QuantiFast Probe RT-PCR Kits

使用序列特异性探针进行一步法快速RT-PCR,用于基因表达分析

  • 快速获得结果,节约多达60%的时间
  • 灵敏的检测低拷贝数模板
  • 准确检测各种起始量的模板
  • 优化的即用型预混液用于快速PCR反应
  • 通用的操作流程适用于标准和快速PCR仪

QuantiFast Probe RT-PCR Kits利用序列特异性探针,可对RNA进行快速、灵敏的两步法RT-PCR定量检测。Q-bond技术和优化的预混液使real-time RT-PCR的运行时间缩短,不仅在快速PCR仪上,即使在普通PCR仪上也可快速完成反应。即用型预混液含有热启动酶和独特的PCR缓冲液,确保在任何real-time PCR仪上无需优化即可进行灵敏的定量PCR检测。该试剂盒也提供经优化的RT混合液,10分钟即可高效合成cDNA。提供两种试剂盒规格。对于需要ROX进行荧光校准的PCR仪,可选择QuantiFast Probe RT-PCR Kit。对于其他PCR仪,可选择QuantiFast Probe RT-PCR +ROX Vial Kit。为了便于使用,预混液可保存在2–8°C。

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QuantiFast Probe RT-PCR Kit (400)
For 400 x 25 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiFast Probe RT-PCR Master Mix (contains ROX dye), 100 µl QuantiFast RT Mix, 2 x 2 ml RNase-Free Water
204454
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QuantiFast Probe RT-PCR Kit (2000)
For 2000 x 25 µl reactions: 25 ml 2x QuantiFast Probe RT-PCR Master Mix (contains ROX dye), 0.5 ml QuantiFast RT Mix, 20 ml RNase-Free Water
204456
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QuantiFast Probe RT-PCR +ROX Vial Kit (400)
For 400 x 25 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiFast Probe RT-PCR Master Mix (without ROX dye), 210 µl ROX Dye Solution, 100 µl QuantiFast RT Mix, 2 ml RNase-Free Water
204554
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QuantiFast Probe RT-PCR +ROX Vial Kit (2000)
For 2000 x 25 µl reactions: 25 ml 2x QuantiFast Probe RT-PCR Master Mix (without ROX dye), 1.05 ml ROX Dye Solution, 0.5 ml QuantiFast RT Mix, 20 ml RNase-Free Water
204556
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QuantiFast Probe RT-PCR Kits适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


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RT-PCR反应时间明显缩短。|灵敏的一步法RT-PCR。|动态范围宽。|更快获得结果,且保持高灵敏性。|动态范围宽,灵敏度高。|退火时引物特异性结合。|退火时引物快速结合。|
在标准PCR循环仪上使用QuantiFast Probe Kit进行一步法real-time RT-PCR,可缩短RT-PCR总运行时间达60% (进行40个PCR循环;与标准的QIAGEN real-time PCR Kit相比较)。L:LightCycler 2.0;A1:ABI PRISM 7900;A2:Applied Biosystems 7500;A3:ABI PRISM 7000。|在Applied Biosystems 7500 Fast System上使用10倍稀释的人白细胞RNA (100 ng至0.1 ng) 和采用Primer Express设计的针对IL12RBI (一种I型跨膜蛋白) 的TaqMan Assay进行两次重复反应。[A] QuantiFast Kit的灵敏度高于 [B] Supplier I的试剂盒 (参照标准循环实验方案使用),具有更低的CT值,可实现低至0.1 ng RNA的转录本定量。|使用Primer Express设计的TaqMan Assay对人白细胞中的泛素表达进行分析。在ABI PRISM 7900上进行双重两步法和一步法qPCR反应。[A] 使用QuantiFast Probe PCR Kit分析10倍稀释的cDNA (100 ng至10 pg)。[B] 使用QuantiFast Probe RT-PCR Kit分析10倍稀释的RNA (100 ng至10 pg)。|在ABI PRISM 7900上使用10倍稀释的人白细胞cDNA (100 ng至0.01 ng) 和28S rRNA的TaqMan Gene Expression Assay进行反应。QuantiFast Kit的灵敏度高于Supplier AII的标准循环试剂盒 (参照标准循环实验方案使用),具有更低的CT值,可实现低至10 pg cDNA的转录本定量。|使用10倍稀释的人白细胞RNA和针对β-actin的TaqMan Assay重复三次反应。QuantiFast Probe RT-PCR Kit提供了100 ng至1 pg RNA模板范围的准确基因表达分析。|退火时,缓冲液中浓度平衡的KCl和(NH4)2SO4促进引物和探针特异性与模板结合。K+结合到双链DNA上的磷酸基团,稳定引物和探针。NH4+则破坏弱的错配碱基之间的氢键。|[A] QuantiFast Buffer中的Q-Bond能使DNA聚合酶和引物结合为单一复合物,将退火时间缩短至几秒。此外,独特的缓冲液组分可支持DNA的熔解,缩短变性和延伸时间。[B] 若无Q-Bond,引物和聚合酶会相继与模板结合,退火时间较长。|
性能

使用QuantiFast Probe RT-PCR Kits可获得灵敏的结果,比其他real-time RT-PCR试剂盒的性能更加优越(参见"Sensitive One-step RT-PCR")。可节约多达60%的PCR运行时间(参见"Significantly reduced PCR times"),可确保更快获得结果,而RT-PCR的效果不会受到影响(参见"Faster results without compromising sensitivity")。使您可以极大提高样本通量,或通过与其他人员共享PCR仪提高效率。使用QuantiFast Probe RT-PCR Kits不会改变您的操作流程,并适用于标准或快速PCR仪。

QuantiFast Probe RT-PCR Kits可在大范围内进行精确定量检测(参见"Comparable dynamic range")。可靠检测稀释倍数高达6个数量级的模板稀释液(参见"Wide dynamic range and high sensitivity")。

原理

QuantiFast Probe RT-PCR Kits可在大范围内进行快速、灵敏的定量检测,适用于标准和快速PCR仪。该试剂盒专为各种序列特异性探针设计,包括水解探针(TaqMan探针和其他双标记探针)和FRET探针。经优化的QuantiFast RT Mix可确保在10分钟内合成cDNA。特制的快速RT-PCR缓冲液包含新型Q-Bond成分,可大大缩短变性、退火和延伸时间(参见"Fast primer annealing")。RT-PCR缓冲液中K+和NH4+离子的平衡配比可促进特异性的引物退火,确保高度灵敏和特异的RT-PCR反应(参见"Specific primer annealing")。此外,HotStarTaq Plus DNA Polymerase必须要在95°C加热5分钟才能活化,需要严格的热启动,可避免生成非特异性产物。  

2x QuantiFast Probe RT-PCR Kit的成分*
成分 特点 优势
HotStarTaq Plus DNA Polymerase 95ºC加热5分钟活化 在室温进行qPCR反应体系构建
QuantiFast Probe RT-PCR Buffer 平衡的NH4+和K+离子配比 引物探针的特异性结合确保获得可靠结果
独特的Q-Bond添加剂 PCR运行时间缩短,更快获得结果,一天内可完成更多PCR反应
ROX染料 对Applied Biosystems和Agilent PCR仪进行荧光信号的校准 对需要ROX染料的PCR仪进行校准,不影响PCR反应结果
QuantiFast RT Mix 单独的溶液,需要在反应体系构建时另外加入 在10分钟内快速完成cDNA合成
* 也含有dNTP混合液(dATP、dCTP、dGTP和dTTP)。 ROX染料或者在预混液中,或者另外提供。
操作流程

QuantiFast Probe RT-PCR Kits包含即用型预混液,无需对反应和扩增条件进行优化。只需按照操作手册进行实验,即可快速获得可靠的结果。提供含有和不含ROX染料的预混液(参见下表)。由于ROX浓度经优化,即使是低拷贝数也可通过数据自动分析进行检测。

选择合适的QuantiFast Probe RT-PCR Kit
ROX染料试剂盒 适用的PCR仪
混合在预混液中 QuantiFast Probe RT-PCR Kit 除Applied Biosystems 7500外的所有Applied Biosystems仪器
单独装在管中 QuantiFast Probe RT-PCR +ROX Vial Kit Applied Biosystems 7500、
Mx3000P、Mx3005P、Mx4000和Bio-Rad、Cepheid、Corbett、Eppendorf、和Roche的PCR仪
应用

QuantiFast Probe RT-PCR Kits利用序列特异性探针,可在任何real-time PCR仪上对目标RNA进行基因表达分析,适用于Applied Biosystems、Bio-Rad、Cepheid、Eppendorf、Roche和Agilent的PCR仪。在Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪或其他Rotor-Gene PCR仪上使用时,我们推荐使用专为快速PCR研发的Rotor-Gene Probe RT-PCR Kit。

特点
参数
应用 Probe-based, real-time RT-PCR
反应类型 Real-time one-step RT-PCR
real-time或终点法PCR Real-time
样本/目标类型 RNA
单一或多重 Single
SYBR Green I或序列特异性探针 Sequence-specific probes
热循环仪 All real-time cyclers (e.g. LC, RG, ABI)
有/无ROX Available with ROX in master mix and with ROX as a separate vial

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试剂盒操作手册
1
QuantiFast Probe RT-PCR Kit
QuantiFast Probe RT-PCR +ROX Vial Kit For fast, quantitative, real-time, one-step RT-PCR using sequence-specific probes
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图片
Significantly reduced PCR times
RT-PCR反应时间明显缩短。
在标准PCR循环仪上使用QuantiFast Probe Kit进行一步法real-time RT-PCR,可缩短RT-PCR总运行时间达60% (进行40个PCR循环;与标准的QIAGEN real-time PCR Kit相比较)。L:LightCycler 2.0;A1:ABI PRISM 7900;A2:Applied Biosystems 7500;A3:ABI PRISM 7000。
Sensitive one-step RT-PCR on the Applied Biosystems 7500 Fast System.
灵敏的一步法RT-PCR。
在Applied Biosystems 7500 Fast System上使用10倍稀释的人白细胞RNA (100 ng至0.1 ng) 和采用Primer Express设计的针对IL12RBI (一种I型跨膜蛋白) 的TaqMan Assay进行两次重复反应。[A] QuantiFast Kit的灵敏度高于 [B] Supplier I的试剂盒 (参照标准循环实验方案使用),具有更低的CT值,可实现低至0.1 ng RNA的转录本定量。
Comparable dynamic range in two-step and one-step RT-PCR on the ABI PRISM 7900.
动态范围宽。
使用Primer Express设计的TaqMan Assay对人白细胞中的泛素表达进行分析。在ABI PRISM 7900上进行双重两步法和一步法qPCR反应。[A] 使用QuantiFast Probe PCR Kit分析10倍稀释的cDNA (100 ng至10 pg)。[B] 使用QuantiFast Probe RT-PCR Kit分析10倍稀释的RNA (100 ng至10 pg)。
Faster results without compromising sensitivity on the ABI PRISM 7900
更快获得结果,且保持高灵敏性。
在ABI PRISM 7900上使用10倍稀释的人白细胞cDNA (100 ng至0.01 ng) 和28S rRNA的TaqMan Gene Expression Assay进行反应。QuantiFast Kit的灵敏度高于Supplier AII的标准循环试剂盒 (参照标准循环实验方案使用),具有更低的CT值,可实现低至10 pg cDNA的转录本定量。
Wide Dynamic Range and High Sensitivity in One-Step RT-PCR on the ABI PRISM 7900
动态范围宽,灵敏度高。
使用10倍稀释的人白细胞RNA和针对β-actin的TaqMan Assay重复三次反应。QuantiFast Probe RT-PCR Kit提供了100 ng至1 pg RNA模板范围的准确基因表达分析。
Specific primer annealing using a balanced combination of K+ and NH4+ ions
退火时引物特异性结合。
退火时,缓冲液中浓度平衡的KCl和(NH4)2SO4促进引物和探针特异性与模板结合。K+结合到双链DNA上的磷酸基团,稳定引物和探针。NH4+则破坏弱的错配碱基之间的氢键。
Fast primer annealing with Q-Bond
退火时引物快速结合。
[A] QuantiFast Buffer中的Q-Bond能使DNA聚合酶和引物结合为单一复合物,将退火时间缩短至几秒。此外,独特的缓冲液组分可支持DNA的熔解,缩短变性和延伸时间。[B] 若无Q-Bond,引物和聚合酶会相继与模板结合,退火时间较长。