QIAseq and GeneRead Library Prep Kits
For fast and efficient preparation of DNA libraries for use in NGS applications
- Fast, one-tube procedure that allows up to 50% time savings
- High yields from minimal amounts of starting material
- Unbiased amplification with an optional, high-fidelity amplification step
- Multiplexing, high-throughput capability
GeneRead Library Prep Kits provide an optimized and efficient workflow for library preparation in next-generation sequencing (NGS) applications. The kits allow fast and efficient preparation of DNA libraries that are for use on NGS platforms from Illumina and the Ion Torrent instrument from Life Technologies. Procedures can be automated on the QIAcube.
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製品名
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Cat. no.
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QIAseq Ultralow Input Library Kit (12)
For 12 reactions: buffers and reagents for Ultralow Input End Polishing, Ultralow Input Ligation and HiFi library amplification. 12-plex adapters sold separately. For use with Illumina instruments.
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180492
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QIAseq Ultralow Input Library Kit (96)
For 96 reactions: buffers and reagents for Ultralow Input End Polishing, Ultralow Input Ligation and HiFi library amplification. Includes 96-plex Adapter Plate with individually pierceable foil sealed wells. For use with Illumina instruments.
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QIAseq FX DNA Library Kit (24)
Buffers and reagents for DNA fragmentation (including end repair and A-addition), ligation and library amplification; for use with Illumina instruments; includes a plate containing 24 combinatorial dual index adapters with different bar codes (pierceable foil seal, allowing usage of defined parts of plate)
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180473
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QIAseq FX DNA Library Kit (96)
Buffers and reagents for DNA fragmentation (including end repair and A-addition), ligation and library amplification; for use with Illumina instruments; includes a plate containing 96 combinatorial dual index adapters with different bar codes (pierceable foil seal, allowing usage of defined parts of plate)
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180475
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QIAseq 1-Step Amplicon Library Kit (12)
For 12 reactions: 1-Step Amplicon Enzyme Mix, 4x 1-Step Amplicon Buffer, Primer Mix Illumina Library Amp, HiFi PCR Master Mix, RNase-Free Water. Adapters sold separately.
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180412
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QIAseq 1-Step Amplicon Library Kit (96)
For 96 reactions: 1-Step Amplicon Enzyme Mix, 4x 1-Step Amplicon Buffer, Adapter Plate 96-plex Illumina, Primer Mix Illumina Library Amp, HiFi PCR Master Mix, RNase-Free Water
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180415
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GeneRead DNA Library I Core Kit (48)
For 48 reactions: Buffers and reagents for end-repair, A-Addition, and ligation, for use with Illumina instruments
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GeneRead DNA I Amp Kit (100)
For 100 reactions: Ready-to-use library amplification master mix and primer mix, for use with Illumina instruments
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GeneRead Adapter I Set 12-Plex (72)
For 72 reactions: 12 barcoded adapters for ligation to DNA library, for use with Illumina instruments
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180984
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QIAseq and GeneRead Library Prep Kits は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。
ライブラリーDNAの優れた収量|ハイフィデリティ増幅は配列の偏りが最小限で低いエラー率を実現|正確なサイズ選択|より高いシークエンスカバレッジ|均一なカバレッジ分布をもつDNAライブラリーを高収量で作成|Illumina装置と互換性のあるDNAライブラリーのための最適化されたワークフロー|Ion Torrent装置と互換性のあるDNAライブラリーのための最適化されたワークフロー|
大腸菌株DH10BのゲノムDNA(1 μg)をCovaris 装置で剪断し、GeneRead Library Prep (I) Kitおよび他社のキットを用いてIllumina装置と互換性のあるDNAライブラリーを作成した。ライブラリーは18 μlのBuffer EBで溶出し、ライブラリー濃度は定量PCRで測定された。|GCリッチなBordetella pertussisのgDNA(GC含量67.7 %)とATリッチのStreptobacillus moniliformisのgDNA(GC含量 26.3 %)のミックスをプールし、GeneRead Library (I) Core Kitを用いてIllumina装置と互換性のあるDNAライブラリーを作成し、GeneRead HiFi Polymeraseを含むGeneRead Library (I) Amp Kitあるいは他社のキットで増幅した。増幅したライブラリーは、Illumina MiSeqを用いてシークエンスし、フィデリティとシークエンスカバレッジをGalaxyプラットフォームで分析した。低いエラー率と高い累積シークエンスカバレッジは、 GeneRead Library (I) Amp KitがK社のキットと比較して優れたライブラリー増幅を行なうことを証明している。|GeneRead Size Selection Kitはライブラリー作成前に、アダプターダイマーとアダプターモノマーを効率的に除去する。サイズ選択後のIllumina装置に互換性のあるライブラリーフラグメントの正確なサイズ分布を示す上記データを、スケールアップした画像が挿入図内に示されている。FU:蛍光強度ユニット。|GCリッチなBordetella pertussis のgDNA(GC含量 67.7%)とATリッチな Streptobacillus moniliformis のgDNA(GC含量26.3%)のミックスをプールし、GeneRead Library Prep (I) Kitを用いてIllumina装置と互換性のあるDNAライブラリーを作成し、GeneRead HiFi Polymeraseを含むGeneRead Library Amp (I) Kitあるいは他社のキットで増幅した。増幅したライブラリーは、Illumina MiSeqを用いてシークエンスし、フィデリティとシークエンスカバレッジをGalaxyプラットフォームで分析した。K社のキットと比較して、GeneRead Library Prep KitはDNAのGCおよびATリッチ領域で高いシークエンスカバレッジを示した。|[A] ゲノムDNA(50 ng)をCovaris装置により剪断後、GeneRead Library Prep (I) Kitを用いてIllumina装置と互換性のあるDNAライブラリーを作成した。 Illumina MiSeq装置を用いたシークエンシングは均一なカバレッジ分布でカバレッジの中央値は49倍であった。[B] E. coli DH10B株からのゲノムDNA(1 μg)を剪断後、GeneRead Library Prep (L) Kitあるいは他社のキットを用いてIon Torrentと互換性のあるDNAライブラリーを作成した。10サイクルの増幅後、両ライブラリーを Ion Torrent PGM装置でシークエンスし、累積正規カバレッジを解析した。|GeneRead Library Prep (I) Kitはクリーンアップステップを減らし、オプションでハイフィデリティ増幅を含む至適化済みワンチューブプロトコールを使用している。ライブラリーDNA作成に必要なマニュアルでの作業時間とトータル時間は、I社のライブラリー作成システムと比較すると著しく短縮される。|GeneRead Library Prep (L) Kitはクリーンアップステップを減らし、オプションでハイフィデリティ増幅を含む至適化済みワンチューブプロトコールを使用している。ライブラリーDNA作成に必要なマニュアルでの作業時間とトータル時間は、L社のライブラリー作成システムと比較して顕著に短縮されている。|
パフォーマンス
High yields of library DNA with uniform coverage distribution
GeneRead Library Prep Kits provide an efficient and optimized workflow to reproducibly generate high yields of DNA library, with minimal sequence bias and low error rates, for use on NGS platforms from Illumina or the Ion Torrent instrument from Life Technologies. Highly efficient ligation reactions and an optional, high-fidelity amplification step ensure superior library yields with uniform coverage distribution, even from as low as 50 ng starting material (see figures High yields of library DNA with uniform coverage distribution and Superior yields of library DNA).
Low error rates with minimal sequence bias
To ensure maximum yields from minimum amounts of starting material, GeneRead Library Prep Kits include an innovative high-fidelity master mix that includes GeneRead HiFi Polymerase for an optional amplification step. GeneRead HiFi Polymerase is a unique, highly specific and processive enzyme that delivers accurate amplification of library DNA with low error rates and minimum bias (see figure Low error rates with minimal sequence bias due to high-fidelity amplification).
Lower sequence bias when amplifying GC- and AT-rich regions
In standard PCR amplification procedures, regions of DNA with high AT or GC content can result in little or no amplification, leading to misleading sequence data and NGS results. The GeneRead HiFi Polymerase, together with its unique buffer formulation, ensures uniform amplification of genomic regions that contain highly variable GC content, thereby ensuring even coverage in subsequent sequencing reactions (see figure Better sequence coverage).
原理
GeneRead Library Prep Kits use an optimized, one-tube workflow to reproducibly generate high yields of DNA library for use on NGS platforms from Illumina or the Ion Torrent instrument from Life Technologies. The fast, one-tube procedure uses fewer cleanup steps than library preparation workflows from other suppliers and includes an optional, high-fidelity library amplification step. GeneRead Library Prep Kits save time and effort while minimizing the variability caused by handing, as well as the risk of contamination (see figures Optimized workflow for Illumina-compatible DNA libraries and Optimized workflow for Ion Torrent-compatible DNA libraries).
操作手順
Procedure for generating Illumina-compatible DNA libraries
Samples consisting of longer DNA fragments are first sheared into a random library of fragments that are a median fragment size of 300 bp (when using the Illumina MiSeq instrument, version 1), or 500 bp (when using the Illumina MiSeq instrument, version 2), in length. Following fragmentation, the ends of the DNA fragments are repaired and an A-overhang is added at the 3'-end of each strand. Afterwards, adaptors, which are necessary for amplification and sequencing, are ligated to both ends of the DNA fragments. Barcode adapters, which contain a unique identifying sequence, are also available with the GeneRead Library Prep (I) Kit and enable multiplex sequencing reactions to be performed. Fragments are then size selected and purified. Cleanup and size selection can be done using the GeneRead Size Selection Kit (cat. no. 180514), which allows precise, column-based size selection of DNA (see figure Precise size selection). To ensure maximum yields from minimum amounts of starting material, an optional high-fidelity amplification step can also be performed.
Procedure for generating Ion Torrent-compatible DNA libraries
Samples consisting of longer DNA fragments are first sheared into a random library of fragments that are a median fragment size of 400 bp (when using the Ion Torrent PGM instrument), or 200 bp (when using the Ion Proton instrument), in length. Following fragmentation, the ends of the DNA fragments are repaired. Afterwards, adaptors, which are necessary for amplification and sequencing, are ligated to both ends of the DNA fragments. Barcode adapters, which contain a unique identifying sequence, are also available with the GeneRead Library Prep (L) Kit and enable multiplex sequencing reactions to be performed. Fragments are then size selected and purified. To ensure maximum yields from minimum amounts of starting material, an optional high-fidelity amplification step can be performed.
アプリケーション
GeneRead Library Prep Kits allow fast and efficient preparation of DNA libraries that are optimized for use on NGS platforms from Illumina and the Ion Torrent instrument from Life Technologies.
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For preparation of DNA libraries for next-generation sequencing (NGS) applications that use Illumina instruments
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Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
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Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
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For the preparation, size selection, and purification of DNA libraries for NGS applications
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画像
ライブラリーDNAの優れた収量
大腸菌株DH10BのゲノムDNA(1 μg)をCovaris 装置で剪断し、GeneRead Library Prep (I) Kitおよび他社のキットを用いてIllumina装置と互換性のあるDNAライブラリーを作成した。ライブラリーは18 μlのBuffer EBで溶出し、ライブラリー濃度は定量PCRで測定された。
ハイフィデリティ増幅は配列の偏りが最小限で低いエラー率を実現
GCリッチなBordetella pertussisのgDNA(GC含量67.7 %)とATリッチのStreptobacillus moniliformisのgDNA(GC含量 26.3 %)のミックスをプールし、GeneRead Library (I) Core Kitを用いてIllumina装置と互換性のあるDNAライブラリーを作成し、GeneRead HiFi Polymeraseを含むGeneRead Library (I) Amp Kitあるいは他社のキットで増幅した。増幅したライブラリーは、Illumina MiSeqを用いてシークエンスし、フィデリティとシークエンスカバレッジをGalaxyプラットフォームで分析した。低いエラー率と高い累積シークエンスカバレッジは、 GeneRead Library (I) Amp KitがK社のキットと比較して優れたライブラリー増幅を行なうことを証明している。
正確なサイズ選択
GeneRead Size Selection Kitはライブラリー作成前に、アダプターダイマーとアダプターモノマーを効率的に除去する。サイズ選択後のIllumina装置に互換性のあるライブラリーフラグメントの正確なサイズ分布を示す上記データを、スケールアップした画像が挿入図内に示されている。FU:蛍光強度ユニット。
より高いシークエンスカバレッジ
GCリッチなBordetella pertussis のgDNA(GC含量 67.7%)とATリッチな Streptobacillus moniliformis のgDNA(GC含量26.3%)のミックスをプールし、GeneRead Library Prep (I) Kitを用いてIllumina装置と互換性のあるDNAライブラリーを作成し、GeneRead HiFi Polymeraseを含むGeneRead Library Amp (I) Kitあるいは他社のキットで増幅した。増幅したライブラリーは、Illumina MiSeqを用いてシークエンスし、フィデリティとシークエンスカバレッジをGalaxyプラットフォームで分析した。K社のキットと比較して、GeneRead Library Prep KitはDNAのGCおよびATリッチ領域で高いシークエンスカバレッジを示した。
均一なカバレッジ分布をもつDNAライブラリーを高収量で作成
[A] ゲノムDNA(50 ng)をCovaris装置により剪断後、GeneRead Library Prep (I) Kitを用いてIllumina装置と互換性のあるDNAライブラリーを作成した。 Illumina MiSeq装置を用いたシークエンシングは均一なカバレッジ分布でカバレッジの中央値は49倍であった。[B] E. coli DH10B株からのゲノムDNA(1 μg)を剪断後、GeneRead Library Prep (L) Kitあるいは他社のキットを用いてIon Torrentと互換性のあるDNAライブラリーを作成した。10サイクルの増幅後、両ライブラリーを Ion Torrent PGM装置でシークエンスし、累積正規カバレッジを解析した。
Illumina装置と互換性のあるDNAライブラリーのための最適化されたワークフロー
GeneRead Library Prep (I) Kitはクリーンアップステップを減らし、オプションでハイフィデリティ増幅を含む至適化済みワンチューブプロトコールを使用している。ライブラリーDNA作成に必要なマニュアルでの作業時間とトータル時間は、I社のライブラリー作成システムと比較すると著しく短縮される。
Ion Torrent装置と互換性のあるDNAライブラリーのための最適化されたワークフロー
GeneRead Library Prep (L) Kitはクリーンアップステップを減らし、オプションでハイフィデリティ増幅を含む至適化済みワンチューブプロトコールを使用している。ライブラリーDNA作成に必要なマニュアルでの作業時間とトータル時間は、L社のライブラリー作成システムと比較して顕著に短縮されている。
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