QuantiTect SYBR® Green PCR Kits

SYBR Greenを用いたリアルタイムPCRおよび2ステップRT-PCR用

  • ホットスタートの導入により高いPCR 特異性を実現
  • 発現量の低い転写物を確実に検出
  • テンプレートの数段階の対数希釈範囲で正確な定量
  • UNG (uracil-N-glycosylase) 添付あるいは未添付のキットを選択可能
  • 反応およびサイクリング条件の至適化不要

QuantiTect SYBR Green PCR Kit はSYBR Green I検出を用いたリアルタイムPCRおよび2ステップリアルタイムRT-PCRで高感度にgDNAおよびcDNAターゲットを定量します。ホットスタートと独自のPCRバッファーシステムの組み合わせは、gDNAおよびcDNAターゲットのリアルタイム定量を高い特異性と感度で定量します。dNTP MixはdUTP を含み、オプションのUNG処理ができます。マスターミックスは2~8 ℃で保存でき、簡便に取り扱えます。

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QuantiTect SYBR Green PCR Kit (200)
For 200 x 50 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix, 2 x 2 ml RNase-Free Water
204143
610,00 €
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QuantiTect SYBR Green PCR Kit (1000)
For 1000 x 50 µl reactions: 25 ml 2x QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix, 20 ml RNase-Free Water
204145
2 435,00 €
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QuantiTect SYBR Green PCR +UNG Kit (200)
For 200 x 50 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix, 100 µl UNG Solution, 2 x 2 ml RNase-Free Water
204163
670,00 €
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QuantiTect SYBR® Green PCR Kits are intended for molecular biology applications. These products are not intended for the diagnosis, prevention, or treatment of a disease.


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Two-step RT-PCR.|Highly specific amplification.|Highly sensitive quantification on the ABI PRISM 7700.|Specific quantification over a wide linear range.|Specific and sensitive quantification.|High specificity in real-time PCR.|Specific primer annealing.|
The QuantiTect SYBR® Green PCR Kit overcomes the need for optimization of reaction conditions, which can be tedious and time-consuming. Simply add primers and template to the ready-to-use PCR master mix, and start the reaction on any real-time cycler.|In comparison with other DNA polymerases, only HotStarTaq DNA Polymerase in combination with a unique buffer specifically amplified a 497 bp fragment (from 50 copies of an HIV-pol-gene construct in a background of 1 µg human genomic DNA). M: Markers.|Template ranging from 1 x 106 to 5 copies of a plasmid containing a human CFTR gene fragment (in a background of 50 ng maize genomic DNA with no CFTR gene) was amplified on the ABI PRISM 7700. CFTR (cystic fibrosis transmembrane conductance regulator) is a cAMP-regulated chloride channel. NTC: No template control.|Dilutions of human leukocyte cDNA were analyzed using the QuantiTect Primer Assay for human BAX and the indicated kits on the Rotor-Gene 3000. Highly specific quantification with the QuantiTect Kit and Assay is demonstrated by the single peak in melting curve analysis and the flat curve for the NTC reaction. NTC: No template control. Norm. Fluoro.: Normalized fluorescence.|Dilutions of human leukocyte cDNA were analyzed using the QuantiTect Primer Assay for human IL8 and the indicated kits on the Applied Biosystems 7500. Only the combination of QuantiTect Kit and Assay provided highly specific quantification, as demonstrated by the single peak in melting curve analysis and the flat curve for the NTC reaction. NTC: No template control.|SYBR® Green-based real-time PCR with UNG pretreatment was carried out using either [A] the QuantiTect SYBR® Green PCR +UNG Kit or [B] a kit and UNG from Supplier R. Reactions were run in duplicate on the LightCycler 480 using 10-fold dilutions of human leukocyte cDNA (100 ng to 100 pg) and a QuantiTect Primer Assay for Myc (a protooncogene). Melting curve analysis (see insets) revealed higher PCR specificity with the QuantiTect Kit than with the kit from Supplier R.|A balanced combination of KCl and (NH4)2SO4 promotes specific annealing of primers to the PCR template. K+ binds to phosphate groups on double-stranded DNA, stabilizing primer annealing. NH4+ destabilizes weak hydrogen bonds between mismatched bases.|
Performance

QuantiTect SYBR Green PCRは幅広い範囲で直線性のある特異性の高い定量を行ないます(図“幅広い範囲で直線性のある高感度定量”)。HotStarTaq DNA Polymeraseは他のポリメラーゼと比べて非常に厳密なホットスタートを実現することによりPCR反応の特異性がさらに増加します(図“特異性の高い増幅”)。ユニークな組成のPCRバッファーおよびHotStarTaq DNA Polymeraseにより、わずか5コピーの低発現量の転写物でさえも正確に検出され定量が可能です(“高感度定量”)。QuantiTect Reverse Transcription KitとQuantiTect Primer Assayを組み合わせて、QuantiTect SYBR Green PCR Kitは感度と信頼性の高い結果を実現します(図“特異性と感度の高い定量”)。

QuantiTect SYBR Green PCR +UNG Kit に添付の特別に至適化されたUNG 溶液と実証済みのPCR マスターミックスの組み合わせは、PCR 産物のキャリーオーバーを効果的に回避し、ターゲット配列の定量が確実に行なえます(図 “高感度のリアルタイムPCR”)。

Principle

QuantiTect SYBR Green PCR Kit には、SYBR Green I を用いたcDNAターゲットの特異的で感度の高いリアルタイム定量用に、至適化済みで即使用可能なマスターミックスが添付されています。マスターミックス中の蛍光色素SYBR Green Iは、ターゲットに特異的な標識プローブを合成しなくても多数の異なるターゲットを解析できます。PCRバッファー中のK+ および NH4+のイオン配合比により、プライマーとプローブが核酸テンプレートに効率的かつ安定してアニーリングし、高いPCR効率を実現します(図“特異性の高いプライマーアニーリング”)。さらに、バッファーには他のポリメラーゼと比べて非常に厳密なホットスタートを実現するHotStarTaq DNA Polymeraseが入っています。

QuantiTect SYBR Green PCR Master MixはまたdUTPを含み、PCR 開始前にUNG(uracil-N-glycosylase) で前処理することにより、PCR 増幅産物のコンタミは分解され、続いて行なうPCR に影響を与えません。

2x QuantiTect SYBR Green PCR Kitの成分
成分 特長 利点
HotStarTaq DNA Polymerase 95℃、15分の活性化 室温での定量PCRのセットアップ
QuantiTect SYBR Green PCR Buffer NH4+とK+イオンの配合バランス 特異性の高いプライマーのアニーリングで信頼性の高いPCR結果
dNTPミックス 一部dTTPの代わりにdUTPを含むので、PCR産物にコンタミが予想される場合、オプションのUNG処理が可能 PCR産物のキャリーオーバーによるコンタミをオプションのUNG処理により除去
SYBR Green I 色素 ニ本鎖DNAに結合して強い蛍光シグナルを発生 高感度な定量
ROX 色素 Applied Biosystems およびAgilent製装置での蛍光シグナルを補正 ROXが必要なサイクラーで正確な定量。他のリアルタイムサイクラーでの反応を妨害しない
Procedure

QuantiTect SYBR Green PCR Kit を用いると、手間と時間のかかる反応条件の至適化を行なう必要がありません。プライマーとDNAテンプレートを即使用可能なPCRマスターミックスに添加するだけで、反応を開始することができます(フローチャート “2ステップRT-PCR”)。ハンドブックに記載されているプロトコールに従うだけで、ほとんどのリアルタイムサイクラーで迅速かつ正確な結果が得られます。必要に応じて、前の反応液からのPCR 産物の混入を防ぐために、反応液をuracil-N-glycosylase(UNG)で前処理することができます。 

2ステップリアルタイムRT-PCRで良好な結果を得るためには、QuantiTect Reverse Transcription Kitを用いてcDNAを合成することをお薦めします。ゲノムDNAの除去を組み合わせて、わずか20分で迅速なcDNA合成を実現します。

QuantiTect SYBR Green PCR Kits と QuantiTect Primer Assays を組み合わせることにより、非常に特異性の高い遺伝子発現解析結果が得られます。ヒト、マウス、ラット、その他の生物種からの転写物検出のためのバイオインフォマティックス検証済みのプライマーセットが入手可能です。QuantiTect Primer Assays は GeneGlobeポータルサイトで簡単にオーダーできます。 

Applications

QuantiTect SYBR Green PCR Kit はcDNAの遺伝子発現解析およびgDNA定量解析に使用できます。QuantiTect SYBR Green PCR KitはApplied Biosystems、Bio-Rad、Cepheid、Eppendorf、Roche、Agilent社製を含むほとんどのリアルタイムサイクラーで使用可能です。 Rotor-Gene Q および他のRotor-Gene サイクラーを使用する場合は、これらの高速サイクリング用に開発されたRotor-Gene SYBR Green PCR Kitの使用をお勧めします。

Feature
Specifications
Applications Real-time quantification of genomic DNA or cDNA targets
Reaction type Real-time PCR and two-step RT-PCR
Real-time or endpoint Real-time
Sample/target type DNA, cDNA
Single or multiplex Single
SYBR Green I or sequence-specific probes SYBR Green I
Thermal cycler All real-time cyclers (e.g. LC, RG, ABI)
With or without ROX With ROX

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FAQs
39
FAQ ID -1056
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FAQ ID -849
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FAQ ID -850
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Kit Handbooks
3
For use with QuantiTect PCR Kits to eliminate carryover of PCR products
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For genomewide, ready-to-use real-time RT-PCR assays using SYBR Green detection
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For quantitative, real-time PCR and two-step RT-PCR using SYBR Green I
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PCR and two-step RT-PCR.
Two-step RT-PCR.
The QuantiTect SYBR® Green PCR Kit overcomes the need for optimization of reaction conditions, which can be tedious and time-consuming. Simply add primers and template to the ready-to-use PCR master mix, and start the reaction on any real-time cycler.
Highly specific amplification.
Highly specific amplification.
In comparison with other DNA polymerases, only HotStarTaq DNA Polymerase in combination with a unique buffer specifically amplified a 497 bp fragment (from 50 copies of an HIV-pol-gene construct in a background of 1 µg human genomic DNA). M: Markers.
Highly sensitive quantification on the ABI PRISM 7700.
Highly sensitive quantification on the ABI PRISM 7700.
Template ranging from 1 x 106 to 5 copies of a plasmid containing a human CFTR gene fragment (in a background of 50 ng maize genomic DNA with no CFTR gene) was amplified on the ABI PRISM 7700. CFTR (cystic fibrosis transmembrane conductance regulator) is a cAMP-regulated chloride channel. NTC: No template control.
Specific quantification over a wide linear range on the Rotor-Gene 3000.
Specific quantification over a wide linear range.
Dilutions of human leukocyte cDNA were analyzed using the QuantiTect Primer Assay for human BAX and the indicated kits on the Rotor-Gene 3000. Highly specific quantification with the QuantiTect Kit and Assay is demonstrated by the single peak in melting curve analysis and the flat curve for the NTC reaction. NTC: No template control. Norm. Fluoro.: Normalized fluorescence.
Specific and sensitivie quantification on the Applied Biosystems 7500.
Specific and sensitive quantification.
Dilutions of human leukocyte cDNA were analyzed using the QuantiTect Primer Assay for human IL8 and the indicated kits on the Applied Biosystems 7500. Only the combination of QuantiTect Kit and Assay provided highly specific quantification, as demonstrated by the single peak in melting curve analysis and the flat curve for the NTC reaction. NTC: No template control.
High specificity in real-time PCR.
High specificity in real-time PCR.
SYBR® Green-based real-time PCR with UNG pretreatment was carried out using either [A] the QuantiTect SYBR® Green PCR +UNG Kit or [B] a kit and UNG from Supplier R. Reactions were run in duplicate on the LightCycler 480 using 10-fold dilutions of human leukocyte cDNA (100 ng to 100 pg) and a QuantiTect Primer Assay for Myc (a protooncogene). Melting curve analysis (see insets) revealed higher PCR specificity with the QuantiTect Kit than with the kit from Supplier R.
Specific primer annealing using a balanced combination of K+ and NH4+ ions
Specific primer annealing.
A balanced combination of KCl and (NH4)2SO4 promotes specific annealing of primers to the PCR template. K+ binds to phosphate groups on double-stranded DNA, stabilizing primer annealing. NH4+ destabilizes weak hydrogen bonds between mismatched bases.