快速可靠的定量检测法医学检材样本中的人类DNA

  • 在Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪上48分钟即可完成PCR
  • 结果可靠,灵敏度可达1 pg/µl DNA
  • 自带内质控,可检测PCR扩增效率或PCR抑制物
  • 反应体系构建可完全自动化

Investigator Quantiplex Kit采用real-time PCR技术,适用于人类身份鉴定和法医学测试。该试剂盒具有出色的灵敏度和反应速度,适用于检测样本是否含有足够DNA进行DNA指纹图谱分析(如STR或DIP分析)或是否含有抑制剂存在。

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Investigator Quantiplex Kit (200)
Primer Mix IC FQ, Reaction Mix FQ, Control DNA Z1, Dilution Buffer
387016
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The Investigator Quantiplex Kit is intended for molecular biology applications in forensic, human identity, and paternity testing. This product is not intended for diagnosis, prevention, or treatment of a disease.
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The Investigator Quantiplex Kit retains excellent sensitivity down to 1 pg/µl.|Superior reaction time.|No copy-number variation in the marker.|Scorpions primers and their function.|
Control DNA Z1 was diluted to 0.3 pg/μl and quantified using the Investigator Quantiplex Kit in 2 independent runs.|The Investigator Quantiplex Kit is significantly faster than similar kits from other suppliers on both the Rotor-Gene Q and Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCR System.|A quantitative real-time PCR was run to compare a specific single-copy human DNA target and the Investigator Quantiplex multi-copy target. The ΔCT between the two targets is shown for the different populations.||
Performance

对Investigator Quantiplex Kit的验证显示,在法医案件样本和人类身份鉴定测试中,在正常范围内的条件下,可获得稳定可重复的结果。该试剂相对于其他供应商的同类试剂而言能确保更快速的PCR,仅需48分钟即可在QIAGEN的Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪上获得结果(参见"The Investigator Quantiplex Kit has a superior reaction time")。

验证Investigator Quantiplex Kit的标记物,并且检测得到性别或不同族群之间的拷贝数无变异,确保了该标记物是理想的real-time PCR用于DNA定量(参见"There is no copy-number variation in the marker of the Investigator Quantiplex Kit")。

此外,检测确保灵敏度低至1 pg/µl以下,可准确纯化4.9 pg/µl,且标准曲线显示线性(参见"The Investigator Quantiplex kit retains excellent sensitivity down to 1 pg/µl")。

Principle

人类身份鉴定通常基于对短串联重复序列(SNP)或删除插入多态性(DIPs)的分析,取决于检查需求或对样本品质的要求。 这些多重检测是复杂的体系,需要确定的模板输入范围。

Investigator Quantiplex Kit包含试剂和DNA聚合酶,用于特异扩增146 bp的常染色体多拷贝区的人类基因组,并用于在Rotor-Gene Q或Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR Systems上直接检测特异的PCR产物。选择独特的多拷贝区以在不同性别和种群内,确保高灵敏度、高可靠性。使用Rotor-Gene Q的绿色通道或Applied Biosystems仪器上的FAM染料通道对目标进行检测。

此外,Investigator Quantiplex Kit包含平衡的内部扩增控制子,用于测试扩增是否成功以及是否含有PCR抑制剂。此类异种扩增体系在Rotor-Gene Q的黄色通道内或Applied Biosystems仪器的VIC染料通道内被检测为200 bp内部扩增子(IC)。 

使用Scorpion引物和创新、快速的PCR试剂对扩增进行检测。Scorpion引物是双功能分子含有PCR引物共价连接探针(参见"Scorpion primers and their function")。探针中的荧光基团与淬灭剂交互作用,同时嵌入探针内,以降低荧光作用。在PCR过程中,当探针与扩增子结合,荧光基团与淬灭剂即分开。这导致反应管中的荧光性增强。

反应试剂经仔细优化以进一步支持快速的反应机制。专为人类身份鉴定研发的创新PCR试剂和酶,确保了高灵敏度和速度。此外,独特研发的PCR试剂包含专利添加剂Q-Bond,显著地降低了变性、退火和延伸时间。

Procedure

该试剂盒是即用型体系,用于通过real-time PCR检测和定量人类DNA。参见下表“技术规格”以获得更多信息。已开发一套模板文件,以简化仪器设置和在Rotor-Gene Q上分析结果(参见“用于Rotor-Gene Q的模板文件”)。

技术规格
每次PCR反映的体积 25 µl
模板DNA的输入体积 2 µl
目标 人类特异性基因DNA多拷贝目标t
Real-time循环仪 Rotor-Gene Q, Applied Biosystems 7500 Real-Time System或Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time System
用于Rotor-Gene Q的模板文件
模板文件 目的
Investigator Quantiplex Kit Cycling 预置循环实验方案
Investigator Quantiplex Kit Sample 样本名称、样本种类和浓度的标准曲线和内部控制
Investigator Quantiplex Kit Analysis Settings for the Yellow Channel CT设置
Applications

Investigator Quantiplex Kit用于定量检测人类DNA,并且确定是否存在PCR抑制剂以及是否需要进一步样本纯化。其适用于:

  • 法医数据库和案件样本
  • 亲子鉴定样本
  • 灾难受害者身份鉴定和人类学研究
  • 其他人类身份鉴定

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