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PyroMark OneStep RT-PCR Kit

适用于高灵敏度和特异性的一步法RT-PCR,专为焦磷酸测序优化

  • 焦磷酸测序专用的终点法RT-PCR解决方案
  • 在单管内实现高效逆转录后扩增
  • 独特的酶混合液和缓冲液,确保高特异性和高灵敏度
  • 高效的流程,无需优化

PyroMark OneStep RT-PCR Kit是专为后续焦磷酸测序优化的试剂盒,可确保RNA模板的高效逆转录,以及cDNA高特异性、可靠扩增。整个过程在单管中进行,速度合理,便于使用,污染风险低。

Cat No./ID: 978801
PyroMark OneStep RT-PCR Kit (50)
For 50 reactions: QIAGEN OneStep RT-PCR Enzyme Mix, optimized QIAGEN OneStep RT-PCR Buffer, 10x CoralLoad Concentrate, 5x Q-Solution, dNTP Mix, and RNase-Free Water
Cat No./ID: 978803
PyroMark OneStep RT-PCR Kit (200)
For 200 reactions: QIAGEN OneStep RT-PCR Enzyme Mix, optimized QIAGEN OneStep RT-PCR Buffer, 10x CoralLoad Concentrate, 5x Q-Solution, dNTP Mix, and RNase-Free Water

PyroMark OneStep RT-PCR Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


Principle

PyroMark OneStep RT-PCR Kit是第一款专为后续的焦磷酸测序设计并优化的RT-PCR试剂盒。该试剂盒可对RNA模板进行灵敏的一步式RT-PCR。RT-PCR的产物可用于多种焦磷酸测序的应用,如病毒检测和基因分型、特异性等位基因表达分析和对mRNA剪切异构体的检测。该试剂盒具有独特的酶组合和特别研制的反应缓冲液,确保可在一个试管中高效、高特异性的进行反转录和PCR,无需优化。该试剂盒中含有Q-Solution,确保了对具有复杂二级结构和高GC含量的模板的高效扩增。CoralLoad Concentrate确保RT-PCR产物在琼脂胶上方便上样和直观观察。

QIAGEN OneStep RT-PCR Enzyme Mix

QIAGEN OneStep RT-PCR Enzyme Mix含有专为逆转录和PCR扩增设计的酶混合液。

QIAGEN OneStep RT-PCR Enzyme Mix中含有Omniscript和Sensiscript Reverse Transcriptases,可高效、高特异性的进行逆转录。两个逆转录酶对RNA都有较高的亲和力,通过二级结构促进逆转录,同时抑制其他的逆转录酶。Omniscript Reverse Transcriptase专为大于50 ng的RNA逆转录设计,而Sensiscript Reverse Transcriptase适用于小于50 ng的RNA。独特的酶组合可对大小在1 pg至2 μg的起始RNA进行高效、灵敏的逆转录。
HotStarTaq DNA Polymerase可进行高特异性的热启动PCR扩增。在逆转录过程中,经化学修饰的HotStarTaq DNA Polymerase没有活性,不会影响逆转录反应。在逆转录后,将反应缓冲液加热至95°C,15分钟,以活化HotStarTaq DNA Polymerase同时使逆转录酶失活。使用HotStarTaq DNA Polymerase进行热启动流程,可减少第一次PCR循环中非特异性退火引物和引物二聚体的延伸,确保PCR的高度特异性和可重复性。
QIAGEN OneStep RT-PCR Buffer

QIAGEN OneStep RT-PCR Buffer专为高效的逆转录和特异性扩增设计。缓冲液独特的组成可实现高温(50°C)下的逆转录。较高的反应温度可破坏二级结构,进而提高逆转录反应的效率,对有限量的RNA模板的一步式RT-PCR反应格外重要。QIAGEN的酶和一步式RT-PCR缓冲液配套使用,确保高效的PCR反应效率。该缓冲液确保引物特异性退火的温度范围和Mg2+浓度范围均比传统PCR缓冲液的范围大。因此,通常无需通过调节退火温度或Mg2+浓度来优化RT-PCR(参见"Increased specificity of primer annealing")。

CoralLoad Concentrate

PyroMark OneStep RT-PCR Kit含有CoralLoad Concentrate。CoralLoad Concentrate含有胶上样试剂和两个凝胶示踪染料,一个橘色,一个红色(参见"CoralLoad Concentrate")。在CoralLoad Concentrate存在的条件下扩增出的RT-PCR产物可直接上样至琼脂糖凝胶。

Q-Solution

PyroMark OneStep RT-PCR Kit含有Q-Solution,这是一种新型添加物,可改变核酸的熔解行为。Q-Solution可促进具有复杂二级结构和高GC含量的模板的逆转录和扩增。

Procedure

反转录和PCR可在同一管内完成。反应建立时要加入反应所需的所有组分,一旦反应开始后无需再加入其他组分。经优化的循环条件,包括30分钟的逆转录反应时间、HotStarTaq DNA Polymerase酶的活化,以及随后的模板扩增。

Applications

PyroMark OneStep RT-PCR Kit是专为焦磷酸测序优化的试剂盒,适合下列焦磷酸测序应用:

  • 病毒检测
  • 病毒基因分型
  • 特异性等位基因表达分析
  • mRNA剪接异构体的检测

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