QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit

从人类血浆或血清中浓缩和纯化游离DNA和RNA

  • 浓缩的核酸,高上样量,低洗脱体积
  • 高效回收DNA和RNA碎片
  • 无需有机提取或乙醇沉淀
  • 完全去除污染物和抑制剂

QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit大大简化了从血浆或血清中浓缩和纯化游离DNA和RNA的过程。

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QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit (50)
For 50 preps: QIAamp Mini Columns, Tube Extenders (20 ml), QIAGEN Proteinase K, Carrier RNA, Buffers, VacConnectors, and Collection Tubes (1.5 ml and 2 ml)
55114
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Carrier RNA(poly A) 12x1350µg-15-25°C,KG
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QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


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回收游离DNA。|回收片段化DNA,表现更出色。|高效纯化游离miRNA。|高效回收甲基化DNA。|
在24个血浆样本中加入同等量的DNA片段(200 bp和1000 bp)。使用QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit从5 ml血浆中纯化DNA,洗脱体积为80 μl。使用QuantiTect Multiplex PCR Kit对每个DNA片段特异性的66 bp靶点进行双重real-time PCR,定量DNA的产量。|使用QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit从5 ml血浆中纯化游离DNA,或者使用QIAamp MinElute Virus Vacuum Kit从200 μl血浆中纯化游离DNA,洗脱体积为100 μl。使用QuantTect Multiplex PCR Kit对18S rRNA基因内的66 bp扩增片段和500 bp扩增片段进行双重real-time PCR,定量DNA的产量。500 bp扩增片段和66 bp扩增片段的扩增差异显示DNA被片段化,从而导致完整的500 bp目标序列的丰度低于较短的66 bp靶点。(请注意差异大于五倍样本输入体积差异)。|使用QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit从4 ml采集血浆中纯化游离DNA,洗脱体积为50 μl。将标准试剂盒实验方案与适用于miRNA的专用实验方案进行比较。使用TaqMan microRNA Assay(Applied Biosystems)定量miRNA 30b的产量,使用Human miScript Assay(QIAGEN)定量miRNA 16的产量。采用miRNA实验方案获得的CT值较低,表示miRNA的产量更高。|使用QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit从4 ml血浆中纯化加入的甲基化DNA和非目标poly-A RNA,洗脱体积为45 μl。使用EpiTect Bisulfite Kit(QIAGEN)进行亚硫酸氢盐转化,使用real-time MSP分析和QuantiTect Multiplex PCR Kit组分在ABI PRISM 7900HT Sequence Detection System上进行甲基化特异性PCR(MSP)。对两个全甲基化位点数据进行分析。|
性能

分析血液中肿瘤特异性的胞外DNA片段和mRNA可对普通血液样品进行特异性地肿瘤类型检测。这些存在于血清或血浆中的游离核酸通常都是<1000 bp(DNA)或<1000 nt(RNA)的片段。此外,小至21 nt的miRNAs可作为某些癌症和疾病状态的生物标记。

QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit可从人类血浆、血清和其他无细胞体液中高效纯化游离核酸。纯化效率高、重现性好、产量高(参见"Reproducible recovery of circulating DNA")。应用延长的上样管和真空装置QIAvac 24 Plus可将样品处理量提至5 ml,洗脱体积可在20–150 μl之间灵活变化,可浓缩低浓度核酸。 该试剂盒采用先进的技术,硅胶膜选择性的结合目标核酸,提高片段化核酸的回收率(参见"Improved recovery of fragmented DNA")。

使用RNase-Free DNase Set进行DNA柱上消化,纯化获得不含DNA的游离RNA 。特别设计的流程确保高效纯化诸如miRNA等小RNA(参见"Efficient purification of circulating miRNA")。使用QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit高效纯化甲基化DNA,经纯化的DNA维持其甲基化状态,可进行亚硫酸氢盐转化实验,进行甲基化状态分析(参见"Efficient recovery of methylated DNA")。

经纯化和浓缩的游离DNA和RNA不含蛋白、核酸酶和其他杂质,可即用于各种下游应用,包括:

PCR 和定量real-time PCR以及RT-PCR
用于基于血液样品的癌症生物标记的研究、验证和检测
病毒核酸检测 
原理

QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit简化了从血浆或血清中纯化游离DNA和RNA的过程。无需苯酚-氯仿抽提。核酸特异性结合到QIAamp Mini离心柱上,污染物流走。PCR抑制物,如:二价阳离子和蛋白,可通过三步有效的洗涤步骤被完全去除,结合在离心柱上的纯核酸可用水或试剂盒中的缓冲液洗脱。使用QIAamp Circulating Nucleic Acid技术从人类血浆、血清或尿液中获得游离的DNA和RNA。

QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit有可选择性结合的硅胶膜和20–150 μl灵活的洗脱体积。使用RNase-Free DNase Set进行DNA柱上消化,可纯化游离RNA。

操作流程

QIAamp Circulating Nucleic Acid的流程包括4步(裂解、结合、洗涤和洗脱),使用QIAamp Mini离心柱在真空装置上处理。简单的操作适用于同时处理多个样品,可在2小时内处理24个样品。QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit有待使用者验证是否能适用于所有的病毒种类的RNA和DNA纯化。

应用

QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit可从含低浓度DNA和RNA碎片的原始样本(人血浆中常规游离DNA的浓度为1–100 ng/ml)中纯化和浓缩游离的DNA、RNA、miRNA,包括病毒核酸。起始样本体积至多5 ml。

QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit可从以下样本类型中纯化和浓缩核酸:

人类血浆
血清
尿液
特点
参数
应用 PCR, real-time PCR
符合CE/FDA/IVD -
洗脱体积 20–150 µl
规格 QIAamp Mini Columns
主要样本类型 Serum, plasma
处理 Manual (vacuum)
纯化总RNA、miRNA、poly A+ mRNA、DNA或蛋白 Free-circulating DNA, RNA and miRNA, viral DNA, viral RNA
样本量 1-5 ml
技术 Silica technology
每次运行或制备时间 <2 hour for 24 preps
产量 Varies, due to donor-to-donor variations and disease status

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试剂盒操作手册
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For concentration and purification of free-circulating DNA and RNA from human plasma or serum
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学术海报
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参考文献
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Reproducible recovery of circulating DNA
回收游离DNA。
在24个血浆样本中加入同等量的DNA片段(200 bp和1000 bp)。使用QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit从5 ml血浆中纯化DNA,洗脱体积为80 μl。使用QuantiTect Multiplex PCR Kit对每个DNA片段特异性的66 bp靶点进行双重real-time PCR,定量DNA的产量。
Improved recovery of fragmented DNA
回收片段化DNA,表现更出色。
使用QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit从5 ml血浆中纯化游离DNA,或者使用QIAamp MinElute Virus Vacuum Kit从200 μl血浆中纯化游离DNA,洗脱体积为100 μl。使用QuantTect Multiplex PCR Kit对18S rRNA基因内的66 bp扩增片段和500 bp扩增片段进行双重real-time PCR,定量DNA的产量。500 bp扩增片段和66 bp扩增片段的扩增差异显示DNA被片段化,从而导致完整的500 bp目标序列的丰度低于较短的66 bp靶点。(请注意差异大于五倍样本输入体积差异)。
Specialized protocol for efficient purification of circulating miRNA
高效纯化游离miRNA。
使用QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit从4 ml采集血浆中纯化游离DNA,洗脱体积为50 μl。将标准试剂盒实验方案与适用于miRNA的专用实验方案进行比较。使用TaqMan microRNA Assay(Applied Biosystems)定量miRNA 30b的产量,使用Human miScript Assay(QIAGEN)定量miRNA 16的产量。采用miRNA实验方案获得的CT值较低,表示miRNA的产量更高。
Efficient recovery of methylated DNA
高效回收甲基化DNA。
使用QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit从4 ml血浆中纯化加入的甲基化DNA和非目标poly-A RNA,洗脱体积为45 μl。使用EpiTect Bisulfite Kit(QIAGEN)进行亚硫酸氢盐转化,使用real-time MSP分析和QuantiTect Multiplex PCR Kit组分在ABI PRISM 7900HT Sequence Detection System上进行甲基化特异性PCR(MSP)。对两个全甲基化位点数据进行分析。