直接克隆PCR产物
QIAGEN PCR Cloningplus Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。
QIAGEN PCR Cloningplus Kit整合了最新的具有省时特点的连接技术,可对Taq和其他非高保真DNA聚合酶产生的PCR产物进行快速、简单、高效的克隆。QIAGEN PCR Cloningplus Kit优于其他供应商的试剂盒,确保结果成功。与基于TA的克隆载体相比,使用pDrive Cloning Vector克隆更加快速(参见"Highly specific cloning with a shorter ligation time of 30 min"、"Highly specific cloning with a ligation time of 4 h"和表格)。QIAGEN PCR Cloningplus Kit提供QIAGEN EZ Competent Cells,无需费时的复苏过程即可高效转化(每微克DNA >108个菌落形成单位(CFU);参见"Transformation without recovery incubation")。
pDrive Cloning Vector(参见"pDrive Cloning Vector")通过UA杂交可对PCR产物进行高效克隆。载体是3'端带有U突出末端的线性形式,能与Taq和其他非高保真DNA聚合酶产生的带有A突出末端的PCR产物进行高特异性杂交。pDrive Cloning Vector具有很多有用的特征,便于对克隆的PCR产物进行分析。这些特征包括多种独特的限制性酶切识别位点、通用测序引物位点和用于体外转录的启动子。此外,载体还可进行氨苄青霉素和卡那霉素筛选,以及对重组克隆的蓝/白斑筛选。
PCR产物可高效克隆到pDrive Cloning Vector,与基于TA的克隆载体相比,所需时间更少。而且,T是最可能与非互补碱基(如G、C和T)杂交的碱基,带有T突出末端的载体更可能发生自连或连接克隆引物或退火引物,导致假阳性克隆数目增加。相比起来,pDrive Cloning Vector具有更高克隆效率,表明U对非特异性碱基配对有更低容忍度。
Ligation Master Mix采用预混形式,专用于为高效克隆提供最佳的杂交环境。
使用QIAGEN EZ Competent Cells能让克隆步骤更加快速和方便。转化的细胞通常都需要在SOC培养基中孵育复苏,需要时间来表达抗性。与此不同,QIAGEN EZ Competent Cells不需要这个耗时的复苏孵育步骤即可高效转化(每微克DNA >108个菌落形成单位(CFU)。
与拓扑异构酶法、TA法、常规粘性末端和平末端克隆方法相比,QIAGEN PCR Cloningplus Kit(参见"PCR Cloning Kit procedure")操作流程更加快速。连接需要30分钟,使用QIAGEN EZ Competent Cells进行转化和涂板只需10分钟,从PCR产物到涂板的整个操作流程只需40分钟。
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