp DNA Mini Kit中的ATL缓冲液同时使用。在SDS浓度大于0.5%、肌氨酰浓度大于1%、或有高浓度的其他去污剂时,EDTA的浓度必须小于8 mM,这样才能在延长的孵育时间内达到完全活性。
    Procedure

    QIAGEN Protease或QIAGEN Proteinase K的使用指南在相应的试剂盒手册中提供。

    Applications

    QIAGEN Protease和QIAGEN Proteinase K用于DNA和RNA制备过程中蛋白酶的消化。在设计蛋白酶消化时,应考虑两种酶之间的细微差异。

    You are not authorized to download the resource

    User-Developed Protocols
    2
    This protocol has been adapted by the San Diego Police Department (SDPD) Crime Laboratory from the standard QIAGEN pretreatment for casework samples, and is intended for the lysis and extraction of DNA from forensic samples of fired (casings) and unfired (cartridges) ammunition.
    Show details

    Show details