QuantiFast Pathogen +IC Kits
For sensitive and reliable detection of viral RNA/DNA and bacterial DNA, including internal control
- Simultaneous detection of pathogen target and internal control
- 5x master mix for higher sensitivity with more sample input
- Correct interpretation of negative results for increased process safety
- Clear detection of weak positive target signals
- Fast, universal protocol on both standard and fast cyclers
The QuantiFast Pathogen +IC Kits are designed for sensitive and rapid real-time PCR or one-step RT-PCR detection of pathogen nucleic acids using sequence-specific probes. To enable high process safety through correct interpretation of negative detection results, each kit contains reagents for multiplex real-time detection of up to 4 user-defined pathogen targets (e.g., virus, bacteria, fungi etc.) plus the Internal Control (IC). Two kit formats are available: The QuantiFast Pathogen RT-PCR +IC Kit for detection of viral RNA, which contains an internal RNA control template, plus the Internal Control primer/probe set, or the QuantiFast Pathogen PCR +IC Kit for detection of viral, bacterial, or fungal DNA, which contains an internal DNA control template, plus the Internal Control primer/probe set. With both kits, ROX is supplied in 2 tubes of different concentrations, enabling use on virtually any real-time instrument. For convenience, the master mix can be stored at 2–8°C.
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QuantiFast Pathogen PCR +IC Kit (100)
For 100 x 25 µl reactions: Master Mix, lyophilized Internal Control Assay, lyophilized Internal Control DNA, ROX Dye Solution, High-ROX Dye Solution, RNase-Free Water, Nucleic Acid Dilution Buffer, Buffer TE
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QuantiFast Pathogen PCR +IC Kit (400)
For 400 x 25 µl reactions: Master Mix, lyophilized Internal Control Assay, lyophilized Internal Control DNA, ROX Dye Solution, High-ROX Dye Solution, RNase-Free Water, Nucleic Acid Dilution Buffer, Buffer TE
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QuantiFast Pathogen RT-PCR +IC Kit (400)
For 400 x 25 µl reactions: Master Mix, RT Mix, lyophilized Internal Control Assay, lyophilized Internal Control RNA, ROX Dye Solution, High-ROX Dye Solution, RNase-Free Water, Nucleic Acid Dilution Buffer, Buffer TE
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Internal Control DNA (High conc.)
For approximately 200 preps (depending on the elution volume): Lyophilized Internal Control DNA, Nucleic Acid Dilution Buffer
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Internal Control RNA (High conc.)
For approximately 200 preps (depending on elution volume): Lyophilized Internal Control RNA, Nucleic Acid Dilution Buffer
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QuantiFast Pathogen +IC Kits は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。
陰性結果の正確な判定|Rotor-Gene QでBHV-1 の高感度検出|ノロウイルスを高感度検出|ABI 7500でBHV-1の高感度検出|プライマーの高速なアニーリング|QIAGEN Multiplex Kit|ユニークなPCRバッファー|QIAGEN Internal Control|SingleplexとDuplex検出で高い直線性と精度を実現|RNAスタンダードの正確な希釈および保存|
ウイルスRNAターゲットの2 種類の希釈液のduplicates をインターナルコントロールと共に、様々な量のPCR 阻害物質(フミン酸)の存在下でRotor-Gene Q で同時増幅した。[A] テンプレートを含まないコントロール(NTCs)はインターナルコントロールシグナルのリファレンスとなる。[B] ウイルスRNAターゲットおよびインターナルコントロールの増幅で良好な結果が得られた。[C]インターナルコントロールは低濃度の阻害物質が存在することを示唆している。[D]インターナルコントロールが検出できない場合は、阻害物質の存在により増幅が失敗したことを示している。|ウシヘルペスウイルス1型の連続希釈液(100 ~10-4)を調製し、singleplex のリアルタイムPCR あるいはInternal Controlを同時に検出するduplex のリアルタイムPCR により検出した。QuantiFast Pathogen PCR +IC Kit を用いて、キットに同梱のプロトコールにしがたってRotor-Gene Q でPCRの至適化は行なわずにリアルタイムPCR を行なった。Duplex 反応には一定量のインターナルコントロールテンプレートが含まれている。各希釈液の解析はtriplicateで行なった。各希釈液は1つのreplicate で示す。|ノロウイルス転写RNAの連続希釈液(100 ~10-5)を調製し、singleplex のリアルタイムRT-PCR あるいはインターナルコントロールを同時に検出するduplex のリアルタイムRT-PCR により検出した。QuantiFast Pathogen RT-PCR +IC Kit を用いてRotor-Gene Q でPCRの至適化を行なわずにリアルタイムPCR を行なった。Duplex 反応には一定量のインターナルコントロールテンプレートが含まれている。各希釈液の解析はtriplicate で行なった。各希釈液あたり1 replicateを示している。|ウシヘルペスウイルス1型の連続希釈液(100 ~10-4)を調製し、singleplex のリアルタイムPCR あるいはインターナルコントロールを同時に検出するduplex のリアルタイムPCR により検出した。QuantiFast Pathogen PCR +IC Kit を用いて、キットに同梱のプロトコールにしがたってABI 7500 でPCR の至適化は行なわずにリアルタイムPCR を行なった。Duplex 反応には一定量のインターナルコントロールテンプレートが含まれている。各希釈液の解析はtriplicate で行なった。各希釈液は1つのreplicateで示す。|[A] QuantiFast Buffer中のQ-Bondは、短い一本鎖化したDNAへのDNAポリメラーゼの結合アフィニティーを増大させるため、プライマーのアニーリング時間を数秒間に短縮できる。さらにDNAの融解をサポートするユニークなバッファー組成が、変性およびエクステンション時間を短縮する。[B] Q-Bond が存在しないと、プライマーとポリメラーゼが連続的にテンプレートに結合するのでプライマーのアニーリングに時間がかかる。|QuantiFast Pathogen +IC Kitsは、簡単な操作でマルチプレックスリアルタイムRT-PCRを実現する。汎用されている方法に比べて、本キットはプライマー、プローブ、Mg2+、Taq DNA polymeraseの濃度に対する至適化が不要で、リファレンス遺伝子に比べてターゲット遺伝子のコピー数が少ないアッセイでも同様。|[A] NH4+ イオンは非特異的なプライマーのテンプレートへのアニーリングを防ぐ。[B]画期的なPCR添加物であるFactor MP は、テンプレート周辺でのプライマー濃度を高める。K+ や他の陽イオンと共に、Factor MPは特異的に結合したプライマーを安定化し、HotStarTaq Plus DNA Polymeraseによる効果的なプライマーエクステンションを可能にする。|病原体ターゲットとインターナルポジティブコントロールを同時に抽出/増幅することは、PCR阻害物質あるいは偽陰性結果になるような他の問題を排除するためのより確実な方法である。QIAGEN Internal Controlは、増幅コントロールとしてPCR増幅前に添加できる。また、高濃度のQIAGEN Internal Controlは核酸抽出の際に抽出と増幅のコントロールとして添加できる。|ノロウイルスRNA のsingleplex 検出ならびにノロウイルス/IC のduplex 検出ともに1.0E+6までの希釈範囲で 高い直線性と精度が示された。エラーバーは、リアルタイムRT-PCRの3 replicates実験の±1 SDで示している。|QuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer またはRNase フリー水を用いて、表記のようにRNA スタンダード(in vitro 転写RNA)の10 倍連続希釈溶液を調製した。これらの希釈液を調製直後(0 test)、あるいは -20 ℃で2 および4 週間保存後に1 ステップRT-PCR のテンプレートとして用いた。QuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer を用いた場合のほうが、低いCT値が得られ、スタンダードの安定性も高い結果が得られた。|
原理
To enable high process safety through the correct interpretation of negative results, each QuantiFast Pathogen _IC Kit contains reagents for multiplex, real-time detection of a user-defined pathogen target with the Internal Control. Amplifying control and target genes in the same reaction, instead of separate reactions, increases the reliability of gene quantification by minimizing handling errors.
QuantiFast Pathogen +IC Kits provide sensitive and rapid real-time multiplex PCR or one-step RT-PCR detection of pathogen nucleic acids on the first attempt (see flowchart "QIAGEN multiplex kits"). The optimized master mix ensures that PCR products in a multiplex reaction are amplified with the same efficiency and sensitivity as PCR products in a corresponding single-amplification reaction. The specially developed fast PCR buffer contains the novel additive Q-Bond, which significantly reduces denaturation, annealing, and extension times (see figure "Fast primer annealing"). A balanced combination of K+ and NH4+ ions as well as unique synthetic Factor MP, promote stable and efficient annealing of primers and probes to the nucleic acid template, enabling high PCR efficiency (see figure "Unique PCR buffer"). In addition, the unique formulation of Sensiscript Reverse Transcriptase ensures highly sensitive reverse transcription of viral RNA, while HotStarTaq Plus DNA Polymerase provides a stringent hot start, preventing the formation of nonspecific products.
| 5x QuantiFast Pathogen PCR Master Mix |
Concentrated master mix |
Highly concentrated and optimized for sensitive pathogen detection |
Larger volumes of template can be added to the assay for increased sensitivity |
| HotStarTaq Plus DNA Polymerase |
5 min activation at 95ºC |
Set up of qPCR reactions at room temperature |
| QuantiFast Pathogen Buffer |
Balanced combination of NH4+ and K+ ions |
Specific primer annealing ensures reliable PCR results |
| Synthetic Factor MP |
Reliable multiplexing analysis of up to 4 genes in the same tube |
| Unique Q-Bond additive |
Faster PCR run times, enabling faster results and more reactions per day |
| Internal Control Assay |
Internal Control template |
Internal Control DNA template in the QuantiFast Pathogen PCR +IC Kit |
A universal DNA amplification control that can be used with different pathogen assays |
| Internal Control RNA in the QuantiFast Pathogen RT-PCR +IC Kit |
A universal RNA amplification control that can be used with different pathogen assays |
| Internal Control Assay |
Premixed primer/probe set (TaqMan® probe) labeled with MAX (equivalent to HEX, VIC, etc.) |
Will not interfere with primers against the pathogen-target |
| Additional kit components |
QuantiFast Pathogen RT Mix* |
Contains a unique formulation of Sensiscript Reverse Transcriptase |
Optimized for highly sensitive detection of pathogen RNA |
| ROX Dye Solution |
Separate tube of passive reference dye for normalization of fluorescent signals on Applied Biosystems 7500 real-time PCR systems. Optional: Can be used on Stratagene instruments from Agilent |
Precise quantification on cyclers that require ROX dye. Does not interfere with PCR on any real-time cycler |
| High-ROX Dye Solution |
Separate tube of passive reference dye for normalization of fluorescent signals on Applied Biosystems 7900 and StepOne real-time PCR systems |
| QuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer |
Proprietary buffer formulation for dilution and storage of nucleic acid standards |
Stabilizes RNA and DNA standards during dilution and reaction setup and prevents loss of nucleic acids on plastic surfaces, such as tubes or pipet tips |
操作手順
QuantiFast Pathogen +IC Kits provide a simple procedure for the detection of a user-defined pathogen and the Internal Control. They contain a ready-to-use master mix for the real-time detection of viral RNA (1-step RT-PCR) or viral, bacterial, and fungal DNA (PCR). There is no need for optimization of reaction and cycling conditions. Simply mix the supplied master mix with the pathogen assay (primers and probe) and the supplied Internal Control Assay and the Internal Control DNA or RNA. Alternatively, if the Internal Control has been added to the sample purification procedure, add RNase-free water instead of Internal Control DNA or RNA to the reaction mix. Then add your sample DNA or RNA and start the reaction on any cycler. The kit handbook contains optimized protocols for use with TaqMan® probes on a wide range of cyclers. It also contains recommendations for selection of dye combinations.
Each QuantiFast Pathogen +IC Kit includes the Internal Control Assay and Internal Control DNA or RNA for use as an amplification control via direct addition to the reaction mix. Alternatively, the IC can be added to the purification procedure to control both the purification process and amplification. For addition of the Internal Control to the purification procedure, highly concentrated Internal Control DNA or RNA (High conc.) can be ordered separately (see figure "QIAGEN Internal Control").
アプリケーション
QuantiFast Pathogen +IC Kits provide sensitive real-time PCR or one-step RT-PCR using sequence-specific probes for detection of pathogen DNA and/or RNA including an internal control. The kits can be used on a wide range of real-time cyclers, including cyclers from QIAGEN, Applied Biosystems, Bio-Rad, Roche (except for capillary cyclers), and Agilent.
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Feature
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Specifications
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Applications
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Pathogen Detection: Real-time PCR of viral, bacterial or fungal DNA (QuantiFast Pathogen PCR +IC Kit) or one-step RT-PCR for detection of viral RNA (QuantiFast Pathogen RT-PCR +IC Kit)
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Reaction type
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Real-time PCR or one-step RT-PCR including of an internal control (IC)
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Real-time or endpoint
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Real-time
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Sample/target type
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QuantiFast Pathogen PCR +IC Kit: viral, bacterial or fungal DNA; QuantiFast Pathogen RT-PCR +IC Kit: viral RNA
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Single or multiplex
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Duplex
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SYBR Green I or sequence-specific probes
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Sequence-specific probes
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Thermal cycler
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For most standard and fast real-time cylcers compatible with duplex PCR/RT-PCR, e.g. Rotor-Gene Q or cyclers from Agilent, Applied Biosystems, BioRad, Roche
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With or without ROX
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Master Mix is provided without ROX dye, but 2 separate ROX solutions are included: High-ROX Dye Solution for use with ABI cyclers except ABI 7500, ROX Dye Solution (low ROX conc.) for use with ABI 7500 and other suppliers
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優れた温度均一性を実現するリアルタイムPCR 装置
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配列特異的なプローブを用いた高感度な1 ステップリアルタイムRT-PCR によるウイルスRNA およびインターナルコントロールの検出
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配列特異的なプローブを用いた高感度リアルタイムPCR によるウイルス/バクテリアDNA およびインターナルコントロールの検出
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画像
陰性結果の正確な判定
ウイルスRNAターゲットの2 種類の希釈液のduplicates をインターナルコントロールと共に、様々な量のPCR 阻害物質(フミン酸)の存在下でRotor-Gene Q で同時増幅した。[A] テンプレートを含まないコントロール(NTCs)はインターナルコントロールシグナルのリファレンスとなる。[B] ウイルスRNAターゲットおよびインターナルコントロールの増幅で良好な結果が得られた。[C]インターナルコントロールは低濃度の阻害物質が存在することを示唆している。[D]インターナルコントロールが検出できない場合は、阻害物質の存在により増幅が失敗したことを示している。
Rotor-Gene QでBHV-1 の高感度検出
ウシヘルペスウイルス1型の連続希釈液(100 ~10-4)を調製し、singleplex のリアルタイムPCR あるいはInternal Controlを同時に検出するduplex のリアルタイムPCR により検出した。QuantiFast Pathogen PCR +IC Kit を用いて、キットに同梱のプロトコールにしがたってRotor-Gene Q でPCRの至適化は行なわずにリアルタイムPCR を行なった。Duplex 反応には一定量のインターナルコントロールテンプレートが含まれている。各希釈液の解析はtriplicateで行なった。各希釈液は1つのreplicate で示す。
ノロウイルスを高感度検出
ノロウイルス転写RNAの連続希釈液(100 ~10-5)を調製し、singleplex のリアルタイムRT-PCR あるいはインターナルコントロールを同時に検出するduplex のリアルタイムRT-PCR により検出した。QuantiFast Pathogen RT-PCR +IC Kit を用いてRotor-Gene Q でPCRの至適化を行なわずにリアルタイムPCR を行なった。Duplex 反応には一定量のインターナルコントロールテンプレートが含まれている。各希釈液の解析はtriplicate で行なった。各希釈液あたり1 replicateを示している。
ABI 7500でBHV-1の高感度検出
ウシヘルペスウイルス1型の連続希釈液(100 ~10-4)を調製し、singleplex のリアルタイムPCR あるいはインターナルコントロールを同時に検出するduplex のリアルタイムPCR により検出した。QuantiFast Pathogen PCR +IC Kit を用いて、キットに同梱のプロトコールにしがたってABI 7500 でPCR の至適化は行なわずにリアルタイムPCR を行なった。Duplex 反応には一定量のインターナルコントロールテンプレートが含まれている。各希釈液の解析はtriplicate で行なった。各希釈液は1つのreplicateで示す。
プライマーの高速なアニーリング
[A] QuantiFast Buffer中のQ-Bondは、短い一本鎖化したDNAへのDNAポリメラーゼの結合アフィニティーを増大させるため、プライマーのアニーリング時間を数秒間に短縮できる。さらにDNAの融解をサポートするユニークなバッファー組成が、変性およびエクステンション時間を短縮する。[B] Q-Bond が存在しないと、プライマーとポリメラーゼが連続的にテンプレートに結合するのでプライマーのアニーリングに時間がかかる。
QIAGEN Multiplex Kit
QuantiFast Pathogen +IC Kitsは、簡単な操作でマルチプレックスリアルタイムRT-PCRを実現する。汎用されている方法に比べて、本キットはプライマー、プローブ、Mg2+、Taq DNA polymeraseの濃度に対する至適化が不要で、リファレンス遺伝子に比べてターゲット遺伝子のコピー数が少ないアッセイでも同様。
ユニークなPCRバッファー
[A] NH4+ イオンは非特異的なプライマーのテンプレートへのアニーリングを防ぐ。[B]画期的なPCR添加物であるFactor MP は、テンプレート周辺でのプライマー濃度を高める。K+ や他の陽イオンと共に、Factor MPは特異的に結合したプライマーを安定化し、HotStarTaq Plus DNA Polymeraseによる効果的なプライマーエクステンションを可能にする。
QIAGEN Internal Control
病原体ターゲットとインターナルポジティブコントロールを同時に抽出/増幅することは、PCR阻害物質あるいは偽陰性結果になるような他の問題を排除するためのより確実な方法である。QIAGEN Internal Controlは、増幅コントロールとしてPCR増幅前に添加できる。また、高濃度のQIAGEN Internal Controlは核酸抽出の際に抽出と増幅のコントロールとして添加できる。
SingleplexとDuplex検出で高い直線性と精度を実現
ノロウイルスRNA のsingleplex 検出ならびにノロウイルス/IC のduplex 検出ともに1.0E+6までの希釈範囲で 高い直線性と精度が示された。エラーバーは、リアルタイムRT-PCRの3 replicates実験の±1 SDで示している。
RNAスタンダードの正確な希釈および保存
QuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer またはRNase フリー水を用いて、表記のようにRNA スタンダード(in vitro 転写RNA)の10 倍連続希釈溶液を調製した。これらの希釈液を調製直後(0 test)、あるいは -20 ℃で2 および4 週間保存後に1 ステップRT-PCR のテンプレートとして用いた。QuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer を用いた場合のほうが、低いCT値が得られ、スタンダードの安定性も高い結果が得られた。
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