For ultrafast, real-time PCR and two-step RT-PCR using sequence-specific probes
- Sensitive detection of even low copy numbers
- Accurate detection of a wide range of template amounts
- Optimized for ultrafast, reliable results on Rotor-Gene cyclers
- Specially formulated, ready-to-use master mix for fast cycling
The Rotor-Gene Probe PCR Kit is designed for use with the Rotor-Gene Q and other Rotor-Gene cyclers, providing ultrafast, highly sensitive quantification of gDNA and cDNA targets with real-time PCR and two-step RT-PCR using sequence-specific probes. Outstanding performance is achieved through the combination of a specially optimized master mix and the unique Rotor-Gene cycler. For convenience, the master mix can be stored at 2–8°C.
ja-JP
|
製品名
|
Cat. no.
|
List price:
|
|
|
Rotor-Gene Probe PCR Kit (400)
For 400 x 25 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x Rotor-Gene Probe PCR Master Mix, 2 x 2 ml RNase-Free Water
|
204374
|
|
|
Rotor-Gene Probe PCR Kit は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。
See trademarks.
高感度で再現性のある検出|精度の高いリアルタイムPCR|1個の細胞まで確実に検出|幅広いダイナミックレンジ|プライマーの特異的なアニーリング|プライマーの高速なアニーリング|
ヒトゲノムDNAの2倍段階希釈液（30 ng ～ 3.75 ng）と、IL1R2 (interleukin 1 receptor, type II)用にデザインしたTaqManアッセイを用いてリアルタイムPCRを行なった。[A] Rotor-Gene Q とRotor-Gene Multiplex PCR Kit、あるいは [B] AII社の装置とキットを用いて反応を行なった(1希釈液あたり5 replicates)。Rotor-Geneシステムでは低いCT値が得られ、replicates内においてばらつきがなく 、異なるテンプレート希釈液の差異をより明確に判別できた。|Rotor-Gene Q とRotor-Gene Probe PCR Kitを用いてヒトゲノムDNAのリアルタイムPCR解析を行なった。[A] DNAの2倍段階希釈液 (30 ng [5000 copies] ～ 0.06 ng [20 copies]) を、IL1R2 (interleukin 1 receptor, type II)用にデザインしたTaqMan アッセイを用いてテンプレート希釈液あたり5 replicatesで解析した。各希釈系列間におけるCT値の平均サイクル差は1.07 サイクルであった。[B] IL1R2用にデザインしたTaqManアッセイを用いた5 ng DNAの解析。100 replicatesの標準偏差は0.21であった。[C]ACTB (actin, beta)用にデザインしたTaqManアッセイを用いた20 ng DNAの解析100 replicatesの標準偏差は0.29であった。|ACTB (actin, beta)用にデザインしたTaqMan アッセイを用いて、ヒトゲノムDNAの4倍段階希釈液（1～16,666個の細胞に相当）のリアルタイムPCRを行なった。反応はRotor-Gene QとRotor-Gene Probe PCR Kitを用いてtriplicateで行なった。Rotor-Geneシステムでは全希釈範囲にわたり信頼できる検出を実現し、各triplicatesで再現性の高い結果が得られた。|PPIA (cyclophilin A)用にデザインしたTaqManアッセイを用いて、プラスミドDNAの10倍段階希釈液(109 ～ 10コピー）のリアルタイムPCRを行なった。反応はRotor-Gene QとRotor-Gene Probe PCR Kitを用いてtriplicateで行なった。Rotor-Geneシステムでは全希釈範囲にわたり信頼できる検出を実現し、各triplicatesで再現性の高いCT値が得られた。|Rotor-Gene Q PCRバッファー中の陽イオンによりプライマーのアニーリングにおける特異性が増加。K+は二本鎖DNAのリン酸基に結合し、プライマーのアニーリングを安定化する。NH4+は、ミスマッチな塩基対間の水素結合を不安定化する。|[A] Rotor-Gene Probe PCR Master Mix 中のQ-Bondは、短い一本鎖DNAへのDNAポリメラーゼの結合アフィニティーを大幅に増大させるため、プライマーのアニーリング時間を数秒間に短縮できる。さらにDNAの融解をサポートするユニークなバッファー組成が、変性およびエクステンション時間を短縮する。[B] Q-Bondが存在しないと、プライマーとポリメラーゼが段階的にテンプレートに結合するのでプライマーのアニーリングに時間がかかる。|
パフォーマンス
The Rotor-Gene Probe PCR Kit is well suited for use in quantitative PCR analysis (see figures "Highly sensitive and reproducible detection", "High precision in real-time PCR"), and provides reliable detection over a wide range of templates (see table and figures "High precision in real-time PCR", "Reliable detection down to 1 cell", and "Wide dynamic range").
| 1,000,000,000 |
5.11 |
3.07 |
| 100,000,000 |
8.18 |
3.39 |
| 10,000,000 |
11.57 |
3.04 |
| 1,000,000 |
14.61 |
3.68 |
| 100,000 |
18.29 |
3.28 |
| 10,000 |
21.57 |
3.68 |
| 1,000 |
25.25 |
3.06 |
| 100 |
28.31 |
3.43 |
| 10 |
31.74 |
– |
| Efficiency |
0.99 |
|
| Linearity |
1 |
|
原理
The Rotor-Gene Probe PCR Kit enables reliable real-time two-step RT-PCR quantification on the Rotor-Gene Q without the need for optimization of reaction and cycling conditions. The kit is designed for use with hydrolysis probes (e.g., TaqMan® probes). Highly specific amplification is assured through a balanced combination of K+ and NH4+ ions, which promote specific primer annealing, enabling high PCR specificity and sensitivity (see figure "Specific primer annealing"). Fast cycling without compromising performance is achieved using Q-Bond, a novel PCR additive that enables cycler run times of as low as 45 minutes (see figure "Fast primer annealing").
| HotStarTaq Plus DNA Polymerase |
5 min activation at 95ºC |
Set up of qPCR reactions at room temperature |
| Rotor-Gene Probe PCR Buffer |
Balanced combination of NH4+ and K+ ions |
Specific primer annealing ensures reliable qPCR results |
| Unique Q-Bond additive |
Faster PCR run times enable faster results and more reactions per day |
操作手順
The ready-to-use Rotor-Gene Probe PCR Master Mix eliminates the need for optimization of reaction and cycling conditions. Just add template DNA, primers, and probe to the master mix and program the cycler. Instructions are provided in the detailed handbook supplied with the kit.
Hydrolysis probes (e.g., TaqMan® probes) can be used in combination with the Rotor-Gene Probe PCR Kit on the Rotor-Gene Q for fast and sensitive quantification — simply add the primer-probe mix and template to the master mix.
For optimal results in real-time two-step RT-PCR, we recommend synthesizing cDNA using the QuantiTect Reverse Transcription Kit. The kit provides fast cDNA synthesis in just 20 minutes with integrated removal of genomic DNA contamination.
アプリケーション
The Rotor-Gene Probe PCR Kit is for fast, real-time PCR and two-step RT-PCR of gDNA or cDNA targets using sequence-specific probes on the Rotor-Gene Q. It is also compatible with Rotor-Gene 3000 and the Rotor-Gene 6000 cyclers.
For ultrafast, one-step qRT-PCR gene expression analysis of RNA targets using sequence-specific probes on Rotor-Gene cyclers, use the Rotor-Gene Probe RT-PCR Kit.
|
Feature
|
Specifications
|
|
Applications
|
Real-time quantification of genomic DNA or cDNA targets
|
|
Description
|
For ultrafast quantitative real-time PCR and two-step RT-PCR using sequence-specific probes
|
|
Reaction type
|
Real-time PCR and two-step RT-PCR
|
|
Real-time or endpoint
|
Real-time
|
|
Sample/target type
|
DNA, cDNA
|
|
Single or multiplex
|
Single
|
|
SYBR Green I or sequence-specific probes
|
Sequence-specific probes
|
|
Thermal cycler
|
Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000
|
|
With or without ROX
|
Without ROX dye
|
|
|
|
|
Now with even more applications!
|
詳細を表示
|
|
|
優れた温度均一性を実現するリアルタイムPCR 装置
|
詳細を表示
|
|
|
|
|
FAQ ID -1430
|
表示
|
|
|
FAQ ID -2116
|
表示
|
|
|
FAQ ID -2117
|
表示
|
|
|
FAQ ID -2118
|
表示
|
|
|
FAQ ID -2119
|
表示
|
|
|
FAQ ID -2121
|
表示
|
|
|
FAQ ID -2125
|
表示
|
|
|
FAQ ID -2126
|
表示
|
|
|
FAQ ID -2371
|
表示
|
|
|
FAQ ID -2670
|
表示
|
|
|
FAQ ID -2682
|
表示
|
|
|
|
|
For fast real-time PCR, two-step RT-PCR, and one-step RT-PCR using sequence-specific probes on Rotor-gene cyclers.
|
詳細を表示
|
|
|
Rotor-Gene Probe PCR Kit
Rotor-Gene Probe RT-PCR Kit
配列特異的なプローブとRotor-Gene サイクラーを用いた迅速なリアルタイムPCR、2ステップRT-PCR、1ステップRT-PCR
|
詳細を表示
|
|
|
|
|
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
|
表示
|
画像
高感度で再現性のある検出
ヒトゲノムDNAの2倍段階希釈液（30 ng ～ 3.75 ng）と、IL1R2 (interleukin 1 receptor, type II)用にデザインしたTaqManアッセイを用いてリアルタイムPCRを行なった。[A] Rotor-Gene Q とRotor-Gene Multiplex PCR Kit、あるいは [B] AII社の装置とキットを用いて反応を行なった(1希釈液あたり5 replicates)。Rotor-Geneシステムでは低いCT値が得られ、replicates内においてばらつきがなく 、異なるテンプレート希釈液の差異をより明確に判別できた。
精度の高いリアルタイムPCR
Rotor-Gene Q とRotor-Gene Probe PCR Kitを用いてヒトゲノムDNAのリアルタイムPCR解析を行なった。[A] DNAの2倍段階希釈液 (30 ng [5000 copies] ～ 0.06 ng [20 copies]) を、IL1R2 (interleukin 1 receptor, type II)用にデザインしたTaqMan アッセイを用いてテンプレート希釈液あたり5 replicatesで解析した。各希釈系列間におけるCT値の平均サイクル差は1.07 サイクルであった。[B] IL1R2用にデザインしたTaqManアッセイを用いた5 ng DNAの解析。100 replicatesの標準偏差は0.21であった。[C]ACTB (actin, beta)用にデザインしたTaqManアッセイを用いた20 ng DNAの解析100 replicatesの標準偏差は0.29であった。
1個の細胞まで確実に検出
ACTB (actin, beta)用にデザインしたTaqMan アッセイを用いて、ヒトゲノムDNAの4倍段階希釈液（1～16,666個の細胞に相当）のリアルタイムPCRを行なった。反応はRotor-Gene QとRotor-Gene Probe PCR Kitを用いてtriplicateで行なった。Rotor-Geneシステムでは全希釈範囲にわたり信頼できる検出を実現し、各triplicatesで再現性の高い結果が得られた。
幅広いダイナミックレンジ
PPIA (cyclophilin A)用にデザインしたTaqManアッセイを用いて、プラスミドDNAの10倍段階希釈液(109 ～ 10コピー）のリアルタイムPCRを行なった。反応はRotor-Gene QとRotor-Gene Probe PCR Kitを用いてtriplicateで行なった。Rotor-Geneシステムでは全希釈範囲にわたり信頼できる検出を実現し、各triplicatesで再現性の高いCT値が得られた。
プライマーの特異的なアニーリング
Rotor-Gene Q PCRバッファー中の陽イオンによりプライマーのアニーリングにおける特異性が増加。K+は二本鎖DNAのリン酸基に結合し、プライマーのアニーリングを安定化する。NH4+は、ミスマッチな塩基対間の水素結合を不安定化する。
プライマーの高速なアニーリング
[A] Rotor-Gene Probe PCR Master Mix 中のQ-Bondは、短い一本鎖DNAへのDNAポリメラーゼの結合アフィニティーを大幅に増大させるため、プライマーのアニーリング時間を数秒間に短縮できる。さらにDNAの融解をサポートするユニークなバッファー組成が、変性およびエクステンション時間を短縮する。[B] Q-Bondが存在しないと、プライマーとポリメラーゼが段階的にテンプレートに結合するのでプライマーのアニーリングに時間がかかる。
|