RNeasy Plus Mini Kit

从培养的细胞和组织样本中纯化至多100 µg总RNA,配有gDNA去除柱

  • 独特的gDNA Eliminator柱,无需DNase处理
  • 有效去除基因组DNA
  • 数分钟内得到RNA,产量重复性好
  • RNA在敏感的下游应用中表现出色
RNeasy Plus Mini Kit将快速方便的RNA纯化与高效去除基因组DNA整合在一起,可纯化至多100 µg RNA。细胞或组织裂解液流过gDNA去除柱,去除基因组DNA。然后使用RNeasy Mini离心柱纯化总RNA。该试剂盒可在QIAcube全自动核酸纯化仪上自动化进行。可使用RNAlater RNA Stabilization Reagent或Allprotect Tissue Reagent方便的稳定组织样本,并使用TissueRuptor或TissueLyser体系高效破碎样本。处理较小样本,可使用RNeasy Plus Micro Kit(离心柱的结合能力为45 µg RNA)。
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RNeasy Plus Mini Kit (50)
For 50 minipreps: RNeasy Mini Spin Columns, gDNA Eliminator Spin Columns, Collection Tubes, RNase-Free Water and Buffers
74134
¥38,500
RNeasy Plus Mini Kit (250)
For 250 minipreps: RNeasy Mini Spin Columns, gDNA Eliminator Spin Columns, Collection Tubes, RNase-Free Water and Buffers
74136
¥162,000

RNeasy Plus Mini Kit  は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。


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High, reproducible RNA yields.|効率的な組織ゲノムDNAの除去|RNeasy Plus調製法|効率的な細胞ゲノムDNAの除去|アレイ解析が即可能なRNA|
Total RNA was purified in duplicate from different amounts of Jurkat cells using the RNeasy Plus Mini Kit or a similar kit from Supplier AV. Real-time RT-PCR assays for β-actin were performed (40 cycles). The lower CT values with the RNeasy Kit demonstrate greater RNA yields. With the kit from Supplier AV, no transcript was detectable in RNA purified from 102 cells. |RNeasy Plus Mini Kitあるいは他社のキットを用いて異なるマウス組織(各サンプル10 mg)からトータルRNAをduplicateで精製した。精製したRNA中のDNAの混入量を調べるためにc-jun用のリアルタイムPCRアッセイを行なった。|短い調製により、25分未満でRNA精製とゲノムDNAの除去が可能。|[A] RNeasy Plus Mini Kitあるいは[B] Supplier AVのゲノムDNA除去と組み合わせたRNA精製キットを用い、Jurkat細胞サンプル(サンプルあたり1 x 106個)からトータルRNAを精製した。β-actin用のリアルタイムRT-PCRアッセイを逆転写酵素あり(+RT)またはなし(-RT)でduplicateで行なった。-RT曲線は、RNeasy Plus Mini Kitを用いて精製したRNAに混在するゲノムDNAが事実上ないことを示す。|RNeasy Plus Mini Kitを用い、1 x 106個のHeLa細胞からトータルRNAをduplicateで精製した。cRNAは、GeneChip IVT Labeling Kitを用い、複製RNAサンプル(各3.5 μg)から調製した。cRNAサンプル(各15 μg)をGeneChip Human Genome U133Aプローブアレイで解析した。スキャッタープロットは2種類のサンプル間の相関性(ピアソンの相関係数[r]0.996)を示している。赤色:両方のサンプルに存在する遺伝子、青色:1サンプルに存在しないまたは最低限の遺伝子、黄色:両方のサンプルに存在しないまたは最低限の遺伝子。|
パフォーマンス
RNeasy Plus Mini操作流程可从细胞和组织中纯化得到重复高产的RNA,并高效去除基因组DNA污染,用于敏感的下游应用(参见"Effective cell genomic DNA removal"、"Effective tissue genomic DNA removal"、"High, reproducible RNA yields"和"Array-ready RNA")。通常从培养细胞中可获得Agilent RIN值接近10的总RNA。
原理

细胞和易裂解组织首先在含有异硫氰酸胍的高变性Buffer RLT Plus中裂解和匀质化,该缓冲液能使RNases立即失活,以保证分离到完整的RNA。裂解液再流过gDNA Eliminator柱。该离心柱与高盐缓冲液共同作用,可选择性高效的去除基因组DNA。加入乙醇以提供RNA结合的合适条件,样本再加入到RNeasy Mini离心柱。含有硅胶膜的特制离心柱能特异性的结合裂解细胞中的RNA。

操作手順

可从多达107个细胞或30 mg组织中纯化总RNA。简洁的工作流程可在25分钟内纯化得到已去除基因组DNA的RNA(参见"RNeasy Plus procedure" )。样本首先被裂解和匀质化。裂解液流过gDNA Eliminator柱,在流过gDNA Eliminator柱的溶液中加入乙醇,样本再加上样到RNeasy Mini离心柱。RNA结合到膜上,污染物被洗去。获得高品质RNA,洗脱体积30 µl或更大。

处理不同的起始样本可用不同的实验方案。实验方案的不同之处主要在于样本的裂解和匀质化。样本上样到gDNA Eliminator柱之后的步骤就类似。此操作流程适合富集mRNA,不包括大部分小于200 nt的RNAs(如rRNAs和tRNAs)。RNeasy Plus操作流程稍作修改后可从培养细胞中纯化含miRNA等小RNAs的总RNA。

使用Buffer RLT Plus(RNeasy Plus Mini Kit提供)进行组织破碎和匀质化时,可能会产生过多泡沫。在破碎和匀浆前向Buffer RLT Plus中加入Reagent DX(单独提供)可充分减少泡沫产生。Reagent DX经仔细检测,表明配合此试剂盒使用不会影响RNA的纯度或下游应用。

アプリケーション

RNeasy Plus Mini Kit纯化得到的RNA适合对少量DNA敏感的下游应用,如定量real-time RT-PCR。纯化得到的RNA还可以用于其他应用。

Feature
Specifications
Applications Northern, dot, and slot blotting, end-point RT-PCR, quantitative, real-time RT-PCR, array analysis, next-generation sequencing
Elution volume 30-50 µl
Format Spin column
Integrated removal of genomic DNA Yes
Main sample type Tissue, cells
Processing Manual (centrifugation)
Purification of total RNA, miRNA, poly A+ mRNA, DNA or protein Total RNA
Sample amount 30 mg (<700 µl)
Technology Silica technology
Time per run or per prep 25 minutes
Yield Varies

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FAQ
20
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FAQ ID -1087
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FAQ ID -1258
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FAQ ID -1037
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テクニカルインフォメーション
1
Supplementary Protocols
2

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There are two protocols: follow Protocol 1 if you want to purify total RNA containing miRNA, or follow Protocol 2 if you want to purify small RNA (includes miRNA, 5S rRNA, and tRNA) and larger RNA (>200 nt) separately.
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キットハンドブック
2
gDNA Eliminatorカラムを用いた動物細胞および溶解しやすい動物組織からのトータルRNA精製
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クイックスタートプロトコール
1
サイエンティフィック・ポスター
1
References
0
画像
High, reproducible RNA yields.
High, reproducible RNA yields.
Total RNA was purified in duplicate from different amounts of Jurkat cells using the RNeasy Plus Mini Kit or a similar kit from Supplier AV. Real-time RT-PCR assays for β-actin were performed (40 cycles). The lower CT values with the RNeasy Kit demonstrate greater RNA yields. With the kit from Supplier AV, no transcript was detectable in RNA purified from 102 cells. 
Effective genomic DNA removal.
効率的な組織ゲノムDNAの除去

RNeasy Plus Mini Kitあるいは他社のキットを用いて異なるマウス組織(各サンプル10 mg)からトータルRNAをduplicateで精製した。精製したRNA中のDNAの混入量を調べるためにc-jun用のリアルタイムPCRアッセイを行なった。

RNeasy Plus procedure.
RNeasy Plus調製法

短い調製により、25分未満でRNA精製とゲノムDNAの除去が可能。

Effective elimination of genomic DNA contamination.
効率的な細胞ゲノムDNAの除去
[A] RNeasy Plus Mini Kitあるいは[B] Supplier AVのゲノムDNA除去と組み合わせたRNA精製キットを用い、Jurkat細胞サンプル(サンプルあたり1 x 106個)からトータルRNAを精製した。β-actin用のリアルタイムRT-PCRアッセイを逆転写酵素あり(+RT)またはなし(-RT)でduplicateで行なった。-RT曲線は、RNeasy Plus Mini Kitを用いて精製したRNAに混在するゲノムDNAが事実上ないことを示す。
Array-ready RNA.
アレイ解析が即可能なRNA
RNeasy Plus Mini Kitを用い、1 x 106個のHeLa細胞からトータルRNAをduplicateで精製した。cRNAは、GeneChip IVT Labeling Kitを用い、複製RNAサンプル(各3.5 μg)から調製した。cRNAサンプル(各15 μg)をGeneChip Human Genome U133Aプローブアレイで解析した。スキャッタープロットは2種類のサンプル間の相関性(ピアソンの相関係数[r]0.996)を示している。赤色:両方のサンプルに存在する遺伝子、青色:1サンプルに存在しないまたは最低限の遺伝子、黄色:両方のサンプルに存在しないまたは最低限の遺伝子。