EpiTect Control DNA and Control DNA Set

For control experiments during methylation analysis
  • Convenient, ready-to-use, quality-controlled DNA
  • Bisulfite-converted DNA for control experiments
  • Suitable for all methylation analyses
EpiTect Control DNAs are ready-to-use, completely methylated or completely unmethylated bisulfite converted DNAs, and untreated, unmethylated genomic DNA, for standardized and reliable control reactions for methylation analysis. The methylated, bisulfite converted DNA as well as unmethylated, bisulfite converted and unconverted DNA are stored in EB Buffer (10 mM Tris Cl) in a ready-to-use solution.

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EpiTect Control DNA, methylated (100)
Methylated and bisulfite converted human control DNA for 100 control PCRs
59655
$340.00
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EpiTect Control DNA, unmethlyated (100)
Unmethylated and bisulfite converted human control DNA for 100 control PCRs
59665
$340.00
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EpiTect PCR Control DNA Set (100)
Human control DNA set (containing both bisulfite converted methylated and unmethylated DNA and unconverted unmethylated DNA) for 100 control PCRs
59695
$677.00
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EpiTect Control DNA (1000)
Unmethylated human control DNA for 1000 control PCRs
59568
$340.00
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EpiTect Control DNA and Control DNA Set は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。


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リアルタイムPCRスタンダード|HRM定量スタンダード|EpiTect Control DNAのパイログラム|メチル解析のためのPCR でEpiTect Control DNA を使用|Bisulfite変換および全Bisulfitome増幅(WBA)DNAのEpiTYPER MALDI-TOF 解析|エピジェネティクスにおける標準化されたワークフロー|
メチル化DNAの割合が100%、90%、50%、10%、0%となるように、EpiTect Methylated Control DNAとEpiTect Unmethylated Control DNA(両方とも前もってBisulfite変換済み)を混和した。ヒトPITX2遺伝子用のEpiTect MethyLight Assaysを10 ngの各DNAを用いてtriplicateで行なった。結果は、EpiTect Control DNAがメチル化のスタンダードとして、未知DNAサンプルの定量に使用できることを示している。|APC遺伝子のプロモーター領域にあるCpGアイランドを増幅し、メチル化の程度をEpiTect HRM PCR Kit を用いてHRMメチル化解析により測定した。EpiTect Control DNA Setのメチル化DNAまたは非メチル化DMAは、様々な比率で混合されており、解析のテンプレートとして使用できます。
|MGMTプロモーター領域にある16ヵ所のCpG配列について、完全なメチル化(平均メチル化率 95%以上)および非メチル化(平均メチル化率0.3%)を調べた。DNA修復に関与しているp53関連遺伝子の一つであるMGMT(6-O methylguanine-DNA methyltransferase)のPCR産物をパイロシークエンス法で解析した。 パイロシークエンシングはPyroMark IDで行なった(データ提供;Uwe Gerstenmaier, varionostic GmbH, Ulm)。 |メチル化特異的なプライマー(M-Primer)は、Bisulfite変換した完全メチル化コントロールDNA のみにアニーリングする。非メチル化DNA に特異的なプライマー(U-Primer)は、全くメチル化されていないDNA をBisulfite 変換したコントロールDNAのみにアニーリングする。全くメチル化のないゲノムDNA にはM-Primer もU-Primer もアニーリングしない。|メチル化DNAサンプル(UMDNA 1)、非メチル化DNAサンプル(VIAL A 1)、および両者の混和物(HTXA 1)をMP6遺伝子座のメチル化状態を調べるために用いた。 この結果を、EpiTect Whole Bisulfitome Kitを用いて全Bisulfitome増幅(WBAUMDNA1, WBAHTXA 1, WBAVIAL A 1)後に得られた結果と比較した。増幅前のメチル化パターンと増幅したDNAのメチル化パターンは非常によく似ており、増幅前の状態を保っていることを示す(データ提供:Hany EzzeldinMayo Clinic, Rochester, USA)。||
パフォーマンス
EpiTect Control DNAs are highly suited for use as quantification standards for probe-based real-time PCR methylation analysis (see figure "Real-time PCR standards") and high-resolution melting (HRM) methylation analysis (see figure "HRM quantification standards").
原理
The EpiTect Control DNA Set contains all control DNAs needed for standardized and reliable methylation control reactions in a ready-to-use kit format . In methylation-specific PCR, for example, control reactions must be carried out to ensure that PCR probes and primers bind specifically to methylated or unmethylated DNA (see figure Use of EpiTect Control DNA in PCR for methylation analysis). These reactions require various concentrations of completely bisulfite converted control DNA that is fully methylated or fully unmethylated (see figures EpiTect Control DNA Pyrogram and "EpiTYPER MALDI-TOF analysis of WBA DNA"). Additionally, mixtures of these control DNAs can serve as quantification standards when determining degree of methylation in HRM and probe-based methylation experiments.
操作手順
Standardized workflows in epigenetics

Accessing epigenetic information is of prime importance for many areas of biological and medical research — particularly oncology, but also stem cell research and developmental biology. However, the analysis of changes in DNA methylation is challenging, due to the lack of standardized methods for providing reproducible data particularly from limited sample material. With its newly introduced EpiTect solutions, QIAGEN makes available standardized, pre-analytical and analytical solutions from DNA sample collection, stabilization and purification, to bisulfite conversion and real-time or end-point PCR methylation analysis or sequencing (see figure "Standardized workflows in epigenetics").

アプリケーション

EpiTect Control DNAs are suitable for use in control reactions for all types of methylation analyses, including:

Evaluating primer specificity for MSP
Quantification standard for HRM and MethyLight PCR
Evaluating primer and probe specificity for MethyLight PCR
Checking efficiency of bisulfite conversion reactions
Feature
Specifications
Applications End point Methylation Specific PCR (MSP), real-time methylation specific PCR
Concentration 10 ng/µl (1 µg in total) excepted the unmethylated control DNA: 50 ng/µl (10 µg in total)
Number of reactions for 1000 control PCRs

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画像
Standards for quantitative, real-time PCR analysis
リアルタイムPCRスタンダード

メチル化DNAの割合が100%、90%、50%、10%、0%となるように、EpiTect Methylated Control DNAとEpiTect Unmethylated Control DNA(両方とも前もってBisulfite変換済み)を混和した。ヒトPITX2遺伝子用のEpiTect MethyLight Assaysを10 ngの各DNAを用いてtriplicateで行なった。結果は、EpiTect Control DNAがメチル化のスタンダードとして、未知DNAサンプルの定量に使用できることを示している。

Standard curve for the quantification of the methylation degree in HRM analysis
HRM定量スタンダード
APC遺伝子のプロモーター領域にあるCpGアイランドを増幅し、メチル化の程度をEpiTect HRM PCR Kit を用いてHRMメチル化解析により測定した。EpiTect Control DNA Setのメチル化DNAまたは非メチル化DMAは、様々な比率で混合されており、解析のテンプレートとして使用できます。
Typical Pyrograms Obtained for Unmethylated and Methylated EpiTect
EpiTect Control DNAのパイログラム

MGMTプロモーター領域にある16ヵ所のCpG配列について、完全なメチル化(平均メチル化率 95%以上)および非メチル化(平均メチル化率0.3%)を調べた。DNA修復に関与しているp53関連遺伝子の一つであるMGMT(6-O methylguanine-DNA methyltransferase)のPCR産物をパイロシークエンス法で解析した。 パイロシークエンシングはPyroMark IDで行なった(データ提供;Uwe Gerstenmaier, varionostic GmbH, Ulm)。

Use of EpiTect Control DNA
メチル解析のためのPCR でEpiTect Control DNA を使用

メチル化特異的なプライマー(M-Primer)は、Bisulfite変換した完全メチル化コントロールDNA のみにアニーリングする。非メチル化DNA に特異的なプライマー(U-Primer)は、全くメチル化されていないDNA をBisulfite 変換したコントロールDNAのみにアニーリングする。全くメチル化のないゲノムDNA にはM-Primer もU-Primer もアニーリングしない。

EpiTYPER® MALDI-TOF Analysis of Bisulfite Converted and Whole Bisulfitome Amplified (WBA)
Bisulfite変換および全Bisulfitome増幅(WBA)DNAのEpiTYPER MALDI-TOF 解析

メチル化DNAサンプル(UMDNA 1)、非メチル化DNAサンプル(VIAL A 1)、および両者の混和物(HTXA 1)をMP6遺伝子座のメチル化状態を調べるために用いた。 この結果を、EpiTect Whole Bisulfitome Kitを用いて全Bisulfitome増幅(WBAUMDNA1, WBAHTXA 1, WBAVIAL A 1)後に得られた結果と比較した。増幅前のメチル化パターンと増幅したDNAのメチル化パターンは非常によく似ており、増幅前の状態を保っていることを示す(データ提供:Hany EzzeldinMayo Clinic, Rochester, USA)。

Standardized Workflows in Epigenetics
エピジェネティクスにおける標準化されたワークフロー