用于在Rotor-Gene PCR仪上使用序列特异性探针超快速进行两步法qRT-PCR
- 灵敏检测低拷贝数基因
- 大范围模板量内确保准确的检测
- Rotor-Gene PCR仪上超快速、可靠的结果
- 专用的即用型预混液确保快速循环
Rotor-Gene Probe PCR Kit专用于Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪和其他Rotor-Gene PCR仪,使用序列特异性探针采用定量两步法RT-PCR可超快速、高度灵敏的定量cDNA靶分子。特殊优化的预混液配合独特的Rotor-Gene PCR仪,表现卓越。预混液可贮存在2–8°C,方便使用。
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Rotor-Gene Probe PCR Kit (400)
For 400 x 25 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x Rotor-Gene Probe PCR Master Mix, 2 x 2 ml RNase-Free Water
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204374
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Rotor-Gene Probe PCR Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。
灵敏、可重复的检测。|real-time PCR准确度高。|对1个细胞也能可靠检测。|宽泛的线性范围。|Specific primer annealing.|Fast primer annealing.|
使用2倍稀释的基因组DNA(30 ng到3.75 ng)和自行设计的TaqMan探针对IL1R2(白介素1受体Ⅱ)进行real-time PCR。反应使用[A] Rotor-Gene Probe PCR Kit和Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR仪或[B]供应商AII提供的试剂盒和循环仪(每个稀释样本重复五次反应)。Rotor-Gene体系能够检测到较低的CT值,有更好的重复性以及对不同浓度模板的较高的分辨率。|使用Rotor-Gene Probe PCR Kit和Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪对人基因组DNA进行real-time PCR分析。[A] 2倍稀释的DNA(从30 [5000拷贝]到0.06 ng[20拷贝])使用自行设计的TaqMan探针对IL1R2(白介素1受体Ⅱ)进行分析;每个浓度模板重复五次。相邻浓度模板间的CT值平均差1.07个循环。[B] 5 ng DNA使用自行设计的TaqMan探针对IL1R2进行分析。100次重复实验的标准偏差为0.21。[C] 20 ng DNA使用自行设计的TaqMan探针对ACTB(β-actin)进行分析。100次重复实验的标准偏差为0.29。|使用4倍稀释的人基因组DNA(相当于从16, 666个细胞到1个细胞)和自行设计的TaqMan探针对ACTB(β-actin)进行real-time PCR分析。反应使用Rotor-Gene Probe PCR Kit和Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪进行,重复三次实验。Rotor-Gene体系在整个浓度范围内检测可靠且重复性好。|使用10倍稀释的质粒DNA(109 到10个拷贝)和自行设计的TaqMan探针对PPIA(亲环素A)进行real-time PCR分析。反应使用Rotor-Gene Probe PCR Kit和Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪进行,重复三次实验。Rotor-Gene体系在整个浓度范围内检测可靠且CT值重复性好。|Cations in the Rotor-Gene Q PCR buffer increase specific primer annealing. K+ binds to phosphate groups on double-stranded DNA, stabilizing primer annealing. NH4+ destabilizes weak hydrogen bonds between mismatched bases.|[A] Q-Bond in Rotor-Gene Probe PCR Master Mix increases the affinity of DNA polymerase for short single-stranded DNA, reducing primer annealing time to a few seconds. In addition, the unique buffer composition supports the melting of DNA, reducing denaturation and extension times. [B] Without Q-Bond, the primer and polymerase bind sequentially to the template, increasing primer annealing time.|
性能
Rotor-Gene Probe PCR Kit非常适合定量PCR分析(参见"Highly sensitive and reproducible detection", "High precision in real-time PCR"),以及在大范围模板量内提供可靠的检测(参见"Reliable detection down to 1 cell", 和 "Wide dynamic range")。
| 1,000,000,000 |
5.11 |
3.07 |
| 100,000,000 |
8.18 |
3.39 |
| 10,000,000 |
11.57 |
3.04 |
| 1,000,000 |
14.61 |
3.68 |
| 100,000 |
18.29 |
3.28 |
| 10,000 |
21.57 |
3.68 |
| 1,000 |
25.25 |
3.06 |
| 100 |
28.31 |
3.43 |
| 10 |
31.74 |
– |
| 有效性 |
0.99 |
|
| 线性 |
1 |
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原理
Rotor-Gene Probe PCR Kit能够在Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪上可靠的定量两步法RT-PCR,无需优化反应或循环条件。该试剂盒专为水解探针(如TaqMan探针)而设计。含有K+和NH4+平衡组合的预混液促进高特异性引物退火,确保高度灵敏和特异性扩增(参见"Specific primer annealing")。新颖的PCR添加剂Q-Bond能够在45分钟内完成循环反应,而不影响表现(参见"Fast primer annealing")。
| HotStarTaq Plus DNA聚合酶 |
95ºC条件下5分钟激活 |
在室温下建立qPCR反应体系 |
| Rotor-Gene Probe PCR Buffer |
NH4+和K+平衡组合预混液 |
特异性引物退火 ,确保可靠的qPCR结果 |
| 独特的Q-Bond添加剂 |
更快速的PCR循环,快速获得结果,一天可进行更多的反应 |
操作流程
即用型Rotor-Gene Probe PCR Master Mix无需优化反应和循环条件。只需在预混液中添加模板cDNA、引物和探针,然后设置PCR仪即可开始实验。试剂盒中提供的操作手册有使用说明。 水解探针(如TaqMan探针)与Rotor-Gene Probe PCR Kit配合使用,在Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪上快速、灵敏的定量,只需将引物探针混合物和模板加入预混液即可。 为了两步法定量RT-PCR获得更加优化的结果,推荐使用QuantiTect Reverse Transcription Kit合成cDNA。该试剂盒只需20分钟即可快速合成cDNA,并可完全去除基因组DNA的污染。
应用
Rotor-Gene Probe PCR Kit专用于Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪,使用序列特异性探针采用定量两步法RT-PCR可快速定量cDNA靶分子。该试剂盒也与Rotor-Gene 3000和Rotor-Gene 6000兼容。
在Rotor-Gene PCR仪上使用Rotor-Gene Probe RT-PCR Kit,可利用序列特异性探针对RNA靶分子进行超快速的一步法qRT-PCR基因表达分析。
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特点
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参数
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应用
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Real-time quantification of genomic DNA or cDNA targets
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描述
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For ultrafast quantitative real-time PCR and two-step RT-PCR using sequence-specific probes
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反应类型
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Real-time PCR and two-step RT-PCR
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real-time或终点法PCR
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Real-time
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样本/目标类型
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DNA, cDNA
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单一或多重
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Single
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SYBR Green I或序列特异性探针
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Sequence-specific probes
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热循环仪
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Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000
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有/无ROX
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Without ROX dye
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For fast real-time PCR, two-step RT-PCR, and one-step RT-PCR using sequence-specific probes on Rotor-gene cyclers.
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图片
灵敏、可重复的检测。
使用2倍稀释的基因组DNA(30 ng到3.75 ng)和自行设计的TaqMan探针对IL1R2(白介素1受体Ⅱ)进行real-time PCR。反应使用[A] Rotor-Gene Probe PCR Kit和Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR仪或[B]供应商AII提供的试剂盒和循环仪(每个稀释样本重复五次反应)。Rotor-Gene体系能够检测到较低的CT值,有更好的重复性以及对不同浓度模板的较高的分辨率。
real-time PCR准确度高。
使用Rotor-Gene Probe PCR Kit和Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪对人基因组DNA进行real-time PCR分析。[A] 2倍稀释的DNA(从30 [5000拷贝]到0.06 ng[20拷贝])使用自行设计的TaqMan探针对IL1R2(白介素1受体Ⅱ)进行分析;每个浓度模板重复五次。相邻浓度模板间的CT值平均差1.07个循环。[B] 5 ng DNA使用自行设计的TaqMan探针对IL1R2进行分析。100次重复实验的标准偏差为0.21。[C] 20 ng DNA使用自行设计的TaqMan探针对ACTB(β-actin)进行分析。100次重复实验的标准偏差为0.29。
对1个细胞也能可靠检测。
使用4倍稀释的人基因组DNA(相当于从16, 666个细胞到1个细胞)和自行设计的TaqMan探针对ACTB(β-actin)进行real-time PCR分析。反应使用Rotor-Gene Probe PCR Kit和Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪进行,重复三次实验。Rotor-Gene体系在整个浓度范围内检测可靠且重复性好。
宽泛的线性范围。
使用10倍稀释的质粒DNA(109 到10个拷贝)和自行设计的TaqMan探针对PPIA(亲环素A)进行real-time PCR分析。反应使用Rotor-Gene Probe PCR Kit和Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪进行,重复三次实验。Rotor-Gene体系在整个浓度范围内检测可靠且CT值重复性好。
Specific primer annealing.
Cations in the Rotor-Gene Q PCR buffer increase specific primer annealing. K+ binds to phosphate groups on double-stranded DNA, stabilizing primer annealing. NH4+ destabilizes weak hydrogen bonds between mismatched bases.
Fast primer annealing.
[A] Q-Bond in Rotor-Gene Probe PCR Master Mix increases the affinity of DNA polymerase for short single-stranded DNA, reducing primer annealing time to a few seconds. In addition, the unique buffer composition supports the melting of DNA, reducing denaturation and extension times. [B] Without Q-Bond, the primer and polymerase bind sequentially to the template, increasing primer annealing time.
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