QuantiNova Pathogen +IC Kit

内部コントロールを含むウイルスRNA/DNAと細菌DNAの超高速同時検出

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商業用のバルク製品、カスタマイズ製品、最適化された製品が必要ですか? QIAGENでは、ロジスティクスやコンプライアンスなどのサポートも行っています。QIAGEN Strategic Partnerships & OEMにお問い合わせください。

QuantiNova Pathogen + IC Kit (100)

Cat. No. / ID:   208652

100 x 20 µl反応の場合:1 x 500 µl QuantiNova Pathogen Master Mix、1 x 500 µl Yellow Template Dilution Buffer、1 x 250 µl ROX Reference Dye、1 x 1.9 µl RNase-Free Water、1 x 1500 µl Nucleic Acid Dilution Buffer、1 x 100 µl Internal Control RNA、1 x 100 µl Internal Control DNA、1 x 200 µl IC Probe Assay
NT$12,560.00
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KitAssay
QuantiNova Pathogen +IC Kit
QuantiNova IC Assay
Reactions
100 x 20 µl
500 x 20 µl
QuantiNova Pathogen +IC Kit は、分子生物学的アプリケーションでの使用を想定しています。本製品は、疾病の診断、予防、治療を目的としたものではなく、単独でも他の製品との組み合わせでも、そのような用途に対して検証されていません。
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特徴

  • 追加料金なしで事前に最適化した内部コントロール
  • 病原体ターゲットと内部コントロールの両方を検出する4プレックス (RT)-PCR
  • 室温でセットアップできる便利な独自の二段階ホットスタートの手順
  • マスターミックスに含まれる安定したRTにより、1つのプロトコールで実験を実施することができます
  • エラーを最小限にする視覚的ピペッティングコントロール

製品詳細

QuantiNova Pathogen +IC Kitは、配列特異的プローブを用いて病原体核酸を高感度かつ迅速なリアルタイム (RT-) PCRで検出するように設計されています。このキットには、ユーザーが調べたい病原体ターゲット(ウイルス、細菌、真菌など)とQuantiNova Internal Control (IC)RNAまたはDNAの4プレックスリアルタイム検出用試薬が含まれています。ICとアッセイの両方が、抽出または増幅コントロールとして使用できるように含まれているので、陰性検出結果を正しく解釈できます。さらに、迅速ですぐに使用できるキットにより、一連のワークフローが、自動化され、室温での反応セットアップが可能であり、取り扱いと安全基準を向上させる視覚的ピペッティングコントロールにも対応しています。マスターミックスは2~8℃で保存でき、研究活動において非常に便利です。

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パフォーマンス

QuantiNova Pathogen +IC Kitは、マルチプレックス時に感度を損なうことなく、広い直線範囲でウイルスRNAまたはDNAターゲットとQuantiNova Internal Control (IC)を同時に検出することができます。このプロトコールは、多くのサイクラーで信頼性の高い超高速サイクリング実験を行えるように開発されました。病原体ターゲットとIC RNAまたはDNAを組み合わせて増幅すると、陰性結果の正しい解釈が保証され、実験における解釈ミスを可能な限り避けることができます。付属のICは核酸精製や増幅プロセスのモニターに使用でき、視覚的ピペッティングコントロールにより、手動またはロボットによるピペッティング後の目視チェックが可能になります(図 ピペッティングコントロールによる正確な反応セットアップ参照)。独自の二段階ホットスタートにより、酵素反応の性能を損なうことなく、室温で手動または自動の反応セッ トアップを行うことができます(図 新しいQuantiNova二段階ホットスタートメカニズムの原理参照)。QuantiNova Pathogen +IC Kitは阻害剤存在下でも堅牢であり、変性したプライマー/プローブの使用が可能です。このキットは迅速で内部コントロールによって制御されたマルチプレックスqPCR実験を行うこと可能であり、ワークフローの効率と信頼性を高めます。

図参照

原理

陰性結果の正しい解釈を通じて実験結果の解釈ミスの回避を向上させることができるように、QuantiNova Pathogen +IC Kitには、ユーザーが調べたい病原体ターゲットのマルチプレックスリアルタイム検出用試薬が内部コントロールとともに含まれています。ターゲット遺伝子とコントロール遺伝子を同じ反応で増幅することによって起こり得る取り扱いエラーが最小限に抑えられ、信頼性が向上します。付属のICを使用して増幅が成功したか(PCR阻害物質の影響など)確認することや、核酸精製の前にサンプルに添加して精製プロセスの効率とPCRまたはRT-PCR増幅の両方の反応をコントロールすることができます。リアルタイムPCRと1ステップRT-PCRを同じプロトコールで同時に実行することができます。また、このキットは二段階ホットスタートを使用しています(図 新しいQuantiNova二段階ホットスタートメカニズムの原理参照)。これには、50°CでのHotStaRT-Script逆転写酵素と95°CでのPCRポリメラーゼ両方の熱媒介活性化が含まれます。低温では、HotStaRT-ScriptがRT-Blocker分子と複合体を形成し、不活性化状態を維持します。50°Cではこの複合体は解離し、活性のあるHotStaRT-Script酵素が放出されます。QuantiNova DNA Polymeraseは、QuantiNova Antibodyと新しい添加剤であるQuantiNova Guardによって不活性状態に保たれ、複合体を安定化させます。このように、ホットスタートによって反応が厳密に制御され、非特異的にアニーリングされたプライマーやプライマー–ダイマーの伸長を防ぐことができます。温度を95°Cまで上げると2分以内に、QuantiNova AntibodyとQuantiNova Guardが変性し、QuantiNova DNA Polymeraseが活性化され、PCR増幅反応が可能になります。この独自の二段階ホットスタートにより、反応セットアップは室温で少なくとも1時間は安定した状態を保つことができ、アーチファクトの増幅を防ぐとともに、自動化反応のセットアップも容易になります。
さらに、キットに付属のマスターミックスには不活性の青色色素が含まれており、これは、逆転写やリアルタイムPCR反応を阻害しませんが、チューブやウェル内の視認性に寄与します。QuantiNova Yellow Template Dilution Bufferには不活性の黄色色素が含まれています。QuantiNova Yellow Template Dilution Bufferで希釈したテンプレート核酸をマスターミックスに添加すると、溶液の色が青色から緑色に変化し、正しいピペッティングと反応のセットアップを視覚的に確認することができます(図 内蔵ピペッティングコントロールが示す正確な反応セットアップ参照)。マスターミックスには、K+イオンとNH4+イオンがバランスよく配合されているほか、独自の合成Factor MPが含まれており、これらがともに、プライマーとプローブの核酸テンプレートへの安定的かつ効率的なアニーリングを促進するため、マルチプレックス反応であっても高いPCR効率が得られます(図 安定的かつ効率的なアニーリングを促進する独自のマルチプレックスPCRバッファー参照)。特別に開発されたPCRバッファーにはQ-Bondが含まれており、変性、アニーリング、伸長時間を大幅に短縮します(図 アニーリング中の高速サイクリングのメカニズム参照)。キットに付属のQuantiTect Nucleic Acid Dilution Bufferは、希釈および反応セットアップ時にRNAおよびDNAスタンダードを安定化し、チューブやピペットチップなどのプラスチック表面での核酸のロスを防ぎます。マスターミックスは2–8° Cで最長12ヶ月間保存でき、反応は室温で少なくとも1時間は安定しているため、自動化されたプロトコールにも便利です。

図参照

操作手順

QuantiNova Pathogen +IC Kitは、ユーザーが調べたい病原体ターゲットとICを検出するシンプルな手順を提供します。このキットには、ウイルスRNA(1ステップ RT-PCR)またはウイルス、細菌、真菌のDNAを同時にリアルタイム検出(PCR)するための、すぐに使えるマスターミックスが含まれています。反応条件やサイクリング条件を最適化する必要はなく、セットアップには、付属のマスターミックスと病原体アッセイ(プライマーとプローブ)、付属のInternal Control Assay、IC DNAまたはRNAを混合するだけです。あるいは、ICをサンプル精製手順に加えることもできます。その後、サンプルのDNAまたはRNAを加え、任意のサイクラーで反応を開始します。キットのハンドブックには、さまざまなサイクラーでTaqManプローブを使用できるように最適化されたプロトコールが含まれています。視覚的ピペッティングコントロールにより、手動またはロボットによるピペッティング後の目視チェックが可能になり、ヒューマンエラーが最小限に抑えられます。独自の二段階ホットスタートにより、酵素の性能を損なうことなく、室温で手動または自動の反応セットアップが可能です。各QuantiNova Pathogen +IC KitにはInternal Control AssayとIC DNAまたはRNAが含まれており、反応ミックスに直接添加して増幅コントロールとして使用することができます。また、ICを精製プロセスに添加して、精製プロセスと増幅の両方をコントロールすることもできます。キットに含まれるInternal Control Assayはレポーター色素としてMAXを使用します。あるいは、Cy5アナログで標識したInternal Control Assayもアクセサリーとして利用することができます。

アプリケーション

QuantiNova Pathogen +IC Kitは、ICを含む病原体DNAおよび/またはRNA同時検出用の配列特異的プローブを使用する高感度リアルタイムPCRまたは1ステップRT-PCRを行うことができます。このキットは室温での自動反応セットアップが可能であり、幅広いリアルタイムサイクラーで使用できます。

裏付けデータと数値

リソース

セレクションガイド (1)
キットハンドブック (2)
QuantiNova LNA Probe PCR Handbook
MSDS (1)
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
クイックスタートプロトコール (2)
Safety Data Sheets (1)
Certificates of Analysis (1)