QuantiFast SYBR® Green PCR Kit

For fast, real-time PCR and two-step qRT-PCR using SYBR Green

  • Specific and sensitive detection of even low-copy targets
  • Optimized master mix for reliable results without optimization
  • 5-minute enzyme activation and fast cycling conditions
  • Accurate detection of a wide range of template amounts
  • Universal protocol for all standard and fast cyclers
The QuantiFast SYBR Green PCR Kit delivers fast and specific quantification of gDNA or cDNA targets by real-time PCR or two-step RT-PCR using SYBR Green I detection. Q-bond technology and an optimized, ready-to-use master mix enable shorter real-time PCR run times, not only on fast cyclers with short ramping times, but also on standard cyclers. The combination of a hot start and a unique PCR buffer system in the ready-to-use master mix ensures highly sensitive qPCR on any real-time cycler without the need for optimization. For convenience, the master mix can be stored at 2–8°C.
製品名 Cat. no. List price:
QuantiFast SYBR Green PCR Kit (400)
For 400 x 25 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiFast SYBR Green PCR Master Mix (contains ROX dye), 2 x 2 ml RNase-Free Water
204054
¥51,000
QuantiFast SYBR Green PCR Kit (2000)
For 2000 x 25 µl reactions: 25 ml 2x QuantiFast SYBR Green PCR Master Mix (contains ROX dye), 20 ml RNase-Free Water
204056
¥213,000
QuantiFast SYBR Green PCR Kit (4000)
For 4000 x 25 µl reactions: 2 x 25 ml 2x QuantiFast SYBR Green PCR Master Mix (contains ROX dye), 20 ml RNase-Free Water
204057
¥356,000

QuantiFast SYBR® Green PCR Kit  は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。


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PCR時間を顕著に短縮|わずかなコピー数の差異を解析|感度を損なわずにより迅速な結果を実現|高感度な2ステップRT-PCR|特異的なプライマーアニーリング|プライマーの高速なアニーリング|
QuantiFast SYBR® Green PCR Kitは、標準的なサイクラーで2ステップリアルタイムRT-PCRのトータルPCR時間を最大60%短縮する(40サイクルで融解曲線解析なし、標準的なQIAGENリアルタイムPCRキットと比較)。L:LightCycler 2.0、A1:ABI PRISM 7900、A2:Applied Biosystems 7500、A3:ABI PRISM 7000。|男性ドナーのゲノムDNA中に存在するY染色体に特異的なシングルコピー遺伝子SRYをMastercycler ep realplexを用い、QuantiFast SYBR® Green PCR Kitで検出した。[A] 1000コピーから1.5コピーまでの増幅曲線はそれぞれ明確に判別できる。[B] コピー数(対数)に対するCT値のプロットは高い直線性を示している。|ヒト白血球中のMYC(プロトオンコジーン)の発現をApplied Biosystems 7500 Fast Systemにおいて2ステップリアルタイムRT-PCRで解析した。cDNAの10倍段階希釈液(10 ng~10 pg)を用いてduplicateで反応を行なった。[A] QuantiFast Kitを用いたFastサイクリングモードでは、CT値が[B] QuantiTect Kitを用いた標準的サイクリングモードと同等になった。一方、Supplier AIIの標準的なサイクリング用キットでは、[C] Fastサイクリングモードだけでなく[D] 推奨されている標準的サイクリングモードでも良好なCT値が得られなかった。|ヒト白血球のMYC(プロトオンコジーン)発現は、 iCycler iQと[A] QuantiFast SYBR® Green PCR Kitまたは[B] Supplier BVのキットを用いて解析した。cDNAの10倍段階希釈液(100 ng~0.1 ng)を用いてduplicateで反応を行なった。Supplier BVの機器専用キットを高速サイクリングプロトコールに従って使用した。QuantiFast KitでCT値が低いことは、感度が高いことを示している。|バランスの取れたKClおよび(NH4)2SO4の組み合わせは、プライマーおよびプローブのPCRテンプレートに対する特異的なアニーリングを促進する。K+は二本鎖DNAのリン酸基に結合し、プライマーとプローブのアニーリングを安定化する。NH4+は、ミスマッチな塩基対間の水素結合を不安定化する。|[A] QuantiFast Buffer中のQ-Bondは、短い一本鎖化したDNAへのDNAポリメラーゼの結合アフィニティーを増大させるため、プライマーのアニーリング時間を数秒間に短縮できる。さらにDNAの融解をサポートするユニークなバッファー組成が、変性およびエクステンション時間を短縮する。[B] Q-Bond が存在しないと、プライマーとポリメラーゼが連続的にテンプレートに結合するのでプライマーのアニーリングに時間がかかる。|
パフォーマンス

The QuantiFast SYBR Green PCR Kit delivers highly specific and sensitive results, outperforming other real-time PCR kits used in fast cycling mode (see figure "Sensitive two-step RT-PCR"). PCR run times are reduced by up to 60% (see figure "Significantly reduced PCR times"), allowing you to get results faster without compromising PCR performance (see figure "Faster results without compromising sensitivity"). You can also greatly increase your sample throughput or efficiently share a cycler with other users. 

The QuantiFast SYBR Green PCR Kit enables accurate quantification of targets over several log dilutions of template. Even small differences in the amount of low-copy targets can be clearly distinguished (see figure "Resolution of small differences in copy number").

原理

The QuantiFast SYBR Green PCR Kit delivers highly sensitive and specific results over a wide dynamic range on both standard and fast cyclers. The fluorescent dye SYBR Green I in the master mix enables the analysis of many different targets without having to synthesize target-specific labeled probes. A specially developed fast PCR buffer contains the novel PCR additive Q-Bond, which significantly reduces denaturation, annealing, and extension times (see figure "Fast primer annealing"). A balanced combination of K+ and NH4+ ions in the PCR buffer promotes specific primer annealing and enables high PCR specificity and sensitivity (see figure "Specific primer annealing"). In addition, HotStarTaq Plus DNA Polymerase requires only 5 minutes at 95°C for activation and provides a stringent hot start, preventing the formation of nonspecific products.  

Components of 2x QuantiFast SYBR Green PCR Kit*
Component Features and benefits Benefits
HotStarTaq Plus DNA Polymerase 5 min activation at 95ºC Set up of qPCR reactions at room temperature
QuantiFast SYBR Green PCR Buffer Balanced combination of NH4+ and K+ ions Specific primer annealing ensures reliable PCR results
Unique Q-Bond additive Faster PCR run times, enabling faster results and more reactions per day
SYBR Green I dye Yields a strong fluorescent signal upon binding to double-stranded DNA Highly sensitive amplification
ROX dye Normalizes fluorescent signals on Applied Biosystems and, optionally, Agilent instruments Precise quantification on cyclers that require ROX dye. Does not interfere with PCR on any real-time cycler
* Also contains a dNTP mix (dATP, dCTP, dGTP, dTTP).
操作手順

The QuantiFast SYBR Green PCR Kit is a ready-to-use master mix that eliminates the need for optimization of reaction and cycling conditions. Simply add primers and DNA template to the ready-to-use PCR master mix, and start the reaction. Follow the protocol in the handbook to get fast and reliable results on any real-time cycler.

For optimal results in real-time two-step RT-PCR, we recommend synthesizing cDNA using the QuantiTect Reverse Transcription Kit. The kit provides fast cDNA synthesis in just 20 minutes with integrated removal of genomic DNA contamination.

We also recommend QuantiTect Primer Assays for gene expression analysis using SYBR Green. QuantiTect Primer Assays are bioinformatically validated primer sets for any gene from human, mouse, rat, and many other species. Assays can be easily ordered online at the GeneGlobe Web portal.

 

アプリケーション

The QuantiFast SYBR Green PCR Kit is for use in gene expression analysis of cDNA targets and quantitative gDNA analysis. QuantiFast SYBR Green PCR Kits are compatible with all available real-time cyclers, including instruments from Applied Biosystems, Bio-Rad, Cepheid, Eppendorf, Roche, and Agilent. For the Rotor-Gene Q and other Rotor-Gene cyclers, we recommend using the Rotor-Gene SYBR Green PCR Kit, which has been specially developed for fast cycling on these instruments.

Feature
Specifications
Applications SYBR Green-based, real-time PCR, two-step RT-PCR
Reaction type Real-time and two-step RT-PCR
Real-time or endpoint Real-time
Sample/target type cDNA, DNA
Single or multiplex Single
SYBR Green I or sequence-specific probes SYBR Green I
Thermal cycler Applied Biosystems, Bio-Rad, Cepheid, QIAGEN, Eppendorf, Roche, and Agilent
With or without ROX With ROX
With/without hotstart With hotstart

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FAQ
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FAQ ID -729
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FAQ ID -849
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キットハンドブック
4
For fast, quantitative, real-time PCR and two-step RT-PCR using SYBR Green I
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For genomewide, ready-to-use real-time RT-PCR assays using SYBR Green detection
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ゲノムワイドで即使用可能なリアルタイムRT-PCRアッセイ(SYBR Green検出)用
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SYBR Green I を用いた高速リアルタイム定量PCRおよび2ステップRT-PCR 用
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クイックスタートプロトコール
1
MSDS
1
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
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画像
Significantly reduced PCR times
PCR時間を顕著に短縮
QuantiFast SYBR® Green PCR Kitは、標準的なサイクラーで2ステップリアルタイムRT-PCRのトータルPCR時間を最大60%短縮する(40サイクルで融解曲線解析なし、標準的なQIAGENリアルタイムPCRキットと比較)。L:LightCycler 2.0、A1:ABI PRISM 7900、A2:Applied Biosystems 7500、A3:ABI PRISM 7000。
Resolution of small differences in copy number on the Mastercycler ep realplex.
わずかなコピー数の差異を解析
男性ドナーのゲノムDNA中に存在するY染色体に特異的なシングルコピー遺伝子SRYをMastercycler ep realplexを用い、QuantiFast SYBR® Green PCR Kitで検出した。[A] 1000コピーから1.5コピーまでの増幅曲線はそれぞれ明確に判別できる。[B] コピー数(対数)に対するCT値のプロットは高い直線性を示している。
Faster results without compromising sensitivity on the Applied Biosystems 7500 Fast System.
感度を損なわずにより迅速な結果を実現
ヒト白血球中のMYC(プロトオンコジーン)の発現をApplied Biosystems 7500 Fast Systemにおいて2ステップリアルタイムRT-PCRで解析した。cDNAの10倍段階希釈液(10 ng~10 pg)を用いてduplicateで反応を行なった。[A] QuantiFast Kitを用いたFastサイクリングモードでは、CT値が[B] QuantiTect Kitを用いた標準的サイクリングモードと同等になった。一方、Supplier AIIの標準的なサイクリング用キットでは、[C] Fastサイクリングモードだけでなく[D] 推奨されている標準的サイクリングモードでも良好なCT値が得られなかった。
Senstivite two-step RT-PCR on the iCycler iQ.
高感度な2ステップRT-PCR
ヒト白血球のMYC(プロトオンコジーン)発現は、 iCycler iQと[A] QuantiFast SYBR® Green PCR Kitまたは[B] Supplier BVのキットを用いて解析した。cDNAの10倍段階希釈液(100 ng~0.1 ng)を用いてduplicateで反応を行なった。Supplier BVの機器専用キットを高速サイクリングプロトコールに従って使用した。QuantiFast KitでCT値が低いことは、感度が高いことを示している。
Specific primer annealing using a balanced combination of K+ and NH4+ ions
特異的なプライマーアニーリング
バランスの取れたKClおよび(NH4)2SO4の組み合わせは、プライマーおよびプローブのPCRテンプレートに対する特異的なアニーリングを促進する。K+は二本鎖DNAのリン酸基に結合し、プライマーとプローブのアニーリングを安定化する。NH4+は、ミスマッチな塩基対間の水素結合を不安定化する。
Fast primer annealing with Q-Bond
プライマーの高速なアニーリング
[A] QuantiFast Buffer中のQ-Bondは、短い一本鎖化したDNAへのDNAポリメラーゼの結合アフィニティーを増大させるため、プライマーのアニーリング時間を数秒間に短縮できる。さらにDNAの融解をサポートするユニークなバッファー組成が、変性およびエクステンション時間を短縮する。[B] Q-Bond が存在しないと、プライマーとポリメラーゼが連続的にテンプレートに結合するのでプライマーのアニーリングに時間がかかる。