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IDH1/2 RGQ PCR Kit

用于检测FFPE脑部肿瘤组织DNA中12种IDH1IDH2突变
  • 利用PCR发夹技术准确检测7种IDH1和5种IDH2突变
  • 利用ARMS PCR技术灵敏地鉴别3种突变
  • 可用于即用型解决方案的标准化分析
  • 可用于Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪的简单的工作流程
在Rotor-Gene Q 5plex HRM Instrument上采用IDH1/2 RGQ PCR Kit进行real-time PCR,可实现对12种IDH1IDH2基因突变的检测。试剂盒提供了所有必需的试剂,可快速且灵敏地实现IDH1IDH2突变的检测。突变检测引物和探针混合物将引物与探针相结合,同时扩增突变型和野生型目标序列,此为还有一个核苷酸,3'端添加了磷酸基团,以防止延伸(PCR发夹技术),它可以特异性地结合野生型目标序列。
Cat No./ID: 873001
IDH1/2 RGQ PCR Kit (20)
For 20 reactions: 9 Primer and Probe Mixes, WT Control, Positive Control, Master Mix, Nuclease-Free Water

仅限于科研应用,不适用于诊断,不为疾病的诊断、预防或治疗提供参考信息。


Principle

利用IDH1/2 RGQ PCR Kit中的试剂可完成9个独立的扩增反应,检测12种突变:

  • IDH1基因的132和100密码子及IDH2基因的172密码子的3次总扩增反应
  • IDH1基因的132和100密码子及IDH2基因的172密码子的3次突变扩增反应
  • IDH1 R132H、IDH1 R132C和IDH2 R172K突变的3次突变特异性扩增反应
使用IDH1/2 RGQ PCR Kit检测IDH1IDH2突变
基因 突变 碱基变化 Cosmic ID



IDH1
Arg132His 395G>A COSM28746
Arg132Cys 394C>T COSM28747
Arg132Ser 394C>A COSM28748
Arg132Gly 394 C>G COSM28749
Arg132Leu 395G>T COSM28750
Arg132Val 394_395 CG>GT COSM28751
Arg100Gln 299G>A COSM88208


IDH2
Arg172Lys 515G>A COSM33733
Arg172Met 515G>T COSM33732
Arg172Trp 514A>T COSM34039
Arg172Ser 516G>T COSM34090
Arg172Gly 514A>G COSM33731
总反应混合物

Total Primers and Probe Mixes(PPM-Total)使用引物和探针扩增突变型和野生型目标序列。

突变检测反应混合物

突变检测引物和探针混合物将引物与探针相结合,同时扩增突变型和野生型目标序列,此为还有一个核苷酸,3'端添加了磷酸基团,以防止延伸(PCR发夹技术),它可以特异性地结合野生型目标序列。

当PCR模板包含野生型序列时,因具有更高的亲合力,3'-磷酸寡核苷酸相比PCR引物的结合更具优势。DNA聚合酶几乎无延伸,且几乎未观察到扩增。

当存在突变序列时,PCR引物结合相比3'-磷酸寡核苷酸结合更具优势,扩增将继续。

突变鉴定反应混合物

ARMS(Amplification Refractory Mutation System)利用DNA聚合酶鉴别PCR引物的3'端是否匹配,实现等位基因特异性的扩增。

当PCR引物完全匹配时,扩增效率最高。当3'碱基不匹配时,仅出现低水平的背景扩增。

Procedure
IDH1/2 RGQ PCR Kit提供了12种IDH1IDH2基因突变检测所需的全部试剂。使用九种引物和探针混合物同时扩增突变型和野生型目标序列。只需将模板DNA及适当的引物和探针混合物加入即用型PCR预混液中,在Rotor-Gene Q 5plex HRM Instrument上采用试剂盒手册所述的优化循环程序开始反应。对于DNA纯化,我们推荐使用QIAamp DNA FFPE Tissue Kit,参照IDH1/2 RGQ PCR Kit手册中给定的改进实验方案。
Applications
利用IDH1/2 RGQ PCR Kit可以从福尔马林固定、石蜡包埋(FFPE)的脑部肿瘤组织样本DNA中检测12种IDH1IDH2基因突变。
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