RNeasy Plus Mini Kit

从培养的细胞和组织样本中纯化至多100 µg总RNA,配有gDNA去除柱

  • 独特的gDNA Eliminator柱,无需DNase处理
  • 有效去除基因组DNA
  • 数分钟内得到RNA,产量重复性好
  • RNA在敏感的下游应用中表现出色
RNeasy Plus Mini Kit将快速方便的RNA纯化与高效去除基因组DNA整合在一起,可纯化至多100 µg RNA。细胞或组织裂解液流过gDNA去除柱,去除基因组DNA。然后使用RNeasy Mini离心柱纯化总RNA。该试剂盒可在QIAcube全自动核酸纯化仪上自动化进行。可使用RNAlater RNA Stabilization Reagent或Allprotect Tissue Reagent方便的稳定组织样本,并使用TissueRuptor或TissueLyser体系高效破碎样本。处理较小样本,可使用RNeasy Plus Micro Kit(离心柱的结合能力为45 µg RNA)。
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RNeasy Plus Mini Kit (50)
For 50 minipreps: RNeasy Mini Spin Columns, gDNA Eliminator Spin Columns, Collection Tubes, RNase-Free Water and Buffers
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RNeasy Plus Mini Kit (250)
For 250 minipreps: RNeasy Mini Spin Columns, gDNA Eliminator Spin Columns, Collection Tubes, RNase-Free Water and Buffers
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RNeasy Plus Mini Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


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High, reproducible RNA yields.|高效去除组织的基因组DNA。|RNeasy Plus实验流程。|高效去除细胞的基因组DNA。|可直接用于芯片分析的RNA。|
Total RNA was purified in duplicate from different amounts of Jurkat cells using the RNeasy Plus Mini Kit or a similar kit from Supplier AV. Real-time RT-PCR assays for β-actin were performed (40 cycles). The lower CT values with the RNeasy Kit demonstrate greater RNA yields. With the kit from Supplier AV, no transcript was detectable in RNA purified from 102 cells. |使用RNeasy Plus Mini Kit或其他供应商的试剂盒,从各种小鼠组织(每个样本10 mg)中纯化总RNA,重复两次。对c-jun进行real-time PCR分析,测定纯化RNA中DNA污染物的量。|利用较短的工作流程,只需不到30分钟即可完成RNA纯化并去除基因组DNA。|使用 [A] RNeasy Plus Mini Kit或者 [B] Supplier AV的整合基因组DNA去除步骤的RNA纯化试剂盒,从Jurkat细胞样本(每个样本1 x 106个细胞)中纯化总RNA。使用(+RT)或不使用(-RT)逆转录酶对β-actin进行两次重复的real-time RT-PCR分析。-RT曲线证明,使用RNeasy Plus Mini Kit纯化的RNA中几乎不含基因组DNA。|使用RNeasy Plus Mini Kit从1 x 106个HeLa细胞中纯化总RNA,重复两次。使用GeneChip IVT Labeling Kit从两个重复的RNA样本(各3.5 μg)中制备cRNA。在GeneChip Human Genome U133A probe芯片上分析cRNA样本(各15 μg)。散点图显示了两个样本间的相关性(Pearson相关系数 [r] 为0.996)。红色:两个样本中均存在的基因;蓝色:在一个样本中不存在或者处于临界状态的基因;黄色:在两个样本中均不存在或者处于临界状态的基因。|
性能
RNeasy Plus Mini操作流程可从细胞和组织中纯化得到重复高产的RNA,并高效去除基因组DNA污染,用于敏感的下游应用(参见"Effective cell genomic DNA removal"、"Effective tissue genomic DNA removal"、"High, reproducible RNA yields"和"Array-ready RNA")。通常从培养细胞中可获得Agilent RIN值接近10的总RNA。
原理

细胞和易裂解组织首先在含有异硫氰酸胍的高变性Buffer RLT Plus中裂解和匀质化,该缓冲液能使RNases立即失活,以保证分离到完整的RNA。裂解液再流过gDNA Eliminator柱。该离心柱与高盐缓冲液共同作用,可选择性高效的去除基因组DNA。加入乙醇以提供RNA结合的合适条件,样本再加入到RNeasy Mini离心柱。含有硅胶膜的特制离心柱能特异性的结合裂解细胞中的RNA。

操作流程

可从多达107个细胞或30 mg组织中纯化总RNA。简洁的工作流程可在25分钟内纯化得到已去除基因组DNA的RNA(参见"RNeasy Plus procedure" )。样本首先被裂解和匀质化。裂解液流过gDNA Eliminator柱,在流过gDNA Eliminator柱的溶液中加入乙醇,样本再加上样到RNeasy Mini离心柱。RNA结合到膜上,污染物被洗去。获得高品质RNA,洗脱体积30 µl或更大。

处理不同的起始样本可用不同的实验方案。实验方案的不同之处主要在于样本的裂解和匀质化。样本上样到gDNA Eliminator柱之后的步骤就类似。此操作流程适合富集mRNA,不包括大部分小于200 nt的RNAs(如rRNAs和tRNAs)。RNeasy Plus操作流程稍作修改后可从培养细胞中纯化含miRNA等小RNAs的总RNA。

使用Buffer RLT Plus(RNeasy Plus Mini Kit提供)进行组织破碎和匀质化时,可能会产生过多泡沫。在破碎和匀浆前向Buffer RLT Plus中加入Reagent DX(单独提供)可充分减少泡沫产生。Reagent DX经仔细检测,表明配合此试剂盒使用不会影响RNA的纯度或下游应用。

应用

RNeasy Plus Mini Kit纯化得到的RNA适合对少量DNA敏感的下游应用,如定量real-time RT-PCR。纯化得到的RNA还可以用于其他应用。

特点
参数
应用 PCR, qPCR, real-time RT-PCR, microarray
洗脱体积 30-50 µl
规格 Spin column
整合基因组DNA去除步骤 Yes
主要样本类型 Tissue, cells
处理 Manual (centrifugation)
纯化总RNA、miRNA、poly A+ mRNA、DNA或蛋白 Total RNA
样本量 30 mg (<700 µl)
技术 Silica technology
每次运行或制备时间 25 minutes
产量 Varies

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补充实验方案
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There are two protocols: follow Protocol 1 if you want to purify total RNA containing miRNA, or follow Protocol 2 if you want to purify small RNA (includes miRNA, 5S rRNA, and tRNA) and larger RNA (>200 nt) separately.
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安全数据表
1
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
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学术海报
1
图片
High, reproducible RNA yields.
High, reproducible RNA yields.
Total RNA was purified in duplicate from different amounts of Jurkat cells using the RNeasy Plus Mini Kit or a similar kit from Supplier AV. Real-time RT-PCR assays for β-actin were performed (40 cycles). The lower CT values with the RNeasy Kit demonstrate greater RNA yields. With the kit from Supplier AV, no transcript was detectable in RNA purified from 102 cells. 
Effective genomic DNA removal.
高效去除组织的基因组DNA。
使用RNeasy Plus Mini Kit或其他供应商的试剂盒,从各种小鼠组织(每个样本10 mg)中纯化总RNA,重复两次。对c-jun进行real-time PCR分析,测定纯化RNA中DNA污染物的量。
RNeasy Plus procedure.
RNeasy Plus实验流程。
利用较短的工作流程,只需不到30分钟即可完成RNA纯化并去除基因组DNA。
Effective elimination of genomic DNA contamination.
高效去除细胞的基因组DNA。
使用 [A] RNeasy Plus Mini Kit或者 [B] Supplier AV的整合基因组DNA去除步骤的RNA纯化试剂盒,从Jurkat细胞样本(每个样本1 x 106个细胞)中纯化总RNA。使用(+RT)或不使用(-RT)逆转录酶对β-actin进行两次重复的real-time RT-PCR分析。-RT曲线证明,使用RNeasy Plus Mini Kit纯化的RNA中几乎不含基因组DNA。
Array-ready RNA.
可直接用于芯片分析的RNA。
使用RNeasy Plus Mini Kit从1 x 106个HeLa细胞中纯化总RNA,重复两次。使用GeneChip IVT Labeling Kit从两个重复的RNA样本(各3.5 μg)中制备cRNA。在GeneChip Human Genome U133A probe芯片上分析cRNA样本(各15 μg)。散点图显示了两个样本间的相关性(Pearson相关系数 [r] 为0.996)。红色:两个样本中均存在的基因;蓝色:在一个样本中不存在或者处于临界状态的基因;黄色:在两个样本中均不存在或者处于临界状态的基因。