DNeasy Plant Maxi Kit

植物細胞および組織、菌類からトータル細胞性DNA (最大260 µg)を分離

  • 夾雑物や酵素阻害物を含まない高純度のDNA
  • 即使用可能なDNAの迅速分離
  • 有機溶媒抽出およびエタノール沈殿不要

DNeasy Plant Maxi Kit は、シリカをベースにしたスピンカラムフォーマットでDNAを迅速かつ簡単に精製します。サンプルにより収量は異なりますが、一般的には30~260 µgの高品質DNA が得られます。

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DNeasy Plant Maxi Kit (24)
24 DNeasy Maxi Spin Columns, 24 QIAshredder Maxi Spin Columns, RNase A, Buffers, Collection Tubes (50 ml)
68163
$380.00
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The DNeasy Plant Maxi Kit is intended for molecular biology applications. This product is not intended for the diagnosis, prevention, or treatment of a disease.
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DNeasy Plant and DNeasy 96 Plant procedures.|PCR performance.|PCR analysis.|RAPD analysis.|DNA purity from oak leaves and pine needles.|
|DNA was isolated from arabidopsis leaves using either CTAB lysis (CTAB) or the DNeasy Plant Maxi Kit (DNeasy). Amplification reactions were prepared using purified DNA (1: 50 pg; 2: 100 pg) and primers to the Akin 10 gene. M: markers. (Data kindly provided by Alain Lecharny, Institut de Biotechnologie des Plantes, UMR CNRS-UPS Orsay, France.)|DNA (10 ng) from the indicated leaves or needles was amplified using universal primers for the noncoding intergenic spacer between the tRNA genes trnL (UAA) 5' exon and trnL (UAA) 3' exon of cpDNA (Taberlet, P. et al. (1991) Plant Mol. Biol. 17, 1105). M: 100 bp ladder.|DNA (50 ng) from leaves of the indicated in vitro-propagated sunflower (Helianthus) species was amplified using a 10-base RAPD primer and separated on a 1.5% agarose gel. M: 100 bp ladder. (Data kindly provided by H. J. Henn, Institute of Agricultural Botany, University of Bonn, Germany.)|Spectrophotometric scans (220–320 nm) of DNA isolated from pine needles using the method of Dellaporta, CTAB, or the DNeasy Plant Mini Kit. Pure DNA typically shows a symmetrical peak at 260 nm and a smooth profile. Polysaccharides and other secondary metabolites, often copurified with plant DNA isolated using traditional methods, can interfere with OD readings (A260/ A280), leading to errors in determination of concentration and purity.|
Performance

DNeasy Plant Maxi Kit は、DNA精製が困難な材料を含む様々な植物種および組織から、高品質のDNAを効率良く、しかも迅速に分離できます(表 “DNeasy Plant Kitで処理した植物種のリスト”)。新鮮、凍結および乾燥サンプルの全てに適応可能です。この最適なDNeasy Plant 操作法では、QIAshredder Maxi Spin Columnを使用します。これは、細胞片を効率的に除去して溶解後のサンプル処理を容易にするユニークなろ過ホモジナイゼーションカラムです。

DNeasy Kitsで処理した植物種のリスト

Abies alba(シルバーモミ) Nicotiana tabacum(タバコ)
Aesculus hippocastanum (セイヨウトチノキ) Oryza sativa(イネ)4
Arabidopsis thaliana (シロイヌナズナ) Pelargoniumsp.(ゼラニウム)4
Avenasp. (カラスムギ) Petunia sp.4
Brassica napus(セイヨウアブラナ) Pinus sylvestris(スコッチマツ)、P. brutia5
Brassica oleracea(コールラビ) Populus tremula(ポプラ)
Chicorium endivia(チコリー) Pseudotsuga menziesii (ダグラスモミ)
Citrullini lanatus (スイカ) Quercus roburQ. petrea (カシ)6,7
Egeriasp. Rhododendron sp.2,4
Fagus sylvatica(ブナ)1 Rubus idaeus(キイチゴ)
Helianthus spp.(ヒマワリ) Solanum tuberosum(ジャガイモ)
Hordeum vulgare(オオムギ)2 Sphagnum palustre (コケ)
Humulus sp.(ホップ) Spinacia oleracea(ホウレンソウ)
Hydrilla sp. Taxus baccata(イチイ)
Kalanchoe spp. Triticum aestivum(コムギ)4
Lupinus sp. Ulmus glabra(ニレ)6
Lycopersicon esculentum(トマト)3 Vitis spp.(ブドウ)6
Myriophyllum sp. Zea mays(トウモロコシ)

若い葉あるいは針葉(および表記の組織)を採取後、直ちに凍結した。その後、DNeasy Plant Mini KitでDNA精製を行なった。1ブナの実、2乾燥した葉、3カルス、4成植物由来の葉、5胚乳、6炭水化物豊富な旧葉、7芽。菌類を含む他の種からのDNA分離に関する詳細は、テクニカルサポートにお問い合わせください。

通常、最高1 gの湿重量のサンプル量と、500 µl~2 mlの溶出量で30~260 µgのDNAが得られます。DNA収量はゲノムのサイズ、倍数性、細胞数および植物の発育段階に依存しており、異種間および組織間で変動します。低い範囲値はアラビドプシスに、高い範囲値はコムギにそれぞれ対応します。DNeasyで精製したDNAの吸光スペクトルは260 nmで左右対称のピークを示し(図、“葉/針葉から精製したDNAの純度”と“マツ葉から精製したDNAの純度”)、このDNAが酵素阻害物質のような夾雑物を含まないことを実証しています。精製したDNAは、様々な用途に使用することができます(図"PCR性能"、"PCR分析"、および "RAPD分析")。

Principle

DNeasy Plant Kit は、植物組織や細胞および菌類から高純度の全細胞DNAを分離するために最適なシリカメンブレンテクノロジーと簡便なスピンカラム法を使用しています。DNeasyテクノロジーにより臭化セチルトリメチルアンモニウム(CTAB)、フェノールやクロロホルム抽出のような手間のかかるDNA精製操作の必要はなくなりました。DNeasy調製法を用いればアルコール沈殿なしに精製したDNAをすぐに使用できます。DNeasyサンプル調製法はQIAGENがライセンスを有しています。

Procedure

サンプルはまず機械的に破砕され、次いで化学的に溶解されます(フローチャート "DNeasy PlantおよびDNeasy 96 Plant操作手順"参照)。RNAは溶解操作の際にRNase分解により除去されます。細胞片、沈殿したタンパク質および多糖類を除去し、QIAshredder Maxi Spin Columnを通過させるために遠心操作をし、サンプルをホモジナイズします。バッファー条件を調整したサンプルをDNeasy Plant Maxi Spin Column にロードします。短い遠心操作により、DNAは選択的にシリカメンブレンに結合し、夾雑物は通過します。残留した夾雑物や酵素阻害物質は1回または2回の洗浄ステップで除去されます。その後、高純度のDNAが水または低塩濃度溶出バッファーで溶出され、即使用可能となります。

Applications

DNeasy Plant Maxi Kitは、以下を含む植物組織からDNAを精製することができます。

植物細胞
植物組織
菌類
Feature
Specifications
Applications PCR, real-time PCR, blotting
Elution volume 500 µl – 2 ml
Format Spin column
Main sample type Plant samples
Processing Manual
Purification of total RNA, miRNA, poly A+ mRNA, DNA or protein DNA
Sample amount <1 g
Technology Silica technology
Time per run or per prep <2 hours
Yield 30–260 µg

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References
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Images
DNeasy Plant and DNeasy 96 Plant Procedures
DNeasy Plant and DNeasy 96 Plant procedures.
Comparison of CTAB and DNeasy Methods: PCR Performance
PCR performance.
DNA was isolated from arabidopsis leaves using either CTAB lysis (CTAB) or the DNeasy Plant Maxi Kit (DNeasy). Amplification reactions were prepared using purified DNA (1: 50 pg; 2: 100 pg) and primers to the Akin 10 gene. M: markers. (Data kindly provided by Alain Lecharny, Institut de Biotechnologie des Plantes, UMR CNRS-UPS Orsay, France.)
PCR analysis of DNA from Different Plant Species
PCR analysis.
DNA (10 ng) from the indicated leaves or needles was amplified using universal primers for the noncoding intergenic spacer between the tRNA genes trnL (UAA) 5' exon and trnL (UAA) 3' exon of cpDNA (Taberlet, P. et al. (1991) Plant Mol. Biol. 17, 1105). M: 100 bp ladder.
RAPD Analysis of Sunflower Species
RAPD analysis.
DNA (50 ng) from leaves of the indicated in vitro-propagated sunflower (Helianthus) species was amplified using a 10-base RAPD primer and separated on a 1.5% agarose gel. M: 100 bp ladder. (Data kindly provided by H. J. Henn, Institute of Agricultural Botany, University of Bonn, Germany.)
DNA Purity Depends on Isolation Method
DNA purity from oak leaves and pine needles.
Spectrophotometric scans (220–320 nm) of DNA isolated from pine needles using the method of Dellaporta, CTAB, or the DNeasy Plant Mini Kit. Pure DNA typically shows a symmetrical peak at 260 nm and a smooth profile. Polysaccharides and other secondary metabolites, often copurified with plant DNA isolated using traditional methods, can interfere with OD readings (A260/ A280), leading to errors in determination of concentration and purity.