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cador TKP PCR Reagent

适用于T. equigenitalis、K. pneumoniae和P. aeruginosa DNA的多重鉴定
  • T. equigenitalis、K. pneumoniae和P. aeruginosa DNA的同时鉴定
  • 内参可监测PCR抑制
  • 拥有PCR正式许可，无需额外的成本
  • 与英国Veterinary Laboratories Agency（VLA）共同开发的试剂
在Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析系统上，采用cador TKP PCR Reagent通过real-time PCR可实现Taylorella equigenitalis（T. equigenitalis）、Klebsiella pneumoniae（K. pneumoniae）和Pseudomonas aeruginosa（P. aeruginosa）DNA的鉴定。在Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪上，利用一支试管可鉴别出所有3种动物病原体。同一管内还包括内参，以监测PCR扩增是否成功。
Cat No./ID: 285115
cador TKP PCR Reagent (96)
Inquire
For 96 reactions: Pathogen Master Mix, QuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer, TKP Primer/Probes, TKP Control DNA
Effective April 1, 2018, product available exclusively from INDICAL
仅限于实验室使用。不适用于兽医学诊断步骤。不为动物疾病的诊断、预防或治疗提供参考信息。
Performance
cador TKP PCR Reagent包含实现T. equigenitalis、K. pneumoniae和P. aeruginosa基因组中高度保守的区域的特异且高效的扩增所需的试剂和酶。

此外，cador TKP PCR Reagent还包括一个异源扩增体系，以鉴别PCR抑制。通过内参（IC）的扩增，检测黄色通道内的荧光信号，测定PCR抑制。内参（IC）的扩增不会影响T. equigenitalis、K. pneumoniae和P. aeruginosa检测试剂的PCR扩增。同时还提供外部阳性对照（TKP Control DNA，包含靶向的T. equigenitalis、K. pneumoniae和P. aeruginosa DNA）。

对每种细菌的DNA进行序列分析，评估分析灵敏度。各real-time PCR实验重复三次。将可观察到扩增现象的最低稀释度的三次平均值定义为检测限（参见下表）。

表1.扩增子的检测阈限
动物病原体 检测阈限（基因拷贝数/PCR）
K. pneumoniae 2.36
P. aeruginosa 2.52
T. equigenitalis 2.46

动物样本材料中还可能存在其他多种病原体。采用cador TKP PCR Reagent分析其他细菌种属，检测潜在的交叉反应性（参见下表）。检测目标病原体和潜在的干扰细菌的混合物，以检测干扰性。未观察到交叉反应性或干扰性。

表2.对潜在交叉反应的分析
培养菌种 交叉反应 培养菌种 交叉反应
Actinobacillus equuli 未检测到 Pseudomonas putida 未检测到
Actinobacillus pleuropneumoniae 未检测到 Rhodococcus equi 未检测到
Arcano pyogenes 未检测到 Salmonella chittagong 未检测到
Citrobacter freundi 未检测到 Salmonella nottingham 未检测到
Enterobacter aerogenes 未检测到 Salmonella poona 未检测到
Enterobacter cloacae 未检测到 Shigella flexneri 未检测到
Enterococcus faecalis 未检测到 Staphylococcus aureus 未检测到
Enterococcus faecium 未检测到 Staphylococcus epidermidis 未检测到
Escherichia coli 未检测到 Streptococcus dysgalactiae 未检测到
Escherichia fergusonii 未检测到 Streptococcus dysgalactiae equisimilus 未检测到
Hafnia alvei 未检测到 Streptococcus equi 未检测到
Oligella urethralis 未检测到 Streptococcus equi zooepidemicus 未检测到
Pasteurella multocida 未检测到 Taylorella asinigenitalis 未检测到
Proteus mirabilis 未检测到 Yersinia enterocolitica 未检测到
Proteus morganis 未检测到 Yersinia fredericksenii 未检测到
Pseudomonas fluorescens 未检测到 Yersinia rohdei 未检测到
Principle
在Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析系统上，采用cador TKP PCR Reagent通过real-time PCR可实现T. equigenitalis、K. pneumoniae和P. aeruginosa DNA的鉴定。在Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪上，利用一支试管可鉴别出所有3种动物病原体。同一管内还包括内参，以监测PCR扩增是否成功。
Procedure
利用PCR进行动物病原体鉴定是基于病原体基因组中特定区域的扩增。在real-time PCR中，通过与特异性结合扩增产物的寡核苷酸探针相连的荧光染料检测扩增产物。在PCR过程中（实时）监测荧光强度，无需在PCR结束后重新打开反应管即可实现累积产物的鉴定，避免了交叉污染。在Rotor-Gene Q real-time PCR系统上测量绿色、橙色和深红色荧光，检测3种病原体的扩增片段（参见下表）。
表3.不同细菌的荧光检测信道
病原体/内参 信道
Klebsiella pneumoniae 绿色
Pseudomonas aeruginosa 橙色
Taylorella equigenitalis 深红色
内参 黄色
Applications
利用多重real-time PCR实现可靠的病原体DNA鉴定。

仅限于实验室使用。不适用于兽医学诊断步骤。不为动物疾病的诊断、预防或治疗提供参考信息。
Features
Specifications
定量/定性 Qualitative
推荐的样本制备 QIAamp cador Pathogen Mini Kit, QIAamp DNA Mini Kit. Both isolation protocols are fully automatable on the QIAcube.
仅限科研使用/CE认证/ASR RUO
样本类型 null
热循环仪 Rotor-Gene Q or Applied Biosystems Real-Time PCR cyclers
可检测 Taylorella equigenitalis, Klebsiella pneumoniae, and Pseudomonas aeruginosa DNA

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