适用于高灵敏度和特异性的一步法RT-PCR,专为焦磷酸测序优化

  • 焦磷酸测序专用的终点法RT-PCR解决方案
  • 在单管内实现高效逆转录后扩增
  • 独特的酶混合液和缓冲液,确保高特异性和高灵敏度
  • 高效的流程,无需优化

PyroMark OneStep RT-PCR Kit是专为后续焦磷酸测序优化的试剂盒,可确保RNA模板的高效逆转录,以及cDNA高特异性、可靠扩增。整个过程在单管中进行,速度合理,便于使用,污染风险低。

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PyroMark OneStep RT-PCR Kit (50)
For 50 reactions: QIAGEN OneStep RT-PCR Enzyme Mix, optimized QIAGEN OneStep RT-PCR Buffer, 10x CoralLoad Concentrate, 5x Q-Solution, dNTP Mix, and RNase-Free Water
978801
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PyroMark OneStep RT-PCR Kit (200)
For 200 reactions: QIAGEN OneStep RT-PCR Enzyme Mix, optimized QIAGEN OneStep RT-PCR Buffer, 10x CoralLoad Concentrate, 5x Q-Solution, dNTP Mix, and RNase-Free Water
978803
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The PyroMark OneStep RT-PCR Kit is intended for molecular biology applications. This product is not intended for the diagnosis, prevention, or treatment of a disease.
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CoralLoad Concentrate.|Increased specificity of primer annealing.|
[A] CoralLoad Concentrate contains [B] 2 gel-tracking dyes, enabling immediate gel loading of PCR products and easy visualization of DNA migration.|K+ binds to the phosphate groups (P) on the DNA backbone, stabilizing the annealing of the primers to the template. NH4+, which exists both as the ammonium ion and as ammonia under thermal-cycling conditions, can interact with the hydrogen bonds between the bases (B), destabilizing principally the weak hydrogen bonds at mismatched bases. The combined effect of the two cations maintains the high ratio of specific to nonspecific primer-template binding over a wide temperature range.|
Principle

PyroMark OneStep RT-PCR Kit是第一款专为后续的焦磷酸测序设计并优化的RT-PCR试剂盒。该试剂盒可对RNA模板进行灵敏的一步式RT-PCR。RT-PCR的产物可用于多种焦磷酸测序的应用,如病毒检测和基因分型、特异性等位基因表达分析和对mRNA剪切异构体的检测。该试剂盒具有独特的酶组合和特别研制的反应缓冲液,确保可在一个试管中高效、高特异性的进行反转录和PCR,无需优化。该试剂盒中含有Q-Solution,确保了对具有复杂二级结构和高GC含量的模板的高效扩增。CoralLoad Concentrate确保RT-PCR产物在琼脂胶上方便上样和直观观察。

QIAGEN OneStep RT-PCR Enzyme Mix

QIAGEN OneStep RT-PCR Enzyme Mix含有专为逆转录和PCR扩增设计的酶混合液。

QIAGEN OneStep RT-PCR Enzyme Mix中含有Omniscript和Sensiscript Reverse Transcriptases,可高效、高特异性的进行逆转录。两个逆转录酶对RNA都有较高的亲和力,通过二级结构促进逆转录,同时抑制其他的逆转录酶。Omniscript Reverse Transcriptase专为大于50 ng的RNA逆转录设计,而Sensiscript Reverse Transcriptase适用于小于50 ng的RNA。独特的酶组合可对大小在1 pg至2 μg的起始RNA进行高效、灵敏的逆转录。
HotStarTaq DNA Polymerase可进行高特异性的热启动PCR扩增。在逆转录过程中,经化学修饰的HotStarTaq DNA Polymerase没有活性,不会影响逆转录反应。在逆转录后,将反应缓冲液加热至95°C,15分钟,以活化HotStarTaq DNA Polymerase同时使逆转录酶失活。使用HotStarTaq DNA Polymerase进行热启动流程,可减少第一次PCR循环中非特异性退火引物和引物二聚体的延伸,确保PCR的高度特异性和可重复性。
QIAGEN OneStep RT-PCR Buffer

QIAGEN OneStep RT-PCR Buffer专为高效的逆转录和特异性扩增设计。缓冲液独特的组成可实现高温(50°C)下的逆转录。较高的反应温度可破坏二级结构,进而提高逆转录反应的效率,对有限量的RNA模板的一步式RT-PCR反应格外重要。QIAGEN的酶和一步式RT-PCR缓冲液配套使用,确保高效的PCR反应效率。该缓冲液确保引物特异性退火的温度范围和Mg2+浓度范围均比传统PCR缓冲液的范围大。因此,通常无需通过调节退火温度或Mg2+浓度来优化RT-PCR(参见"Increased specificity of primer annealing")。

CoralLoad Concentrate

PyroMark OneStep RT-PCR Kit含有CoralLoad Concentrate。CoralLoad Concentrate含有胶上样试剂和两个凝胶示踪染料,一个橘色,一个红色(参见"CoralLoad Concentrate")。在CoralLoad Concentrate存在的条件下扩增出的RT-PCR产物可直接上样至琼脂糖凝胶。

Q-Solution

PyroMark OneStep RT-PCR Kit含有Q-Solution,这是一种新型添加物,可改变核酸的熔解行为。Q-Solution可促进具有复杂二级结构和高GC含量的模板的逆转录和扩增。

Procedure

反转录和PCR可在同一管内完成。反应建立时要加入反应所需的所有组分,一旦反应开始后无需再加入其他组分。经优化的循环条件,包括30分钟的逆转录反应时间、HotStarTaq DNA Polymerase酶的活化,以及随后的模板扩增。

Applications

PyroMark OneStep RT-PCR Kit是专为焦磷酸测序优化的试剂盒,适合下列焦磷酸测序应用:

  • 病毒检测
  • 病毒基因分型
  • 特异性等位基因表达分析
  • mRNA剪接异构体的检测

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