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EpiTect Whole Bisulfitome Kit

对亚硫酸氢盐转化的DNA进行全基因组扩增,用于PCR分析
  • 获得高产量的亚硫酸氢盐转化DNA,可用于多个PCR
  • 专用于扩增亚硫酸氢盐转化后DNA
  • 方便的一步建立反应体系

EpiTect Whole Bisulfitome Kit包含DNA聚合酶、缓冲液和试剂,采用多重置换扩增(MDA)技术,用于经亚硫酸氢盐转化后DNA的全基因组扩增。EpiTect Whole Bisulfitome Kit使用经验证的REPLI-g技术,专为扩增经亚硫酸氢盐转化DNA研发(亚硫酸氢盐转化后其核苷酸组成已发生改变,且DNA片段更小),同时维持转化后序列。EpiTect Whole Bisulfitome Kit的常规DNA产量是每次反应1–3 μg,因此,单次亚硫酸氢盐反应获得的模板DNA可进行多达300次PCR分析。

Cat No./ID: 59203
EpiTect Whole Bisulfitome Kit (25)
REPLI-g Midi DNA Polymerase, EpiTect WBA Reaction Buffer, nuclease-free water for 25 whole bisulfitome amplification reactions

EpiTect Whole Bisulfitome Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


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可靠的全转化组扩增。
在使用EpiTect Whole Bisulfitome Kit进行扩增前(–WBA)和扩增后(+WBA),使用Real-time PCR检测10 ng亚硫酸氢盐转化DNA的四个不同位点。先使用EpiTect Bisulfite Kit或来自供应商Z的试剂盒对DNA进行亚硫酸氢盐转化,再扩增;使用QuantiTect SYBR® Green PCR Kit进行qPCR。在EpiTect转化DNA中,四个位点在扩增 前后的水平类似。使用竞争者的亚硫酸氢盐试剂盒转化的DNA CT值更高,说明WBA前DNA片段化更高。扩增后,四个位点的水平升高且不同,表明全亚硫酸氢盐转化物扩增能力更低,且扩增不平等。
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扩增效率高。
使用起始量为50 ng的亚硫酸氢盐转化DNA进行全亚硫酸氢盐转化物扩增反应。使用EpiTect Whole Bisulfitome Kit和来自供应商A和S的试剂盒进行扩增。扩增后使用PicoGreen测定DNA产量。EpiTect Whole Bisulfitome Kit得到的DNA产量升高50倍,比使用其他供应商的试剂盒得到的产量高很多。
2
WBA实验流程。
Performance
EpiTect Whole Bisulfitome Kit是为所有甲基化分析提供足够DNA的理想工具,而不受亚硫酸氢盐转化后DNA量较少的限制。亚硫酸氢盐转化后的全基因组扩增(WBA)流程可获得高产的亚硫酸氢盐转化后DNA,同时配合含有独特DNA保护体系的EpiTect Bisulfite Kits维持转化后序列的表现。EpiTect Whole Bisulfitome Kit经检测优于其他供应商提供的扩增试剂盒(参见"High amplification efficiency"和"Reliable whole bisulfitome amplification")。
Principle

基因组DNA序列的甲基化分析正面临着挑战,尤其在样本量较少的情况下。使用EpiTect Whole Bisulfitome Kit可高度一致的扩增亚硫酸氢盐转化后DNA的全基因组,无序列偏向性(参见"EpiTYPER MALDI-TOF analysis of WBA DNA")。该方法基于等温多重置换扩增(MDA)技术。复制过程中通过带有3'→5'外切酶校正活性的行进性DNA聚合酶确保其高保真扩增。

EpiTect Whole Bisulfitome Kit应用经验证的REPLI-g技术,专为扩增经亚硫酸氢盐转化后DNA研发(亚硫酸氢盐转化后其核苷酸组成已发生改变,且DNA片段更小),同时维持转化后序列的表现。配合含有独特DNA保护体系的EpiTect Bisulfite Kits,可获得最佳结果。这样可确保DNA有效变性,生成胞嘧啶完全转化所必需的单链DNA,同时避免由于高温、低pH值的亚硫酸氢盐处理引起的DNA过度断裂。通过预防DNA断裂可确保后续较长DNA片段的扩增。使用EpiTect Whole Bisulfitome Kit,通常每个反应获得的DNA的量为1–3 μg。

Procedure

方便的一步反应体系,即使用反应缓冲液和REPLI-g DNA聚合酶的混合液孵育亚硫酸氢盐转化后的模板DNA。加热失活聚合酶后,扩增的DNA可直接进行分析或贮存(参见"WBA procedure")。

生物学和医药研究的很多领域中,尤其是肿瘤学、干细胞研究和发育生物学研究中,获得表观遗传学信息是首要任务。但是,由于缺乏提供可重复性数据的标准化方法,尤其是样本材料的限制,分析DNA的甲基化变化非常困难。QIAGEN最新推出的EpiTect方案,建立了从DNA样本收集、稳定和纯化到亚硫酸氢盐转化和real-time或终点式PCR甲基化分析或测序的标准化预分析和分析方案(参见"Standardized workflows in epigenetics")。

Applications

EpiTect Whole Bisulfitome Kit是为所有甲基化分析提供足够DNA的理想工具,而不受亚硫酸氢盐转化后DNA量较少的限制。每次使用10 ng DNA模板扩增获得的DNA,可进行100–300次real-time PCR分析(如使用EpiTect MethyLight PCR Kits)或终点法PCR(如使用EpiTect MSP Kits)。

Features
Specifications
扩增 Whole bisulfite converted DNA
应用 Methylation specific PCR
最大上样量 10 µl bisulfite converted DNA
反应时间 8h at 28°C
反应体积 40 µl
DNA起始量 > 50 ng bisulfite converted DNA
起始材料 Epitect bisulfite converted DNA
技术 Multiple Displacement Amplification (MDA)
产量 1-3 µg per reaction
fragment fix placeholder