HiPerFect Transfection Reagent

真核細胞へのsiRNAおよびmiRNAトランスフェクション

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HiPerFect Transfection Reagent (0.5 ml)

Cat. No. / ID:   301704

HiPerFect Transfection Reagent for up to 166 transfections in 24-well plates or up to 666 transfections in 96-well plates
Quantity
0.5 ml
1 ml
4 ml (4 x 1 ml)
100 ml
HiPerFect Transfection Reagentは分子生物学的アプリケーション用であり、疾病の診断、予防、あるいは治療に使用することはできません。

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特徴

  • 低濃度siRNAで効率的なトランスフェクション
  • 細胞生存率が高く初代細胞でも効果的なトランスフェクション
  • 浮遊細胞やマクロファージへの効果的なトランスフェクション
  • TransFect Protocol Databaseで細胞に最適なプロトコール
  • miRNA MimicあるいはmiRNA Inhibitorの効率的なトランスフェクション

製品詳細

HiPerFect Transfection Reagent は陽イオン性および中性脂質のユニークなブレンドで、低濃度のsiRNA を用いた場合でも効果的なsiRNA 取り込みと細胞内でのsiRNA 遊離により高い遺伝子ノックダウン効果を実現します。HiPerFect Transfection Reagent はsiRNA だけでなく、miRNA Mimics、Inhibitorのロースループット/ハイスループットなトランスフェクションにも最適です。HiPerFect Transfection Reagent を用いた細胞特異的なプロトコールはTransFect Protocol Databaseでご覧いただけます。

パフォーマンス

様々な浮遊細胞株および未分化および分化したマクロファージへのHiPerFect Reagent を用いたsiRNAトランスフェクションがテストされました。多くの細胞株でターゲット遺伝子発現のノックダウンを伴うトランスフェクションが行なわれました(表1)。HiPerFect Reagent によるトランスフェクションは、これらの細胞タイプの多くでエレクトロポレーションより優れた方法です。

表1 HiPerFect Reagentプロトコールを用いてトランスフェクションに成功した細胞株
細胞株 細胞タイプ siRNA濃度 ノックダウン
K562 ヒト慢性骨髄性白血病 5 nM 85%
Jurkat ヒトT細胞 75 nM 83%
D1.1 ヒトT細胞 50 nM 84%
RAW 264.7 マウスマクロファージ 25 nM 77%
J774.A1 マウスマクロファージ 50 nM 97%
PMA分化THP-1 ヒト 急性単球白血病 5 nM 82%
MEL マウス赤白血病 5~20 nM 50~70%

HiPerFect Reagent を用いたトランスフェクションに適さない細胞株は表2をご覧ください。

表2 HiPerFect Reagentプロトコールを用いてトランスフェクションできない細胞株
細胞株 細胞の種類
Raji ヒトB細胞
U937 ヒト・マクロファージ
Molt4 ヒトT細胞
Molt14 ヒトT細胞
HL60 前骨髄球性白血病細胞株
E6.1 ヒトT細胞

1~50 nMのsiRNA濃度の範囲で効果的なノックダウン(>80%) 結果が得られました(図“ HiPerFect Reagent による効果的なCDC2ノックダウン”)。1 nM siRNAのトランスフェクションでは86%のノックダウン効果が得られ、5 nM siRNAではノックダウン効率は96%に増加しました。RNAi実験の目的により、最適なsiRNA濃度は1 nM (オフターゲット効果のリスクが最小限で効果的なノックダウン;図 “ NHEKの効率的なトランスフェクション”参照)か5 nM(より高いノックダウン効果)を使用できます。

図参照

原理

siRNAのトランスフェクションは、そのsiRNAが相同性のない遺伝子あるいは部分的にホモロジーを有する遺伝子に影響を与えるオフターゲット効果を引き起こすことがあります。低濃度のsiRNAを使用することにより、RNAi 実験で誤った結果につながるオフターゲット効果を大幅に回避できることが示唆されてています。HiPerFect Transfection Reagent を用いた場合、わずか10 pMのsiRNAでも効果的なトランスフェクションおよびノックダウン効果が観察されることがありました。HiPerFect Transfection Reagent は、幅広い範囲のsiRNA濃度に対して効率的なsiRNAトランスフェクションを実現するため、研究者が必要とするsiRNA濃度を選択することができます。本試薬は様々な細胞株 (HeLa、HeLa S3、HEK 293、NIH/3T3、Huh-7、HepG2、MCF-7、HUVEC、NHLFなど) へのトランスフェクションに使用できます。

miRNA 研究

microRNA(miRNA)は、siRNAに類似した特徴を持つ内因性のsmall RNA分子に分類されています。miRNAは、発生、分化、アポトーシスのような様々な生物学的なプロセスにおいて重要な役割を果たしています。合成miRNA mimic あるいはmiRNA inhibitorのトランスフェクションは、標的遺伝子や特別な miRNAの役割を解明するために使用される手法です。miRNA mimic は化学的に合成されたmiRNAで、細胞へのトランスフェクション後は内在性のmiRNAと同じ挙動を示します。miRNA inhibitor は、miRNAを特異的に阻害する一本鎖の修飾RNAです。miRNA mimic のトランスフェクション後に遺伝子発現が抑制されたり、miRNA inhibitorのトランスフェクション後に発現が増大すれば、miRNAがその標的遺伝子の調節に関与していることの証拠になります。あるいは、様々なパスウェイにおけるmiRNAの役割は、miRNA mimic あるいはmiRNA inhibitorのトランスフェクション後の特異的な表現型を調べることにより研究できます。多数のmiRNA mimic あるいはmiRNA inhibitor のトランスフェクション後に表現型を調べるためには、スクリーニング実験を実施します。HiPerFect Transfection Reagent は真核細胞への効率的なsiRNAトランスフェクション用に開発された試薬で、miRNA mimic やmiRNA inhibitor のロースループット/ハイスループットなトランスフェクションに最適です。

操作手順

HiPerFect Transfection Reagent はすぐに使用できる試薬としてお届けします。 希釈したsiRNA/miRNAに試薬を添加、混和し、インキュベートした後、ピペットで複合体を細胞に添加するだけです。トランスフェクションは血清の存在下で行なえるため、細胞から複合体を除去する必要はありません。 HiPerFect Transfection Reagent Handbookに掲載されているプロトコールだけではなく、お客様の細胞種やプレートまたはディッシュのフォーマットに最適なプロトコールが TransFect Protocol Databaseにあります。データベースから実験に必要なトランスフェクション・プロトコールを検索可能です。実験条件を既存のプロトコールに合わせて調整するよりもデータベースが簡単にお客様のニーズにピッタリ合ったプロトコールを提供してくれるため、時間や労力が軽減できます。細胞や核酸のタイプ、プレートフォーマットを入力するだけで、QIAGENのトランスフェクション用プロトコールを印刷あるいは便利なPDFフォーマットでダウンロードできます。TransFect Protocol Databaseは無料で、登録も不要です。

HiPerFect Transfection Reagent はトランスフェクション実験の24時間前に細胞を蒔いておく一般的なトランスフェクション方法でも使用できます。あるいは96ウェルプレートおよび384ウェルプレートでのreverse transfection用プロトコールも用意しています(HiPerFect Transfection Reagent Handbook参照)。これらのプロトコールでは、細胞の播種およびトランスフェクションを同一日に行なえます。siRNA/miRNAをウェルにスポットし、その後HiPerFect Reagent を添加します。コンプレックス形成後、細胞をウェルに添加します(フローチャート “ HiPerFect Transfection Reagenを用いたReverse transfection”)。迅速で簡便なreverse transfectionは簡単に自動化でき、ハイスループット実験に頻繁に使用できます。

図参照

アプリケーション

 HiPerFect Transfection Reagent は低濃度なsiRNAでも効率的なsiRNAトランスフェクションを実現し、以下のようなアプリケーションに最適です:

  • RNA干渉 (RNAi) 研究
  • miRNA 研究
  • 遺伝子発現および機能解析

裏付けデータと数値

Specifications

FeaturesSpecifications
ApplicationsRNAi studies, gene expression studies
Transfection typeTransient transfection
FeaturesMinimized risk of off-target effects, rapid reverse transfection
Nucleic acidsiRNA, miRNA
TechnologyCationic and neutral lipids
ControlsNot included
Cell typeEukaryotic cells including primary cells
Number of possible transfections333 transfections in 24-well plates / 1 ml reagent

リソース

パンフレット (5)
サイエンティフィック・ポスター (1)
Poster for download
キットハンドブック (2)
For transfection of eukaryotic cells with siRNA and miRNA
MSDS (1)
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
クイックスタートプロトコール (1)
Safety Data Sheets (1)
Certificates of Analysis (1)

FAQ

Which transfection reagent is recommended for transfection of the miScript Target Protectors?
HiPerfect Transfection Reagent is recommended for the transfection of the miScript Target Protector alone. Attractene Transfection Reagent is recommended for DNA/oligo co-transfection.
FAQ ID -2252
Do you have a protocol for long-term, siRNA-mediated gene silencing using HiPerFect Transfection Reagent?

Yes, please follow the Protocol 'Long-Term, siRNA-Mediated Gene Silencing' in the HiPerFect Transfection Reagent Handbook.

 

FAQ ID -972
Do you have transfection data for QIAGEN Transfection Reagents?

QIAGEN Transfection Reagents have been used successfully with many different cell types. For your convenience, we have organized data from researchers who have shared their experimental results with us online in our Transfection Cell Database. Simply type your cell line of interest into the 'Search' field on this page, and find transfection results achieved with various QIAGEN Transfection Reagents.  Please note that QIAGEN cannot verify data supplied from outside sources.

You can also submit your own transfection data and obtain a gift as appreciation.  In addition you can find on our TransFect Protocol Database transfection protocols for specific cell types and plate formats.

FAQ ID -158
Do you have a protocol for transfection of differentiated macrophage cell lines (THP) with siRNA?

Yes, please follow the protocol "Transfection of Differentiated Macrophage Cell Lines, Including THP-1, with siRNA in 24-Well Plates" in the HiPerFect Transfection Reagent Handbook.

-1
How many transfections can I perform with 20 nmol of HPP grade siRNA?

The number of transfections you can perform with 20 nmol HPP grade siRNA depends on the plate format used, the Transfection Reagent, and additional optimization requirements for your specific application.

In general, when using the HiPerFect Transfection Reagent in a 24-well plate format with 37.5 ng of siRNA per transfection you should be able to perform at least 6600 transfections.

If you are interested in other siRNA synthesis scales and purification options, please visit the QIAGEN Custom siRNA Synthesis page and our GeneGlobe data base, where you can find a large selection of pre-designed and validated siRNAs targeted at human, mouse and rat genes.

FAQ ID -367
What is the difference between HiPerFect and HiPerFect HTS?

The composition is confidential.   HTS is a different component from HiPerFect.  HTS works with very low amounts of reagent for transfection, and is specifically adapted for use in high throughput applications.  HiPerFect Transfection Reagent is for siRNA transfection at lower throughput applications.

FAQ ID -3108
Do you have a protocol for the fixation of cells transfected with fluorescently labeled siRNA?

For the fixation of cells transfected with fluorescently labeled siRNA, we would suggest to perform the following protocol:

  1. After transfection, remove the medium from the cells and wash the cells once with PBS.
  2. Incubate the cells for 15 minutes at room temperature with 4% Paraformaldehyde (in PBS, pH 7.0). The cells should be completely covered by this solution (e.g., for a 96-well plate use 50 µl solution/well)
  3. Wash the cells with PBS.

Fixed cells can be stored at 4°C for a few days.

(Note: It is also possible to use chamber slides or object slides for this procedure. Object slides should be coated to provide better growing conditions for cells. Cells can be fixed as described above and then overlayed with embedding medium to allow investigation using a fluorescence microscope. Optimal conditions for this method need to be determined by the user)

 

FAQ ID -793
Do you have a protocol for transfection of suspension cell lines (Jurkat and K562) with siRNA?

Yes, please follow the protocol "Transfection of Suspension Cell Lines, including Jurkat and K562, with siRNA in 24-Well Plates" in the HiPerFect Transfection Reagent Handbook.

 

 

FAQ ID -1250
How can I transfect siRNA into insect cells such as Drosophila melanogaster S2?

Unfortunately, we do not have any data for the transfection of siRNA into insect cells. However, we know about customers who have successfully used Effectene Transfection Reagent for the transfection of plasmid DNA into insect cell lines S2 and Sf9 (see FAQ 397). Since Effectene Transfection Reagent and HiPerFect Transfection Reagent for the transfection of eukaryotic cells with siRNA are both lipid based, there is a chance that HiPerFect will work with insect cells. It is especially suitable for transfection of very low siRNA concentrations, reducing the risk of cell toxicity and off-target knockdown effects.

Alternatively, you can try RNAifect or TransMessenger Transfection Reagent, also lipid-based, for the transfection of siRNA into S2 cells.

We would appreciate any feedback on your results in case you want to give it a try. Please visit our Transfection Cell Survey page to submit your feedback.

FAQ ID -1046
Do you have a protocol for transfection of macrophage cell lines (J774.A1 and RAW 264.7) with siRNA?

Yes, please follow the protocol "Transfection of Macrophage Cell Lines, Including J774.A1 and RAW 264.7, with siRNA in 24-Well Plates" in the HiPerFect Transfection Reagent Handbook.

 

 

FAQ ID -1251
How much dye-labeled siRNA should I use to monitor transfection efficiency when using HiPerfect Transfection Reagent?
The amount of HiPerfect Transfection Reagent and siRNA required for optimal performance may vary, depending on the cell line and gene target. When transfecting fluorescently labeled siRNA (e.g., Alexa Fluor 488 siRNA) for monitoring transfection efficiency under a fluorescent microscope, it may be necessary to increase the amount of siRNA up to 25 nM (without increasing the volume of HiPerFect Reagent), depending on the optical requirements of the microscopic equipment that will be used for detection.
FAQ ID -1058
Do you have a protocol for reverse transfection of adherent cells with siRNA in 384-well plates?

Yes, please follow the protocol 'Reverse Transfection of Adherent Cells with siRNA in 384-Well Plates' in the HiPerFect Transfection Reagent Handbook.

 

FAQ ID -971
Does HiPerFect work for the transfection of miScript miRNA mimics and inhibitors?

HiPerFect Transfection Reagent does work for the transfection of miScript miRNA Mimics and Inhibitors, and the new handbook contains protocols for this application.

 

 

FAQ ID -1984
What is the most reliable transfection reagent for delivering shRNA plasmids and siRNA to cells in culture?

HiPerFect Transfection Reagent is optimized for siRNA transfections and enables effective siRNA uptake and efficient release of siRNA inside cells, resulting in high gene knockdown even when using low siRNA concentrations. For high-throughput siRNA screenings HiPerFect HTS Reagent is a fast and effective newcomer specifically designed to focus on robustness and cost efficiency. For the transfection of shRNA.

Attractene Transfection Reagent should be used for the transfection of shRNA (short-hairpin RNA) vectors for gene silencing experiments to achieve high efficiency. Ease and flexibility of handling enables preparation and storage of transfection complexes making Attractene Reagent suitable for use with automated systems.

http://www.sabiosciences.com/reversetransfection.php

FAQ ID -2777
What is the average molecular weight of a siRNA, and how do I convert uM to ug values?
The Molecular Weight (MW) of a 21 nucleotide double-stranded siRNA molecule is approximately 13-15 ug/nmol. The exact MW depends on the sequence of the siRNA. 20 uM of double-stranded 21 nt siRNA is equivalent to approximately 0.25 ug/ul.
FAQ ID -388