对单细胞中miRNA进行准确的定量分析
  • 定量单细胞中的miRNA
  • 仅需极少量的总RNA起始样本量
  • 可进行细胞裂解、通用miRNA cDNA合成和预扩增
  • 所有miRNA都转化为cDNA并预扩增
  • 可使用少量总RNA作为预扩增模板
  • 提供免费的数据分析工具
  • 1个细胞+1个试剂盒的高效、灵敏流程,帮助您充分发掘miRNA的研究潜力

miScript Single Cell qPCR Kit含有细胞裂解、cDNA合成和对miRNA进行扩增所需的所有试剂,可实现单细胞miRNA表达分析。单次miScript Single Cell qPCR Kit反应需要1–100个细胞或25 pg–1 ng的纯化后RNA作为模板。与其他单细胞miRNA表达分析产品不同,miScript Single Cell qPCR Kit是完整的通用型试剂盒。以单个细胞作为起始样本,无论是注释过或非注释过的所有miRNA,均被选择性转化为cDNA,并在随后进行预扩增。无需分离样本或选择特定的miRNA。miScript Single Cell qPCR Kit从细胞裂解到预扩增步骤均表现优异,是单细胞miRNA表达分析的准确解决方案。利用该试剂盒能够获得单个细胞中整的miRNome表达谱信息。

​单细胞分析缘何如此重要?

​组织由不同的细胞群组成,每个群体含有不同的蛋白质组和转录组信息。例如,正常的和疾病相关的生物学图谱显然不同,细胞对内部或外部刺激可单独或协同做出应答。此外,由于表观遗传学、生物钟、细胞周期、微环境、细胞间接触和内在的转录“噪音”等情况的不同,每个单细胞也是不同的。对mRNA、lncRNA和miRNA表达进行群体转录组分析对于理解生物过程具有重要意义,然而如此研究得出的“细胞平均水平”也掩盖了单个细胞之间的转录水平差异。事实上,分析大量细胞时,罕见细胞型的作用可能被遗漏。单细胞表达分析正是着力于研究单个细胞,为理解特异性生物应答补充了更加完整的信息。
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miScript Single Cell qPCR Kit (24)
For 24 reactions: Cell lysis, 3’ ligation, 5’ ligation, reverse-transcription, cDNA cleanup, preamplification reagents, quality control primers
331053
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miScript Single Cell qPCR Kit (96)
For 96 reactions: Cell lysis, 3’ ligation, 5’ ligation, reverse-transcription, cDNA cleanup, preamplification reagents, quality control primers
331055
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The miScript Single Cell qPCR Kit is intended for molecular biology applications. This product is not intended for the diagnosis, prevention, or treatment of a disease.
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Principle
成熟miRNA为含22个核苷酸的天然非编码RNA,能介导转录后基因调控。动物的成熟miRNA含有3’端羟基和5’端磷酸基团(这点与其他类型的胞内RNA不同)。因此,可将接头连接到成熟miRNA的3’端和5’端,实现通用逆转录反应和预扩增,同时最大程度降低其他种类RNA的背景干扰。miScript Single Cell qPCR Kit含有细胞裂解和预扩增所需的所有试剂,提供完整流畅的工作流程。
Procedure
miScript Single Cell qPCR Kit可实现从单细胞或少量的纯化后RNA中高效分离并扩增miRNA。无需分离样本,或选择特定miRNA。下游结合miScript miRNA PCR Arrays 或miScript Primer Assay,能够进行可靠的miRNome表达谱分析、疾病/信号通路特异的miRNA表达分析、或单个细胞miRNA定量分析。

Fluidigm BioMark System仪器上的Real-time PCR

将miScript Single Cell qPCR Kit预扩增产物作为模板,在Fluidigm BioMark System上使用miScript miRNA PCR Arrays、或miScript Primer Assays和 miScript Microfluidics PCR Kit进行real-time PCR分析。这一专用的real-time PCR试剂盒含有miScript Microfluidics Universal Primer(反向引物)以及Microfluidics qPCR Master Mix(专为Fluidigm BioMark System优化,含有用于检测的EvaGreen染料,以及ROX参比染料)。请参阅《miScript Microfluidics操作手册》,了解详细信息。

孔板规格的Real-time PCR

miScript miRNA PCR Arrays:将miScript Single Cell qPCR Kit预扩增产物作为模板,使用miScript miRNA PCR Array和miScript SYBR Green Kit(该试剂盒含有反向引物miScript Universal Primer和QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix)进行real-time PCR分析。请参阅《miScript miRNA PCR Array操作手册》,了解详细信息。

miScript Primer Assays:将miScript Single Cell qPCR Kit预扩增产物作为模板,使用miScript Primer Assay和miScript SYBR Green Kit进行real-time PCR分析。请参阅《miScript PCR System操作手册》,了解详细信息。

整合反应对照

miScript Single Cell qPCR Kit整合了反应对照,能够监控3’端连接、5’端连接、逆转录、预扩增和real-time PCR是否成功。这些对照监测工作流程中的每一关键步骤,可帮助确定整个实验流程是否成功。

数据分析

您可在GeneGlobe网页找到专为单细胞miRNA表达分析设计的免费数据分析软件。该软件能够进行主成分分析(PCA)和层次聚类法分析(hierarchical clustering),分析结果以多种不同格式提供。
Applications
使用miScript Single Cell qPCR Kit获得的宝贵信息,可用于众多领域,包括肿瘤学、免疫学、神经学和干细胞研究。其中重要的应用是可用于循环肿瘤细胞等无创生物标志物研发。
Feature
Specifications
Applications PCR, qPCR, real-time RT-PCR, microarray
Elution volume 30 µl
Format Spin column
Main sample type Tissue, cells
Processing Manual (centrifugation or vacuum)
Purification of total RNA, miRNA, poly A+ mRNA, DNA or protein miRNA, total RNA
Sample amount 50–100 mg
Technology Silica technology
Yield Varies

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