QuantiFast Probe PCR Kits

配列特異的プローブを用いた高速なリアルタイムPCRおよび2ステップqRT-PCR

  • 低コピーターゲットでも高感度な検出
  • 幅広いテンプレート量を正確に検出
  • 時間を最大60%まで短縮し迅速な結果
  • 至適化済みで即使用可能なマスターミックスにより、至適化せずに正確な結果を実現
  • 標準的および高速サイクラーに対応する1種類のサイクリングプロトコール
QuantiFast Probe PCR Kitsは配列特異的なプローブを用いてリアルタイムPCRおよび2ステップRT-PCRにより迅速かつ高感度にgDNAおよびcDNAターゲットを定量します。Q-bondテクノロジーと至適化済みのマスターミックスにより、短いRamping Time機能を持つ高速サイクラーだけではなく標準的なサイクラーでも、より短時間でリアルタイムPCRを実現します。ホットスタートと即使用可能なマスターミックス中の独自のPCRバッファーシステムの組み合わせは、至適化の必要はなく、全てのリアルタイムサイクラーで高感度定量PCRを実現します。キットフォーマットは2種類あり、蛍光補正のためにROXが必要なサイクラー用QuantiFast Probe PCR Kitおよびその他のサイクラー用のQuantiFast Probe PCR +ROX Vial Kitです。マスターミックスは2~8 ℃で保存でき、簡便に取り扱えます。
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QuantiFast Probe PCR Kit (400)
For 400 x 25 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiFast Probe PCR Master Mix (contains ROX dye), 2 x 2 ml RNase-Free Water
204254
£378.00
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QuantiFast Probe PCR Kit (2000)
For 2000 x 25 µl reactions: 25 ml 2x QuantiFast Probe PCR Master Mix (contains ROX dye), 20 ml RNase-Free Water
204256
£1,465.00
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QuantiFast Probe PCR Kit (4000)
For 4000 x 25 µl reactions: 2 x 25 ml 2x QuantiFast Probe PCR Master Mix (contains ROX dye), 20 ml RNase-Free Water
204257
£2,550.00
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QuantiFast Probe PCR +ROX Vial Kit (400)
For 400 x 25 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiFast Probe PCR Master Mix (without ROX dye), 210 µl ROX Dye Solution, 2 x 2 ml RNase-Free Water
204354
£369.00
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QuantiFast Probe PCR +ROX Vial Kit (2000)
For 2000 x 25 µl reactions: 25 ml 2x QuantiFast Probe PCR Master Mix (without ROX dye), 1.05 ml ROX Dye Solution, 20 ml RNase-Free Water
204356
£1,489.00
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QuantiFast Probe PCR Kits are intended for molecular biology applications. These products are not intended for the diagnosis, prevention, or treatment of a disease.


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Significantly reduced PCR times.|Wide dynamic range and high sensitivity.|Faster results without compromising sensitivity.|Sensitive two-step RT-PCR.|Detection over 7 Logs of template.|Specific primer annealing.|Fast primer annealing.|
QuantiFast Probe Kits reduce total PCR run time by up to 60% in real-time two-step RT-PCR on standard cyclers (40 PCR cycles carried out; comparison with a standard QIAGEN real-time PCR kit). L: LightCycler 2.0; A1: ABI PRISM 7900; A2: Applied Biosystems 7500; A3: ABI PRISM 7000.
|The QuantiFast Probe PCR +ROX Vial Kit provided accurate gene expression analysis from low to high template amounts with a PCR efficiency of 93% in two-step PCR on the Mastercycler ep realplex. Duplicate reactions (25 μl volume) were performed using 10-fold dilutions of human leukocyte cDNA and a Primer Express designed TaqMan assay for ubiquitin (a regulatory protein). NTC: no template control.|Reactions were run in duplicate using 10-fold dilutions of human leukocyte cDNA (100 ng to 0.01 ng) and a TaqMan gene expression assay for IL1RN (a cytokine) on the ABI PRISM 7900. The QuantiFast Kit showed greater sensitivity than the standard cycling kit from Supplier AII (which was used according to the standard cycling protocol), providing much lower CT values and transcript quantification from down to 10 pg cDNA.|Reactions were run in triplicate using 10-fold dilutions of human leukocyte cDNA (100 ng to 0.01 ng) and a Primer Express designed TaqMan assay for IL8 (a chemokine) on the ABI PRISM 7900. [A] The QuantiFast Kit showed greater sensitivity than [B] the kit from Supplier I (which was used according to the standard cycling protocol), providing lower CT values and transcript quantification from down to 0.01 ng cDNA.|Duplicate two-step RT-PCR reactions were run using a set of primers and FRET probes for b-2 microglobulin from Supplier R on the LightCycler 2.0. The amplification plots for the QuantiFast Kit show the kit's wide dynamic range.|A balanced combination of KCl and (NH4)2SO4 promotes specific annealing of primers and probes to the PCR template. K+ binds to phosphate groups on double-stranded DNA, stabilizing annealing of primers and probes. NH4+ destabilizes weak hydrogen bonds between mismatched bases.|[A] Q-Bond in QuantiFast Buffer increases the affinity of DNA polymerase for short single-stranded DNA, reducing primer annealing time to a few seconds. In addition, the unique buffer composition supports the melting of DNA, reducing denaturation and extension times. [B] Without Q-Bond, the primer and polymerase bind sequentially to the template, increasing primer annealing time.|
Performance

QuantiFast Probe PCR Kitsでは、他のリアルタイムPCRキットよりも卓越した感度の高い結果が得られます(表"iCycler iQを用いた高感度な2ステップRT-PCR"および図"高感度な2ステップRT-PCR")。PCR時間が最大60%短縮され(図"PCR時間を顕著に短縮")、PCRの性能を妥協しなくてもPCR結果を速く得られます(図"感度を損なわずにより迅速な結果を実現")。従って、サンプル処理数を大幅に増やしたり、他の実験者と1台のサイクラーを効率的に共有できます。

iCycler iQを用いた高感度な2ステップRT-PCR
平均CT
ヒト白血球cDNA(ng) QuantiFast Probe PCR +ROX Vial Kit Supplier BVのキット
100 29.13 31.13
10 32.50 34.43
1 36.15 40.00
テンプレートを含まないコントロール 40.00 40.00
Primer ExpressでデザインしたIL8(ケモカイン)用TaqManアッセイを用いてtriplicateで反応を行なった。Supplier BVのキット(高速サイクリングプロトコールを使用)と比較してQuantiFast Kitでは低いCT値が得られ、わずか1 ngのcDNAからの転写物の定量が可能である。

QuantiFast Probe PCR Kitは幅広いダイナミックレンジにわたり正確な定量を実現します(図"幅広いダイナミックレンジと高感度を実現")。テンプレートを最高107倍に希釈した溶液からでも正確な検出ができます(表"LightCycler 2.0を用いて107倍希釈したテンプレートを2ステップRT-PCRで検出"および図"107倍希釈したテンプレートの検出")。

LightCycler 2.0を用いて107倍希釈したテンプレートを2ステップRT-PCRで検出
平均CT
Human leukocyte cDNA QuantiFast Probe PCR +ROX Vial Kit R 社Kit
100 ng 11.99 14.56
10 ng 15.54 17.99
1 ng 19.22 22.16
100 pg 22.63 25.14
10 pg 26.43 30.15
1 pg 30.02 34.43
100 fg 33.42 37.10
テンプレートを含まないコントロール 40 40.00
PCR効率 90% 80.1%
Supplier Rのβ-2ミクログロブリン用プライマーとFRETプローブのセットを用いてduplicateで反応を行なった。QuantiFast Kitは、Supplier Rのキット(高速サイクリングプロトコールを使用)と比較してCT値が低く、PCR効率が高かった。
Principle

QuantiFast Probe PCR Kitでは、標準的なサイクラー、高速サイクラーともに、広範なダイナミックレンジで非常に高感度な結果が迅速に得られます。本キットは、加水分解プローブの検出(TaqManあるいはその他のダブル標識プローブなどを含む)、FRETプローブなどの全てのタイプの配列特異的プローブを使用するためにデザインされています。新規添加剤のQ-Bondを含有する特別に開発された高速PCR用バッファーにより、変性、アニーリングおよびエクステンション時間も顕著に短縮されます(図"プライマーの高速なアニーリング")。このバッファーに入っているK+およびNH4+のイオン配合比により、プライマーとプローブが核酸テンプレートに効率的かつ安定してアニーリングし、高いPCR効率と感度を実現します(図"特異的なプライマーアニーリング")。さらに、HotStarTaq Plus DNA Polymeraseは厳密なホットスタートを行なえるため、非特異的な産物の形成を抑えます。

2x QuantiFast Probe PCR Kitの成分*
成分 特長 利点

HotStarTaq Plus DNA Polymerase

95℃、3分間の活性化

室温での定量PCRのセットアップ

QuantiFast Probe PCR Buffer

NH4+/K+イオンの配合バランス

特異性の高いプライマーのアニーリングで信頼性の高いPCR結果

ユニークなQ-Bondを含む

PCR反応時間が短縮されるため迅速に結果が得られ、1日あたりの反応数を増やせる

ROX色素

Applied Biosystems社およびオプションのAgilent社の装置で蛍光シグナルを補正

ROXが必要なサイクラーで正確な定量。他のリアルタイムサイクラーでの反応を妨害しない
* dNTP Mix(dATP、dCTP、dGTPおよびdTTP)も含む。 ROX色素はマスターミックス中に含有あるいは別包装の溶液。

Procedure

QuantiFast Probe PCR Kitは反応条件やサイクリング条件の至適化が不要で即使用可能なマスターミックスです。テンプレートDNA、プライマー、プローブをマスターミックスに添加し、ハンドブックに記載されているプロトコールに従うだけで、全てのリアルタイムサイクラーで迅速で正確な結果が得られます。マスターミックス中にROXパッシブリファレンス色素が入ったキットまたは入っていないキットをお求めいただけ、事実上全てのリアルタイムサイクラーでの使用が可能です(表参照)。ROX濃度が至適化されているため、コピー数が少ない場合の検出でも自動データ解析を行なうことができます。

正しいQuantiFast Probe PCR Kitの選択ガイド
ROX色素Kit対応するサイクラー
マスターミックスに添加済みQuantiFast Probe PCR KitApplied Biosystems 7500以外のApplied Biosystemsの全てのサイクラー
別チューブで添付QuantiFast Probe PCR +ROX Vial KitApplied Biosystems 7500およびAgilent、Bio-Rad、Cepheid、QIAGEN、Eppendorf、Roche、その他のサイクラー

2ステップリアルタイムRT-PCRで最適な結果を得るためには、QuantiTect Reverse Transcription Kitを用いてcDNAを合成することをお薦めします。本キットは、ゲノムDNAコンタミの除去を組み合わせたcDNA合成をわずか20分で行ないます。 

QuantiFast Probe Assayは加水分解、プローブを用いた検出を利用したデザイン済みのゲノムワイドなアッセイです。QuantiFast Probe PCR Kitを使用して行なわれ、singleplex 2ステップqRT-PCRの結果が得られます。

Applications

QuantiFast Probe PCR Kitは、全てのリアルタイムサイクラーで、プローブを用いたcDNAターゲットの遺伝子発現解析および定量的gDNA解析に使用できます。これには、Applied BiosystemsおよびBio-Rad、Cepheid、Eppendorf、Roche、Agilent社のサイクラーを含みます。Rotor-Gene Qおよび他のRotor-Geneサイクラーを使用する場合は、これらの高速サイクリング用に特別に開発されたRotor-Gene Probe PCR Kitの使用をお勧めします。

Feature
Specifications
Applications Probe-based, real-time PCR, two-step RT-PCR
Reaction type Real-time and two-step RT-PCR
Real-time or endpoint Real-time
Sample/target type cDNA, DNA
Single or multiplex Single
SYBR Green I or sequence-specific probes Sequence-specific probes
Thermal cycler All real-time cyclers (e.g. Roche LightCycler®, Corbett Rotor-Gene, Applied Biosystems)
With or without ROX Available with ROX in master mix and with ROX as separate vial

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FAQs
37
FAQ ID -1085
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FAQ ID-751
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FAQ ID -784
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FAQ ID -1452
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Kit Handbooks
1
For fast, quantitative, real-time PCR and two-step RT-PCR using sequence-specific probes
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Significantly reduced PCR times
Significantly reduced PCR times.
QuantiFast Probe Kits reduce total PCR run time by up to 60% in real-time two-step RT-PCR on standard cyclers (40 PCR cycles carried out; comparison with a standard QIAGEN real-time PCR kit). L: LightCycler 2.0; A1: ABI PRISM 7900; A2: Applied Biosystems 7500; A3: ABI PRISM 7000.
Wide dynamic range and high sensitivity in two-step RT-PCR on the Mastercycler ep realplex.
Wide dynamic range and high sensitivity.
The QuantiFast Probe PCR +ROX Vial Kit provided accurate gene expression analysis from low to high template amounts with a PCR efficiency of 93% in two-step PCR on the Mastercycler ep realplex. Duplicate reactions (25 μl volume) were performed using 10-fold dilutions of human leukocyte cDNA and a Primer Express designed TaqMan assay for ubiquitin (a regulatory protein). NTC: no template control.
Faster results without compromising sensitivity on the ABI PRISM 7900
Faster results without compromising sensitivity.
Reactions were run in duplicate using 10-fold dilutions of human leukocyte cDNA (100 ng to 0.01 ng) and a TaqMan gene expression assay for IL1RN (a cytokine) on the ABI PRISM 7900. The QuantiFast Kit showed greater sensitivity than the standard cycling kit from Supplier AII (which was used according to the standard cycling protocol), providing much lower CT values and transcript quantification from down to 10 pg cDNA.
Sensitive two-step RT-PCR on the ABI PRISM 7900.
Sensitive two-step RT-PCR.
Reactions were run in triplicate using 10-fold dilutions of human leukocyte cDNA (100 ng to 0.01 ng) and a Primer Express designed TaqMan assay for IL8 (a chemokine) on the ABI PRISM 7900. [A] The QuantiFast Kit showed greater sensitivity than [B] the kit from Supplier I (which was used according to the standard cycling protocol), providing lower CT values and transcript quantification from down to 0.01 ng cDNA.
Detection over 7 logs of template in two-step RT-PCR on the LightCycler 2.0.
Detection over 7 Logs of template.
Duplicate two-step RT-PCR reactions were run using a set of primers and FRET probes for b-2 microglobulin from Supplier R on the LightCycler 2.0. The amplification plots for the QuantiFast Kit show the kit's wide dynamic range.
Specific primer annealing using a balanced combination of K+ and NH4+ ions
Specific primer annealing.
A balanced combination of KCl and (NH4)2SO4 promotes specific annealing of primers and probes to the PCR template. K+ binds to phosphate groups on double-stranded DNA, stabilizing annealing of primers and probes. NH4+ destabilizes weak hydrogen bonds between mismatched bases.
Fast primer annealing with Q-Bond
Fast primer annealing.
[A] Q-Bond in QuantiFast Buffer increases the affinity of DNA polymerase for short single-stranded DNA, reducing primer annealing time to a few seconds. In addition, the unique buffer composition supports the melting of DNA, reducing denaturation and extension times. [B] Without Q-Bond, the primer and polymerase bind sequentially to the template, increasing primer annealing time.