HotStarTaq Plus DNA Polymerase
- 高特异性PCR,所需优化次数少
- 快速激活热启动酶,只需5分钟
- 即用型PCR上样缓冲液,操作更简单快速
该聚合酶具备高特异性、高灵敏度,HotStarTaq DNA Polymerase所需的优化次数少,激活时间为5分钟。可在室温下构建PCR反应体系,且反应产物可直接上样至凝胶,因为新型的CoralLoad PCR缓冲液包含两种凝胶示踪染料。同时提供标准QIAGEN PCR缓冲液,便于操作。此外,一种新型的添加剂Q-Solution可确保高效扩增难扩增的模板(如富含GC的模板)。独特的试剂盒组成和经优化的实验方案使PCR流程更加高效。
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HotStarTaq Plus DNA Polymerase (250)
250 units HotStarTaq Plus DNA Polymerase, 10x PCR Buffer, 10x CoralLoad PCR Buffer, 5x Q-Solution, 25 mM MgCl2
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HotStarTaq Plus DNA Polymerase (1000)
1000 units HotStarTaq Plus DNA Polymerase, 10x PCR Buffer, 10x CoralLoad PCR Buffer, 5x Q-Solution, 25 mM MgCl2
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HotStarTaq Plus DNA Polymerase (5000)
5000 units HotStarTaq Plus DNA Polymerase, 10x PCR Buffer, 10x CoralLoad PCR Buffer, 5x Q-Solution, 25 mM MgCl2
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HotStarTaq Plus DNA Polymerase (25000)
25,000 units HotStarTaq Plus DNA Polymerase, 10x PCR Buffer, 10x CoralLoad PCR Buffer, 5x Q-Solution, 25 mM MgCl2
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HotStarTaq Plus DNA Polymerase は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。
CoralLoad PCR Buffer.|HotStarTaq Plus procedure.|Highest specificity.|Amplification of difficult templates.|Higher specificity with different primer–template systems.|Effect of hot start on RT-PCR performance.|Highly sensitive single-cell PCR.|Increased specificity of primer annealing.|
[A] CoralLoad PCR Buffer contains 2 gel-tracking dyes for improved pipetting visibility during PCR setup, enabling immediate gel loading of PCR products for [B] easy visualization of DNA migration.|The HotStarTaq Plus procedure is fast and easy for maximum convenience.|PCR was performed with HotStarTaq Plus DNA Polymerase, HotStarTaq DNA Polymerase, and Taq DNA Polymerase from QIAGEN, and three hot-start PCR enzymes from the indicated suppliers. Parallel reactions were performed following the suppliers' recommendations, using 50 ng human genomic DNA. A 1.5 kb fragment of the human CFTR gene was amplified in 35 PCR cycles. M: markers.|Two different primer–template systems were amplified in duplicate using QIAGEN PCR Buffer and Taq DNA Polymerase in the absence (–) or presence (+) of 1x Q-Solution. Q-Solution enables specific amplification of difficult templates. [A] human angiotensin receptor II gene; [B] mouse protein kinase C gene; M: markers.|Three different primer–template systems were amplified under the same conditions with either Taq DNA polymerase from Supplier R (R) or with HotStarTaq DNA Polymerase (H). System 1: A 1.1 kb fragment of a D-IgI homolog was amplified from human genomic DNA. System 2: A 296 bp fragment from the chromosomal region correlated with X-linked juvenile retinoschisis was amplified from human genomic DNA. System 3: A 214 bp fragment of the β-actin gene was amplified from cDNA synthesized from total RNA. M: markers. Note: Data are shown for HotStarTaq DNA Polymerase; identical sensitivity and specificity were obtained with HotStarTaq Plus DNA Polymerase.|A 1.1 kb fragment of the human interleukin 1 receptor (type II) gene was amplified from cDNA. Amplification reactions were prepared in triplicate using Taq DNA polymerase and buffer from Supplier L (No hot start); antibody-mediated hot start using enzyme and buffer from Supplier L (Antibody-mediated); and HotStarTaq DNA Polymerase and PCR Buffer from QIAGEN (HotStarTaq). M: markers. Note: Data are shown for HotStarTaq DNA Polymerase; identical sensitivity and specificity were obtained with HotStarTaq Plus DNA Polymerase.|A 500 bp fragment of the murine p53 gene was amplified from single cells isolated by flow cytometry, and directly sorted into individual PCR tubes. Reactions were prepared in parallel using HotStarTaq DNA Polymerase and PCR Buffer from QIAGEN (HotStarTaq), a hot-start enzyme and buffer from Supplier AII (Hot-start enzyme), or antibody-mediated hot start and buffer from Supplier L (Antibody-mediated). M: markers. Note: Data are shown for HotStarTaq DNA Polymerase; identical sensitivity and specificity were obtained with HotStarTaq Plus DNA Polymerase.|Ammonium and potassium cations in QIAGEN PCR Buffers increase specificity of primer annealing. K+ binds to the phosphate groups (P–) on the DNA backbone, stabilizing the annealing of the primers to the template. NH4+, which exists both as the ammonium ion and as ammonia under thermal-cycling conditions, can interact with the hydrogen bonds between the bases (B), destabilizing the weak hydrogen bonds at mismatched bases. The combined effect of the two cations maintains a high ratio of specific-to-nonspecific primer-template binding over a wide temperature range.|
Principle
HotStarTaq Plus DNA Polymerase具备同HotStarTaq DNA Polymerase一样的卓越表现,激活时间只需5分钟。
HotStarTaq Plus DNA Polymerase,是一种经修饰的QIAGEN Taq DNA Polymerase,以非活性形式提供,常温下没有聚合酶活性。避免PCR构建和循环初始阶段低温条件下非特异性引物的延伸和引物二聚体的形成(参见"Highest specificity"和"Higher specificity with different primer-template systems")。95°C条件下孵育5分钟即可激活HotStarTaq Plus DNA Polymerase,这个步骤可整合入已有的热循环程序中。
QIAGEN PCR Buffer
QIAGEN PCR Buffer通过提高每个PCR扩增退火过程特异性引物的结合比例,确保PCR每个循环特异性扩增(参见"Increased specificity of primer annealing")。独特的KCl和(NH4)2SO4平衡组合,使得该缓冲液与传统的PCR缓冲液相比在很宽的温度和Mg2+浓度范围内都有严格的引物退火条件和高度的特异性,无需进行耗时的优化。
CoralLoad PCR Buffer
HotStarTaq Plus DNA Polymerase同时提供CoralLoad PCR Buffer,CoralLoad PCR Buffer具备QIAGEN PCR Buffer的所有优点,同时可直接将PCR产物上样到琼脂凝胶上,无需加入凝胶上样缓冲液。CoralLoad PCR Buffer具备同样高的PCR特异性,与常规的QIAGEN PCR Buffer一样可减少优化过程。此外,它包含两种指示染料,橙色染料和红色染料,可方便的判断DNA的迁移距离和优化跑胶时间(参见"CoralLoad PCR Buffer")。该缓冲液提高移液的可见性,并可直接将PCR产物上样至凝胶,提高便利性。
Q-Solution
该产品同时提供Q-Solution,一种新型的PCR添加剂,通过修饰DNA熔解行为促进难扩增模板的扩增。这种独特的试剂可进一步优化由模板引起的表现不理想的PCR,如过多的二级结构和富含GC的模板(参见"Amplification of difficult templates")。不同于DMSO和其他PCR添加剂,Q-Solution的浓度是确定的,没有毒性,并且保证PCR的纯度。而且PCR中加入Q-Solution不会影响PCR的准确性。
Procedure
HotStarTaq Plus DNA Polymerase提供高效、经优化的实验方案,用于快速、方便的构建PCR反应体系。95°C条件下孵育5分钟激活HotStarTaq DNA Polymerase,可以整合入已有的热循环程序。反应可在室温下建立,更加方便和易于使用(参见" HotStarTaq Plus procedure")。该试剂盒同时提供CoralLoad PCR Buffer,提高移液的可见性,并可直接将PCR产物上样至凝胶,提高便利性。
Applications
HotStarTaq Plus DNA Polymerase适合多种应用,包括各种富有挑战性的研究,如各种扩增应用:
- 复杂的基因模板
- 复杂的cDNA模板(如RT-PCR)
- 低拷贝的靶分子(如单细胞PCR)
- 多重引物对反应
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Feature
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Specifications
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Applications
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PCR, RT-PCR, Complex genomic templates, very low-copy targets
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Enzyme activity
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5' -> 3' exonuclease activity
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Mastermix
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No
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Reaction type
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PCR amplification
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Real-time or endpoint
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Endpoint
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Sample/target type
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Genomic DNA and cDNA
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Single or multiplex
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Single
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With/without hotstart
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With hotstart
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Second edition — innovative tools
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Addressing critical factors and new solutions
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FAQ ID -165
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FAQ ID -1047
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FAQ ID -1050
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FAQ ID -1051
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FAQ ID -1052
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FAQ ID -1449
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FAQ ID -1644
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FAQ ID -380
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FAQ ID -961
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For highly specific hot-start PCR without optimization
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画像
CoralLoad PCR Buffer
[A] マーカー色素を含むCoralLoad PCR Buffer。 [B] CoralLoad PCR Bufferを用いるとPCR溶液をゲルに直接ロードできDNAの移動を簡単に認識できる。
HotStarTaq Plus操作手順
HotStarTaq Plus 操作手順は迅速かつ容易で最高の使いやすさを実現します。
最高の特異性
QIAGEN HotStarTaq Plus DNA Polymerase、HotStarTaq DNA Polymerase、Taq DNA Polymeraseおよび表記メーカーのホットスタートPCR酵素3種類を用いてPCRを行なった。50 ngのヒトゲノムDNAを用いて、メーカーの推奨する方法で反応を同時に行なった。ヒトCFTR遺伝子の1.5 kbフラグメントを35 PCRサイクルで増幅した。M:マーカー。
増幅困難なテンプレートを増幅
2種類のプライマー/テンプレートシステムにおいて1x Q-Solutionの非存在下(–)、あるいは存在下(+)でQIAGEN PCR BufferとTaq DNA DNA Polymeraseを用いて増幅した。Q-Solutionは増幅困難なテンプレートの特異性の高い増幅を実現。[A] ヒトアンジオテンシンレセプターII遺伝子、[B] マウスプロテインキナーゼC遺伝子、M:マーカー。
異なるプライマー/テンプレートシステムにおける高特異性
3種類の異なるプライマー/テンプレートシステムでR社のTaq DNA polymerase(R)、あるいはHotStarTaq DNA Polymerase (H)を用い、同じ条件下でPCRを行った。システム 1:ヒトゲノムDNAからD-IgIの1.1 kbのフラグメントを増幅した。システム 2:ヒトゲノムDNAからX連鎖性若年性網膜分離症に関与している領域の296 bpのフラグメントを増幅した。システム 3:トータルRNAより合成されたcDNAからβ-アクチンの214 bpのフラグメントを増幅した。M:マーカー。注:HotStarTaq DNA Polymeraseのデータを示す。 同じ感度および特異性がHotStarTaq Plus DNA Polymeraseを用いて得られた。
RT-PCR におけるホットスタートの効果
ヒト・インターロイキン1レセプター(タイプII)遺伝子の1.1 kbフラグメントをcDNAから増幅した。増幅反応は以下の組み合わせで3セット調製した。 L社のTaq DNA polymeraseとバッファー(No hot start);L社の抗体修飾した酵素とバッファー(抗体利用);QIAGENのHotStarTaq DNA PolymeraseとPCR Buffer(HotStarTaq)。M:マーカー。注:HotStarTaq DNA Polymeraseのデータを示す。 同等の感度および特異性がHotStarTaq Plus DNA Polymeraseを用いて得られた。
シングルセルで高感度なPCR
フローサイトメトリ-を用いて直接各PCRチューブに分離した1個の細胞からマウスp53 遺伝子の500 bp フラグメントを増幅した。各反応は以下の組み合わせで行なった:QIAGENのHotStarTaq DNA PolymeraseとPCR Buffer(HotStarTaq)、AII社のホットスタート酵素とバッファー(Hot-start enzyme)、L社の抗体修飾した酵素とバッファー(抗体利用)。M:マーカー。注:HotStarTaq DNA Polymeraseのデータを示す。 同等の感度および特異性がHotStarTaq Plus DNA Polymeraseを用いて得られた。
プライマーのアニーリングにおける特異性が増加
QIAGEN PCRバッファー中のアンモニウムイオンとカリウムイオンにより、プライマーのアニーリングにおける特異性が増加。K+ はDNA バックボーンのリン酸基(P–)に結合し、テンプレートへのプライマー·アニーリングを安定化する。サーマルサイクリング条件下では、アンモニウムイオンおよびアンモニアの両方として存在するNH4+は、塩基(B)間の水素結合に相互作用するため、ミスマッチの塩基間の水素結合を不安定にする。これら2 種類の陽イオンの組み合わせ効果により、幅広い温度範囲において非特異的なプライマー·テンプレート結合に対して特異的な結合の比率が高く保たれる。
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