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KRAS Pyro Kit

基于序列定量分析KRAS基因中的突变

  • 实时获得多个结果
  • 准确定量KRAS基因中的突变
  • 简便检测复杂突变
  • 序列信息提供检测的内置参照
  • 灵活的后续分析

KRAS Pyro Kit是用于鉴定KRAS基因中突变的分子检测试剂盒。该试剂盒包含扩增KRAS基因所需的引物和试剂、外加缓冲液、引物和试剂,在PyroMark Q24 System上使用焦磷酸测序技术实时定量检测突变。

Cat No./ID: 970460
KRAS Pyro Kit (24)
For 24 reactions: Sequencing Primers, PCR Primers, Unmethylated Control DNA, PyroMark PCR Master Mix, CoralLoad Concentrate, Buffers, and Reagents.

KRAS Pyro Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


0
密码子12和13正常基因型的Pyrogram。
1
密码子12的第二个碱基从GGT突变为GAT的Pyrogram图。
核苷酸35,用箭头表示。
2
密码子12的第1个碱基从GGT突变为TGT的Pyrogram图。
黄色表示出现意料外序列,需要检查。
3
对之前图中的样本进行再次分析的Pyrogram图。
使用靶向密码子12第1个碱基的"Sequence to Analyze" NGTGRCGTAGGC分析GGT到TGT的突变。
4
KRAS检测试剂分析原理。
图中序列为被分析的普通样本的序列。FP和FPB:正向PCR引物(B表示生物素化);RP和RPB:逆向PCR引物(B表示生物素化);Seq:测序引物。
Principle

KRAS Pyro Kit用于实时定量检测人KRAS基因编码子12、13和61的突变,在PyroMark Q24 System上使用焦磷酸测序技术检测。KRAS基因编码一种在EGFR信号通路中有重要作用的蛋白。KRAS基因的突变会影响该蛋白对下游通路的激活。所有癌症中将近30%发生KRAS基因突变,其中直肠癌(35%)和肺癌(18%)。

可检测以下种类的突变:

  • 编码子12/13:G12A、G12C、G12D、G12R、G12S、G12V和G13D
  • 编码子61:Q61E、Q61H、Q61L和Q61R
Procedure
该试剂盒包含2部分实验:一个用于检测编码子12和13的突变;另一个用于检测编码子61的突变(参见"Illustration of the KRAS assay"和"Pyrogram trace of a normal genotype in codons 12 and 13")。运用PCR技术对这两个片段分别进行扩增,测定特定区域的核酸序列。使用该法进行定量和定性分析时,特定区域周围的核酸序列峰被视为标准峰和参照峰。

使用针对编码子12/13和编码子61的引物对两个片段PCR扩增后,将扩增子固定在高性能链霉素亲和琼脂糖上。将单链DNA和相应序列的引物退火处理得到DNA。然后在PyroMark Q24 System上设置程序和运行程序对样品进行分析。推荐使用KRAS Plug-in Report进行分析。该报告确保使用正确的LODs和分析的不同序列可自动检测所有突变。也可在PyroMark Q24 System上使用其他分析工具进行分析(参见"Pyrogram trace of a GGT to GAT mutation in base 2 of codon 12")。运行后可以通过调节"Sequence to Analyze"来检测稀有突变(参见"Pyrogram trace of a GGT to TGT mutation in base 1 of codon 12"和"Pyrogram trace of the reanalysis of the sample in the previous figure")。

Applications

KRAS Pyro Kit确保准确定量突变分析,适用于各种研究领域,包括癌症和表观遗传学研究。该试剂盒用于检测人KRAS基因编码子12、13和61常见的突变。

可检测以下种类的突变:

  • 编码子12/13:G12A、G12C、G12D、G12R、G12S、G12V和G13D
  • 编码子61:Q61E、Q61H、Q61L和Q61R
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