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EpiTect MSP Kit

用于高度精确的甲基化特异性PCR(MSP),无需优化

  • 可靠的MSP,减少假阳性结果
  • 灵活的MSP引物设计,方便实验设计
  • 使用预混液,轻松构建反应体系

EpiTect MSP Kit含有经基因改造的全新聚合酶HotStarTaq d-Tect Polymerase,以易用的预混液形式提供。聚合酶的高特异性确保了可靠的结果,该聚合酶可以有效区分退火和延伸时3'末端的单个碱基错配。由于单个碱基错配足以引起差异性的MSP结果,因此,即使是扩增片段内含有单个CpG位点,EpiTect MSP Kit也能确保高特异性MSP结果。

Cat No./ID: 59305
EpiTect MSP Kit (100)
EpiTect MSP Master Mix for 100 x 50 μl reactions

EpiTect MSP Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


0
分辨单个碱基。
[A]用于甲基化LDOC1 PCR的两个引物都经修饰,正向或反向引物的3'端引入了一个错配。这种修饰模拟未改变的引物与亚硫酸氢盐转化DNA退火的情况,这种修饰由于一个CpG位点甲基化丢失变得不同。[B]使用HotStarTaq d-Tect Polymerase进行PCR,只有3'端无错配的引物才能成功PCR。一个错配足以改变MSP结果。
1
HotStarTaq d-Tect的灵敏度。
PCR检测甲基化[A] p16,[B] NEFH和[C] NPTX2,使用不同量的甲基化DNA(0 pg, 100 pg, and 1 ng),背景为10 ng未甲基化DNA。使用4中不同DNA聚合酶在3个不同温度(48°C, 53°C, 和58°C)下进行反应。HotStarTaq d-Tect表明在整个温度范围都有高特异性PCR结果,而其他聚合酶要么失败,要么有很多非特异性条带。
2
错配辨别力增强。
[B]退火时,甲基化特异性引物也经常结合到未甲基化的转化DNA上,在引物3'端形成一个或多个错配。[A][B]Taq DNA Polymerase可有效延伸这些引物,即使引物3'端有错配。基因工程改造的HotStarTaq d-Tect Polymerase对错配的分辨能力更高,可识别甲基化特异性引物3'端的错配,阻止引物延伸。[C] HotStarTaq d-Tect Polymerase只延伸无错配的引物。[D] HotStarTaq d-Tect Polymerase提升MSP PCR的可靠性,避免扩增反应的假阳性,便于引物设计。
Performance
QIAGEN的EpiTect MSP Kit含有经基因工程改造的全新聚合酶HotStarTaq d-Tect,该聚合酶有高度的PCR特异性(参见"Sensitivity of HotStarTaq d-Tect")。该聚合酶只扩增在3'末端(扩增起始点)与靶向DNA完全吻合的引物,能够分析单个的CpG位点。与野生型DNA聚合酶不同,野生型DNA聚合酶通常忽视3'端的错配、扩增不吻合的引物,产生非特异性、假阳性甲基化结果(参见"Increased mismatch discrimination")。
Principle

EpiTect MSP Kit简化了新型甲基化特异性PCR分析的流程。甲基化特异性PCR引物的设计通常比较困难,这是由于每个引物需要覆盖几个CpG位点。因此在CpG岛中不能检测单个的CpG位点。由于HotStarTaq d-Tect Polymerase对一个引物只需要单个碱基错配,可大大简化MSP的引物设计,即使是单个CpG位点也可确保高灵敏的甲基化分析(参见"Single base discrimination")。

Procedure

EpiTect MSP Kit以预混液形式提供,确保快速方便的反应体系构建。HotStarTaq d-Tect Polymerase在室温条件下没有聚合酶活性,这就避免了在低温条件下生成错误的产物或引物二聚体。在95°C条件下孵育10分钟,激活HotStarTaq d-Tect Polymerase,这个步骤可以整合入已有的热循环程序中。

表观遗传学中标准化的工作流程

生物学和医药研究的很多领域中,尤其是肿瘤学、干细胞研究和发育生物学研究中,获得表观遗传学信息是首要任务。但是,由于缺乏提供可重复性数据的标准化方法,尤其是样本材料的限制,分析DNA的甲基化变化非常困难。QIAGEN最新推出的EpiTect方案,建立了从DNA样本收集、稳定和纯化到亚硫酸氢盐转化和real-time或终点式PCR甲基化分析或测序的标准化预分析和分析方案(参见"Standardized Workflows in Epigenetics")。

Applications

EpiTect MSP Kit专用于高度特异性的终点法PCR甲基化分析。

Features
Specifications
应用 Highly reliable and accurate methylation-specific PCR
酶活 5' -> 3' exonuclease activity
预混液 Yes
反应类型 PCR amplification
real-time或终点法PCR Endpoint
样本/目标类型 Bisulfite converted DNA
单一或多重 Single
有/无热启动酶 With hotstart