- 创新的方法用于克服福尔马林造成的交联
- 有效的释放RNA而不破坏其完整性
- 高效的实验方案,在85分钟内即可获得纯化的RNA
RNeasy FFPE Kit专为从福尔马林固定、石蜡包埋的组织切片中纯化总RNA而设计。独特的裂解和孵育条件逆转福尔马林对RNA的修饰。并且裂解缓冲液可将RNA从组织切片中有效释放出来,防止RNA的进一步降解。试剂盒同样使用DNase和DNase Booster Buffer优化,去除基因组DNA的污染。使用RNeasy MinElute离心柱纯化获得的总RNA,洗脱体积可小至10 μl。整个纯化流程可在QIAcube全自动核酸纯化仪上全自动进行。
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RNeasy FFPE Kit (50)
50 RNeasy MinElute Spin Columns, Collection Tubes, Proteinase K, RNase-Free DNase I, DNase Booster Buffer, RNase-Free Buffers, RNase-Free Water
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73504
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RNeasy FFPE Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。
real-time RT-PCR分析的可靠结果。|RNA产量更高。|RNeasy FFPE实验流程。|成功的real-time RT-PCR分析。|回收各种有用RNA。|
使用RNeasy FFPE Kit或者Supplier EIII、Supplier N、Supplier AIV和Supplier M的同类试剂盒,从10 µm大鼠肺FFPE样本中纯化总RNA。在Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪上进行PGK1(磷酸甘油酸激酶1)的real-time RT-PCR分析,包括(+RT)或不包括(-RT)逆转录步骤。使用RNeasy FFPE Kit在-RT样本中获得高CT值,表示纯化的RNA中几乎不含基因组DNA。因此,使用RNeasy FFPE Kit在+RT样本中获得的CT值代表了可靠的RNA表达水平。|使用RNeasy FFPE Kit或者Supplier N、Supplier AIV和Supplier M的同类试剂盒,从标示的10 µm大鼠肺组织的FFPE切片中纯化RNA。测量260 nm处的吸光值,确定RNA的产量。|从样本中去除石蜡后,在优化的裂解缓冲液中,采用蛋白酶K酶切,只需15分钟即可完成样本裂解,且不影响RNA的产量。裂解后,将样本置于80ºC孵化15分钟,逆转福尔马林交联。然后使用DNase和DNase Booster Buffer高效去除基因组DNA,包括FFPE样本中的小DNA片段。最后,使用RNeasy MinElute离心柱纯化浓缩的RNA。RNA的洗脱体积仅为14–30 µl,因此可以减少下游操作中的反应体积。|使用RNeasy FFPE Kit从大鼠肾脏中纯化总RNA。在Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪上,使用(+RT)或不使用(-RT)逆转录酶进行PGK1(磷酸甘油酸激酶1)的real-time RT-PCR分析。-RT曲线证明,使用RNeasy FFPE Kit纯化的RNA中几乎不含基因组DNA。|在Agilent 2100 Bioanalyzer上使用RNeasy FFPE Kit或者Supplier AIV、Supplier N或Supplier M的同类试剂盒,从6个月的FFPE大鼠肝脏中纯化RNA。峰值表示,与使用其他试剂盒相比,使用RNeasy FFPE Kit可以纯化获得更完整的RNA。|
原理
用福尔马林固定组织会导致RNA-RNA和RNA-蛋白质的交联,这会影响RNA在酶学分析中的性能。FFPE样本固定和包埋同样会导致核酸的严重片段化。RNeasy FFPE Kit提供了独特的裂解和孵育条件来逆转福尔马林对RNA的修饰。裂解缓冲液能使RNA从FFPE组织样本中有效释放,并防止进一步的RNA降解。经优化的条件能纯化得到所有可用的RNA,使用RNeasy FFPE Kit从FFPE样本中得到的RNA的产量比其他方法更高。
操作流程
整个RNeasy FFPE操作流程可在85分钟内完成(参见"RNeasy FFPE procedure")。使用蛋白酶K裂解样本仅需15分钟。裂解后,样本在80ºC下孵育15分钟。之后,用DNase处理能有效去除样本中的基因组DNA,包括小的DNA片段。最后,使用RNeasy MinElute离心柱即可收集纯化的RNA,洗脱体积14–30 µl。纯化过程可在QIAcube全自动核酸纯化仪上全自动进行。
应用
RNeasy FFPE Kit可纯化FFPE 样本中所有大于70 nt RNA,得到适用于RT-PCR等众多下游应用的RNA片段。但是,从FFPE样本中纯化得到的RNA会严重片段化,不能用于需要完整RNA的下游应用。如果使用片段化RNA可能需要做些修饰(例如在RT-PCR时设计小的扩增子)。进行cDNA合成时,不能使用oligo-dT引物,而要使用随机或基因特异性引物。
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特点
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参数
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应用
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PCR, qPCR, real-time RT-PCR, microarray
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洗脱体积
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14–30 µl
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规格
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Spin column
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主要样本类型
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FFPE tissue samples
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处理
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Manual (centrifugation), automated (QIAcube)
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纯化总RNA、miRNA、poly A+ mRNA、DNA或蛋白
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RNA
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样本量
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1*5 µm to 4*10µm sections
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技术
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Silica technology
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每次运行或制备时间
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70 minutes
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产量
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Varies
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Critical factors for molecular analysis of FFPE samples
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High-quality, nucleic acid purification for successful PCR and NGS experiments.
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I received one of the kits in the list below containing the MinElute columns, however they were left out for a while and not stored at 2-8°C upon receipt. Can I still use them? AllPrep DNA/RNA Micro, EpiTect Fast DNA Bisulfite, EpiTect Fast FFPE Bisulfite, EpiTect Fast LyseAll Bisulfite, EpiTect Plus DNA Bisulfite, EpiTect Plus FFPE Bisulfite, EpiTect Plus LyseAll Bisulfite, exoRNeasy Serum/plasma Maxi, exoRNeasy Serum/Plasma Midi, GeneRead DNA FFPE, GeneRead rRNA Depletion, GeneRead Size Selection, MinElute Gel Extraction, MinElute PCR Purification, MinElute Reaction Cleanup, miRNeasy FFPE, miRNeasy Micro, miRNeasy Serum/Plasma, QIAamp DNA FFPE, QIAamp DNA Investigator, QIAamp DNA Micro, QIAamp MinElute Media, QIAamp MinElute Virus Spin, QIAamp MinElute Virus Vacuum, RNeasy FFPE, RNeasy Micro, RNeasy Plus Micro
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real-time RT-PCR分析的可靠结果。
使用RNeasy FFPE Kit或者Supplier EIII、Supplier N、Supplier AIV和Supplier M的同类试剂盒,从10 µm大鼠肺FFPE样本中纯化总RNA。在Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪上进行PGK1(磷酸甘油酸激酶1)的real-time RT-PCR分析,包括(+RT)或不包括(-RT)逆转录步骤。使用RNeasy FFPE Kit在-RT样本中获得高CT值,表示纯化的RNA中几乎不含基因组DNA。因此,使用RNeasy FFPE Kit在+RT样本中获得的CT值代表了可靠的RNA表达水平。
RNA产量更高。
使用RNeasy FFPE Kit或者Supplier N、Supplier AIV和Supplier M的同类试剂盒,从标示的10 µm大鼠肺组织的FFPE切片中纯化RNA。测量260 nm处的吸光值,确定RNA的产量。
RNeasy FFPE实验流程。
从样本中去除石蜡后,在优化的裂解缓冲液中,采用蛋白酶K酶切,只需15分钟即可完成样本裂解,且不影响RNA的产量。裂解后,将样本置于80ºC孵化15分钟,逆转福尔马林交联。然后使用DNase和DNase Booster Buffer高效去除基因组DNA,包括FFPE样本中的小DNA片段。最后,使用RNeasy MinElute离心柱纯化浓缩的RNA。RNA的洗脱体积仅为14–30 µl,因此可以减少下游操作中的反应体积。
成功的real-time RT-PCR分析。
使用RNeasy FFPE Kit从大鼠肾脏中纯化总RNA。在Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪上,使用(+RT)或不使用(-RT)逆转录酶进行PGK1(磷酸甘油酸激酶1)的real-time RT-PCR分析。-RT曲线证明,使用RNeasy FFPE Kit纯化的RNA中几乎不含基因组DNA。
回收各种有用RNA。
在Agilent 2100 Bioanalyzer上使用RNeasy FFPE Kit或者Supplier AIV、Supplier N或Supplier M的同类试剂盒,从6个月的FFPE大鼠肝脏中纯化RNA。峰值表示,与使用其他试剂盒相比,使用RNeasy FFPE Kit可以纯化获得更完整的RNA。
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