miScript miRNA Inhibitors
For studies on miRNA function and gene regulation using miRNA inhibition
- Ready-to-transfect inhibitors bind and inhibit miRNAs
- Available for all human, mouse, and rat miRNAs in miRBase
- Highly flexible formats, scales, and grades
- Custom design available for miRNAs not listed in miRBase
miScript miRNA Inhibitors are chemically synthesized, single-stranded, modified RNAs which specifically inhibit endogenous miRNA function after transfection into cells. miScript miRNA Inhibitors are available at cell-culture grade (>90% purity) or animal grade (HPLC purified). miScript miRNA Inhibitors are also available phosphorothioate modified at the 20 nmol scale. For flexible screening, miScript miRNA Inhibitor Plates enable researchers to order any predesigned or custom-designed miScript miRNA Inhibitors in their choice of layout in 96-well or 384-well plates. miScript miRNA Mimics can be used for similar experiments.
Please beware that miScript miRNA Inhibitors will be discontinued on July 1, 2019. Products will still be available for reordering, but the product webpage will be removed. We strongly recommend miRCURY LNA miRNA Inhibitors which have superior performance.
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- Cat. no. (e.g., SI00299551, QT01342509)
- Sanger ID or Accession (e.g., hsa-let-7b, MI0000063)
- CpG loci identification numbers (CG#) (e.g., CG17753661)
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miScript miRNA Inhibitor
1 nmol (cell-culture grade), 5 nmol (cell-culture grade), or 20 nmol (animal grade, option of phosphorothioate modification) miScript miRNA Inhibitor, provided in tubes
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Varies
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miScript miRNA Inhibitors は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。
トランスフェクション96時間後も効果があるmiRNA Inhibitor|miRNA由来のサイレンシング効果を阻害するmiScript miRNA Inhibitor|miRNA Inhibitorのトランスフェクションによる内在性miRNA量の低下|
HiPerFect Transfection Reagent を用いてmiR-15a Inhibitor、miR-16 Inhibitor、miR-21 Inhibitor、miR-25 Inhibitor、スクランブル配列のInhibitor (ネガティブコントロール) をHeLa S3細胞 (6 x 10 4 細胞/ウェル) にトランスフェクトした。表記の時間に、適切なmiRNA結合部位を持つルシフェラーゼレポーターコンストラクトをトランスフェクトした。どのmiRNAによっても制御されないレポーターコンストラクトをポジティブコントロールとして用いた。24時間後にルシフェラーゼ活性を測定した。|HeLa S3 細胞は高レベルで miR-16を発現しているがmiR-1 は発現していない (Ref. 1 参照)。HiPerFect Transfection Reagentを用いたコトランスフェクション実験で、3' UTRにmiR-16結合部位を持つルシフェラーゼレポーターコンストラクトをmiR-16 Inhibitorと共にHeLa S3細胞 (6 x 10 4 細胞/ウェル) にコトランスフェクトした。miR-16 Inhibitorの阻害効果を得るために必要とされる最適なInhibitor濃度を評価するために、様々な濃度のmiR-16 Inhibitorを用いた。ネガティブコントロールとしてmiR-1 Inhibitorのみを細胞にトランスフェクトした。miRNA結合部位のないルシフェラーゼコンストラクト( WT)をポジティブコントロールとしてトランスフェクトした。Inhibitorのトランスフェクション後にルシフェラーゼの発現が増加することは、内在性miR-16によるレポーター遺伝子発現の抑制をmiR-16 Inhibitorが阻害したことを示唆した。 1.Lagos-Quintana, M. et al. (2001) Identification of novel genes coding for small expressed RNAs. Science 294, 853. |HiPerFect Transfection Reagent を用いてmiScript miR-16 InhibitorあるいはネガティブコントロールをHeLa S3細胞(6 x 104細胞/ウェル)にトランスフェクトした。内在性miR-16量をmiScript Systemを用いたリアルタイムPCRで定量した。データの標準化のためにリファレンスRNAとしてU6Bを使用し、miR-16量は未処理の細胞中のmiR-16量に対する 2-ΔΔCT値として表した。[A] miScript miR-16 Inhibitor のトランスフェクションにより検出可能な内在性 miR-16量が顕著に低下した。[B] miR-16 Inhibitorトランスフェクションの結果として、増幅プロットは検出可能なmiR-16量が有意に低下していることを示している。解離曲線(挿入図)はmiScript Systemを用いたリアルタイムPCR検出の特異性を反映している。|
原理
Transfection of inhibitors, followed by downstream gene expression analysis or phenotypic analysis, is performed to elucidate the targets and roles of particular miRNAs. These experiments enable study of the biological effects of misregulation of individual miRNAs as well as confirmation of specific genes as targets of individual miRNAs.
Increased gene expression after transfection of inhibitor provides evidence that the miRNA under study is involved in regulation of that gene. Similar studies can be performed using miScript miRNA Mimics. Typically, such experiments involve transfection of mimic or inhibitor, or alternatively cotransfection with a vector construct which carries the miRNA-binding site fused to a reporter gene. Downstream analysis can include reporter assays, real-time PCR, microarray analysis, or protein analysis.
操作手順
Highly flexible solutions offered by miScript miRNA Inhibitors are available for every human, mouse, rat, and virus miRNA in the current version of the microRNA database, miRBase. QIAGEN's GeneGlobe database is continually updated to ensure that mimic and inhibitor designs match the most up-to-date version of miRBase. This ensures that you are always working with the most accurate and current miRNA sequence information possible. If the miRNA of interest is not available in miRBase, an inhibitor for your human, mouse, rat, or virus miRNA can be custom synthesized by visiting QIAGEN's custom miScript product design page.
Flexible formats enable either low-throughput analysis using small numbers of inhibitors or high-throughput screening using hundreds of inhibitors. miScript miRNA Inhibitors are available at cell-culture-grade (>90% purity provided by proprietary synthesis and purification processes). For in vivo applications, HPLC-purified, animal-grade miScript miRNA Inhibitors can be ordered at the 20 nmol scale (provided in tubes). miScript miRNA Inhibitors are also available phosphorothioate modified at the 20 nmol scale for in vivo applications. Phosphorothioate modification protects the inhibitor from exonuclease activity, increasesing the stability of the molecule. miScript miRNA Inhibitors can easily be ordered at GeneGlobe. For medium- to high-throughput applications, 96-well plates, or 384-well plates are available to suit your experimental requirements.
アプリケーション
- miRNA research
- Gene regulation research
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Feature
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Specifications
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Design
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Predesigned and custom design avaliable
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Format
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Single tubes, 96-well & 384 well plates
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Modification
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Yes, optional with 20 nmol: phosphorothiate modified for in vivo studies
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Scale or yield
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1 nmol, 5 nmol, 20 nmol
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Sequence provided
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No
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Species
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Human, mouse, rat
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Simultaneously profile mRNA, miRNA and lncRNA using a simple, complete workflow
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FAQ ID -1983
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FAQ ID -1984
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FAQ ID -1985
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FAQ ID -2253
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FAQ ID -803
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画像
トランスフェクション96時間後も効果があるmiRNA Inhibitor
HiPerFect Transfection Reagent を用いてmiR-15a Inhibitor、miR-16 Inhibitor、miR-21 Inhibitor、miR-25 Inhibitor、スクランブル配列のInhibitor (ネガティブコントロール) をHeLa S3細胞 (6 x 104 細胞/ウェル) にトランスフェクトした。表記の時間に、適切なmiRNA結合部位を持つルシフェラーゼレポーターコンストラクトをトランスフェクトした。どのmiRNAによっても制御されないレポーターコンストラクトをポジティブコントロールとして用いた。24時間後にルシフェラーゼ活性を測定した。
miRNA由来のサイレンシング効果を阻害するmiScript miRNA Inhibitor
HeLa S3 細胞は高レベルでmiR-16を発現しているがmiR-1 は発現していない (Ref. 1 参照)。HiPerFect Transfection Reagentを用いたコトランスフェクション実験で、3' UTRにmiR-16結合部位を持つルシフェラーゼレポーターコンストラクトをmiR-16 Inhibitorと共にHeLa S3細胞 (6 x 104 細胞/ウェル) にコトランスフェクトした。miR-16 Inhibitorの阻害効果を得るために必要とされる最適なInhibitor濃度を評価するために、様々な濃度のmiR-16 Inhibitorを用いた。ネガティブコントロールとしてmiR-1 Inhibitorのみを細胞にトランスフェクトした。miRNA結合部位のないルシフェラーゼコンストラクト(WT)をポジティブコントロールとしてトランスフェクトした。Inhibitorのトランスフェクション後にルシフェラーゼの発現が増加することは、内在性miR-16によるレポーター遺伝子発現の抑制をmiR-16 Inhibitorが阻害したことを示唆した。 1.Lagos-Quintana, M. et al. (2001) Identification of novel genes coding for small expressed RNAs. Science 294, 853.
miRNA Inhibitorのトランスフェクションによる内在性miRNA量の低下
HiPerFect Transfection Reagent を用いてmiScript miR-16 InhibitorあるいはネガティブコントロールをHeLa S3細胞(6 x 104細胞/ウェル)にトランスフェクトした。内在性miR-16量をmiScript Systemを用いたリアルタイムPCRで定量した。データの標準化のためにリファレンスRNAとしてU6Bを使用し、miR-16量は未処理の細胞中のmiR-16量に対する 2-ΔΔCT値として表した。[A] miScript miR-16 Inhibitor のトランスフェクションにより検出可能な内在性 miR-16量が顕著に低下した。[B] miR-16 Inhibitorトランスフェクションの結果として、増幅プロットは検出可能なmiR-16量が有意に低下していることを示している。解離曲線(挿入図)はmiScript Systemを用いたリアルタイムPCR検出の特異性を反映している。
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