QuantiTect Reverse Transcription Kit

For fast cDNA synthesis enabling sensitive real-time two-step RT-PCR for gene expression analysis

  • cDNA synthesis and gDNA removal in only 20 minutes
  • High cDNA yields even from low-abundance transcripts
  • cDNA synthesis from 5' and 3' regions of transcripts
  • No need to design RNA-specific primers or probes
The unique QuantiTect Reverse Transcription Kit provides a fast and convenient procedure for cDNA synthesis with integrated genomic DNA removal. Genomic DNA contamination in RNA samples is effectively eliminated by gDNA Wipeout Buffer. All components that are required for fast and efficient reverse transcription are provided with the QuantiTect Reverse Transcription Kit, including Quantiscript Reverse Transcriptase, Quantiscript RT Buffer, and a unique RT Primer Mix. The synthesized cDNA is optimized for use in real-time PCR, allowing reliable quantification of targets from all regions of mRNA transcripts.
製品名 Product no. Cat. no. List price:
 
 
詳細表示
    varies
Can't order online?
To place an order via phone, email or for requesting a quote, please provide the product’s name, number and catalog number.
製品名 Cat. no. List price:
QuantiTect Rev. Transcription Kit (50)
For 50 x 20 µl reactions: 100 µl 7x gDNA Wipeout Buffer, 50 µl Quantiscript Reverse Transcriptase, 200 µl 5x Quantiscript RT Buffer, 50 µl RT Primer Mix, 1.9 ml RNase-Free Water
205311
¥40,000
QuantiTect Rev. Transcription Kit (200)
For 200 x 20 µl reactions: 4 x 100 µl 7x gDNA Wipeout Buffer, 4 x 50 µl Quantiscript Reverse Transcriptase, 4 x 200 µl 5x Quantiscript RT Buffer, 4 x 50 µl RT Primer Mix, 4 x 1.9 ml RNase-Free Water
205313
¥140,000
QuantiTect Rev. Transcription Kit (400)
For 400 x 20 µl reactions: 800 µl 7x gDNA Wipeout Buffer, 400 µl Quantiscript Reverse Transcriptase, 1.6 ml 5x Quantiscript RT Buffer, 400 µl RT Primer Mix, 8 x 1.9 ml RNase-Free Water
205314
¥253,000

QuantiTect Reverse Transcription Kit  は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。


  • Main Image Navi
迅速で簡便なcDNA合成|効果的なゲノムDNA除去による正確なリアルタイムRT-PCR|12.5 kbの転写物の5'領域における標的を高感度で検出|より高い感度の2ステップリアルタイムRT-PCR|
QuantiTect Reverse Transcription Kitを用いれば、ゲノムDNA除去とcDNA合成はわずか20分で完了する。両反応とも同一のインキュベーション温度で行なうことができ、マスターミックスによるセットアップができるため、操作は迅速かつ簡便である。一方、Supplier Iのキットを用いた精製法ではピペッティングステップが多いためにより多くのマニュアルでの作業が必要となり、インキュベーション温度も頻繁に変更しなければならず、時間と手間がより多くかかる。|逆転写酵素あり(+RT)あるいはなし(–RT)のβ-actinの2ステップリアルタイムRT-PCR解析。cDNAは100 ngのトータルRNAから合成し、QuantiTect SYBR® Green PCR Kitを用い、LightCycler 2.0上でリアルタイムPCRをduplicateで行なった。β-actinに特異的なプライマーはmRNAおよびゲノムDNA配列をいずれも検出。テンプレートなしのコントロール反応も行なった(緑)。[A] QuantiTect Reverse Transcription Kitを用いてRT反応を行なった。–RTの赤色の線が上昇しないのは残留ゲノムDNAが効率的に除去されたことを示唆している。[B] Supplier Iのキット(Enzyme SIII)を用いてRT反応を行なった。紫色の–RTの線は、残留ゲノムDNAの増幅があることを示唆している。|マウスdystrophin遺伝子の5'領域に局在する標的(poly-A部分から約12.5 kbアップストリーム)の2ステップリアルタイムRT-PCR。マウス精巣から精製したトータルRNAは、QuantiTect Reverse Transcription KitおよびSupplier IとSupplier Rの逆転写酵素により逆転写した。同一量のtriplicate逆転写反応は、LightCyclerシステム上でリアルタイムPCRにより解析した。エラーバーは各triplicateの標準偏差を示している。他の2つのキットと比較し、QuantiTect Reverse Transcription Kitははるかに多量のcDNAを作成し(低いCT値で示される)、リアルタイムRT-PCRの再現性が高くなった(エラーバーが小さいことで示される)。RFU:相対的蛍光単位

(データ提供:Dr. Andrej-Nikolai Spiess, Department of Molecular Andrology, University Hospital Hamburg, Germany)。|[A] TGFB2(低い発現量)と[B] IL8(より高い発現量)の2ステップリアルタイムRT-PCR解析。PAXgene Blood RNAシステムを用いてヒト全血からトータルRNAを精製した。QuantiTect Reverse Transcription Kit、Supplier AIIのキット、またはSupplier Iのキットを用いて 1 µg RNA からcDNAを合成した。リアルタイムPCRは、QuantiTect Probe PCR KitおよびTGFB2またはIL8用QuantiTect Gene Expression Assaysを用い、ABI PRISM 7900において、duplicateで行なった。QuantiTect Reverse Transcription Kitを用いた場合にTGFB2のCT値が最低値であったことは、発現量の低い遺伝子でさえも効率的に逆転写し、リアルタイムPCRで高感度で検出できることを証明している。|

パフォーマンス

Using the QuantiTect Reverse Transcription Kit, contaminating genomic DNA in RNA samples is effectively and rapidly removed with the unique gDNA Wipeout Buffer (see figure Effective genomic DNA removal for accurate real-time RT-PCR). Elimination of genomic DNA is crucial for accurate gene expression results, and design of RNA-specific primers or probes is not always possible. With gDNA Wipeout Buffer, time is saved and costs are reduced, since a separate DNase digestion is unnecessary, either during or after purification of RNA samples. 

The high RNA affinity of Quantiscript Reverse Transcriptase, in combination with Quantiscript RT Buffer, enables high yields of cDNA from any RNA template (see table “Higher cDNA yields for less abundant transcripts”). Even difficult templates, such as those with high GC-content or complex secondary structure, are successfully reverse transcribed.

Higher cDNA yields for less abundant transcripts
CT values for IL12A
(low expression)
CT values for IL1RN
(higher expression)
Input RNA (ng) QIAGEN Supplier AII QIAGEN Supplier AII
1000 30.9 32.0 23.1 24.9
100 34.2 35.4 26.3 26.6
10 37.8 46.8 29.7 30.3
1 N.D. N.D. 32.4 34.5
Real-time, two-step RT-PCR analysis of IL12A and IL1RN using different amounts of input RNA. Total RNA was reverse transcribed using the QuantiTect Reverse Transcription Kit or a kit from Supplier AII. The cDNA synthesized was analyzed on the ABI PRISM 7900 using the QuantiTect Probe PCR Kit and QuantiTect Gene Expression Assays for IL12A or IL1RN. CT values were lower with the QIAGEN kit, especially for the medium-abundance IL12A gene (bold), indicating higher cDNA yields. N.D.: Not detected.

The RT Primer Mix contains a specially optimized mix of oligo-dT and random primers that enable cDNA synthesis from all regions of RNA transcripts, even from 5' regions (see figure Sensitive detection of a target at the 5' region of a 12.5 kb transcript). In contrast to kits from other suppliers, the QuantiTect Reverse Transcription Kit provides high yields of cDNA template for real-time PCR analysis regardless of where the amplified target region is located on the transcript, and provides greater sensitivity in the detection of low-abundance genes (see figure "Higher sensitivity in real-time, two-step RT-PCR"). The QuantiTect Reverse Transcription Kit also enables greater reproducibility in real-time RT-PCR.

原理

QuantiTect Reverse Transcriptase is a novel blend of Omniscript and Sensiscript Reverse Transcriptases, which has a high affinity for RNA and is capable of cDNA synthesis from a wide range of RNA amounts (10 pg to 1 µg). In contrast to kits from other suppliers, the QuantiTect Reverse Transcription Kit provides high yields of cDNA template for real-time PCR analysis regardless of where the amplified target region is located on the transcript. Even difficult templates, such as those with high GC-content or complex secondary structure, are successfully reverse transcribed. QuantiTect RT Buffer has also been optimized to be compatible with real-time PCR buffer.

To obtain accurate results in real-time RT-PCR gene expression assays, it is important that only cDNA is amplified and detected. Interference by genomic DNA can be avoided by designing primers or probes that span an exon/exon boundary. However, in cases where this is not possible (e.g., the cDNA is from a single-exon gene), it is essential that the starting RNA sample is free of genomic DNA. Using the QuantiTect Reverse Transcription Kit, contaminating genomic DNA in RNA samples is effectively and rapidly removed with unique gDNA Wipeout Buffer. Time is saved and costs are reduced, since a separate DNase digestion not required, either during or after purification of RNA samples. Also, design of RNA-specific primers or probes is unnecessary. 

Components of the QuantiTect Reverse Transcriptase Kit
ComponentBenefits
gDNA Wipeout Buffer Detection of RNA only in real-time RT-PCR
Quantiscript Reverse Transcriptase Use of a wide range of RNA amounts (10 pg to 1 µg RNA)
High sensitivity
Quantiscript RT Buffer Read-through of difficult templates
RT Primer Mix cDNA synthesis from all regions of transcripts, even from 5' regions
操作手順

Genomic DNA removal and cDNA synthesis take only 20 minutes with the QuantiTect Reverse Transcription Kit (see flowchart "Fast and convenient cDNA synthesis"). The procedure is fast and convenient, since both reactions are run using the same incubation temperature and are set up using master mixes.

The QuantiTect Reverse Transcription Kit includes everything you need for fast cDNA synthesis. Purified RNA is briefly incubated in gDNA Wipeout Buffer to effectively remove contaminating genomic DNA. In contrast to other methods, the RNA sample is then used directly in reverse transcription, using a master mix prepared from Quantiscript Reverse Transcriptase, Quantiscript RT Buffer, and RT Primer Mix. With Quantiscript Reverse Transcriptase, RNA can be transcribed at low temperatures, even through complex 2° structure, ensuring that the RNA will stay intact — the entire reaction takes place at 42°C and is then inactivated at 95°C. Additional steps for RNA denaturation, primer annealing, and RNase H digestion are not necessary.

アプリケーション

The QuantiTect Reverse Transcription Kit allows highly efficient and sensitive real-time RT-PCR for all types of starting material, including laser-microdissected samples and tissue biopsies.

Feature
Specifications
Applications Quantification of (even low-abundance) transcripts
Enzyme activity Reverse transcription
Mastermix No
Reaction type Two-step, cDNA production, genomic DNA digestion
Real-time or endpoint Real time
Sample/target type RNA template
Single or multiplex Single

You are not authorized to download the resource

キットハンドブック
2
For cDNA synthesis with integrated removal of genomic DNA contamination For use in real-time two-step RT-PCR
詳細を表示
ゲノムDNA除去を組み込んだcDNA合成;
2ステップ・リアルタイムRT-PCR用
詳細を表示
クイックスタートプロトコール
1
画像
Fast and convenient cDNA synthesis.
迅速で簡便なcDNA合成

QuantiTect Reverse Transcription Kitを用いれば、ゲノムDNA除去とcDNA合成はわずか20分で完了する。両反応とも同一のインキュベーション温度で行なうことができ、マスターミックスによるセットアップができるため、操作は迅速かつ簡便である。一方、Supplier Iのキットを用いた精製法ではピペッティングステップが多いためにより多くのマニュアルでの作業が必要となり、インキュベーション温度も頻繁に変更しなければならず、時間と手間がより多くかかる。

Effective genomic DNA removal for accurate real-time RT-PCR.
効果的なゲノムDNA除去による正確なリアルタイムRT-PCR
逆転写酵素あり(+RT)あるいはなし(–RT)のβ-actinの2ステップリアルタイムRT-PCR解析。cDNAは100 ngのトータルRNAから合成し、QuantiTect SYBR® Green PCR Kitを用い、LightCycler 2.0上でリアルタイムPCRをduplicateで行なった。β-actinに特異的なプライマーはmRNAおよびゲノムDNA配列をいずれも検出。テンプレートなしのコントロール反応も行なった(緑)。[A] QuantiTect Reverse Transcription Kitを用いてRT反応を行なった。–RTの赤色の線が上昇しないのは残留ゲノムDNAが効率的に除去されたことを示唆している。[B] Supplier Iのキット(Enzyme SIII)を用いてRT反応を行なった。紫色の–RTの線は、残留ゲノムDNAの増幅があることを示唆している。
Senstitive detection of a target at the 5' region of a 12.5 kb transcript.
12.5 kbの転写物の5'領域における標的を高感度で検出

マウスdystrophin遺伝子の5'領域に局在する標的(poly-A部分から約12.5 kbアップストリーム)の2ステップリアルタイムRT-PCR。マウス精巣から精製したトータルRNAは、QuantiTect Reverse Transcription KitおよびSupplier IとSupplier Rの逆転写酵素により逆転写した。同一量のtriplicate逆転写反応は、LightCyclerシステム上でリアルタイムPCRにより解析した。エラーバーは各triplicateの標準偏差を示している。他の2つのキットと比較し、QuantiTect Reverse Transcription Kitははるかに多量のcDNAを作成し(低いCT値で示される)、リアルタイムRT-PCRの再現性が高くなった(エラーバーが小さいことで示される)。RFU:相対的蛍光単位

(データ提供:Dr. Andrej-Nikolai Spiess, Department of Molecular Andrology, University Hospital Hamburg, Germany)。

Higher sensitivity in real-time two-step RT-PCR.
より高い感度の2ステップリアルタイムRT-PCR
[A] TGFB2(低い発現量)と[B] IL8(より高い発現量)の2ステップリアルタイムRT-PCR解析。PAXgene Blood RNAシステムを用いてヒト全血からトータルRNAを精製した。QuantiTect Reverse Transcription Kit、Supplier AIIのキット、またはSupplier Iのキットを用いて 1 µg RNA からcDNAを合成した。リアルタイムPCRは、QuantiTect Probe PCR KitおよびTGFB2またはIL8用QuantiTect Gene Expression Assaysを用い、ABI PRISM 7900において、duplicateで行なった。QuantiTect Reverse Transcription Kitを用いた場合にTGFB2のCT値が最低値であったことは、発現量の低い遺伝子でさえも効率的に逆転写し、リアルタイムPCRで高感度で検出できることを証明している。